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RASSF1A基因在胃癌中的表达及意义
目的:检测抑癌基因RASSF1A在胃癌细胞株及组织中的表达情况,探讨RASSF1A在胃癌发生发展中的作用及临床意义.方法:用RT-PCR及Western blot检测细胞株、胃癌及癌旁组织中RASSF1A基因及蛋白的表达水平.结果:RASSF 1A在低分化BGC-823细胞中的表达量明显低于中分化SGC-7901细胞,在胃癌中的表达阳性率(43.48％)显著低于癌旁组织(85.51％),且低分化胃癌中的表达低于中高分化,Ⅲ、Ⅳ期胃癌中的表达低于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05).结论:在原发性胃癌组织中,RASSF1A的表达明显缺失或低下,且与肿瘤的分化程度及分期相关.
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RASSF1A基因在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义
目的:探讨RASSF1A基因在肝细胞肝癌(简称肝癌)组织中的表达情况并探讨其临床意义.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测48例肝癌组织及癌旁正常组织RASSFlA基因的转录水平.结果:48例肝癌组织中有32例RASSF1A mRNA表达缺失;但48例相应癌旁组织仅有16例RASSF1A mRNA表达缺失.Logistic逐步回归分析表明患者的年龄、性别、肝功能、血AFP、肝癌分化、肝癌大小、肝癌有无包膜与RASSF1A mRNA是否表达无显著相关性(P>0.05).但在HBsAg(+)患者的肝癌组织及相应的癌旁组织中RASSF1A mRNA的表达率显著低于HBsAS(-)患者(P<0.01,P<0.05).结论:RASSFIA表达缺失在肝癌的发生、发展中起重要的作用.
关键词： 基因表达 肝细胞肝癌 RASSF1A 逆转录-聚合酶链反应 -
抑癌基因RASSF1A在肝癌中表达的研究
目的 研究抑癌基因RASSF1A在肝癌组织以及肝癌细胞株中的表达情况及其与临床相关因素间的关系.方法 收集24例手术切除的肝癌及其癌旁组织以及4株肝癌细胞株(SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703(由国家人类基因组南方中心提供).用RT-PCR和Northern Blot的方法来分析基因RASSF1A在肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况.结果 67%的原发性肝癌组织中未检测到RASSF1A的mRNA,而相应的癌旁组织中仅33%的样本未表达RASSF1A;75%(3/4)肝癌细胞株也未表达RASSF1A.结论 RASSF1A在肝癌中是一潜在的抑癌基因,RASSF1A基因的失表达在原发性肝癌的发生发展中起重要作用,检测RASSF1A的表达情况可用于对肝癌的早期发现和早期诊断,结合临床相关因素对肝癌预后评估也有帮助.
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原发性肝癌中RASSF1A基因表达失活及其临床意义
目的 研究肝癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达情况和由于启动区异常甲基化导致其基因外失活的状况,并分析DNA异常甲基化与肝癌临床相关因素之间的关系.方法 利用RT-PCR和MS-PCR的方法,结合DNA测序和TaqⅠ酶切消化法,分析24例肝癌标本、4株肝癌细胞株中RASSF1A基因的表达情况,以及其基因启动区异常甲基化的情况.采用甲基化抑制剂5'-Aza-CdR处理肝癌细胞株,观察RASSF1A重新表达的情况.结果 66.7%的肝癌组织未表达RASSF1A;4株肝癌细胞株中仅1株检测到RASSF1A的表达.83.3%的肝癌组织及4株肝癌细胞株都发生了异常甲基化,而正常肝组织和正常肝细胞株(L02)中却未发现甲基化.甲基化与肝硬化、乙肝表面抗原、肿瘤分化程度及血管浸润和远处转移有相关性.原来RASSF1A表达失活的3株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5'-Aza-CdR处理后,又重新恢复了表达.结论 基因转录启动区的异常甲基化是导致肝癌中RASSF1A表达失活的主要原因.检测RASSF1A启动区异常甲基化可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现、早期诊断以及预后的判断.
关键词： 抑癌基因 RASSF1A 肝癌 甲基化 5'-Aza-CdR -
稳定表达RASSF1A基因肝癌细胞株的建立
目的建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株.方法真核表达载体pcDNA3.1(+)RASSF1A经阳离子脂质体介导转染肝癌细胞株QGY-7703和Hep3B,通过G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot鉴定目的基因的表达.结果(1)QGY-7703,Hep3B细胞株的G418佳筛选浓度分别为800μg/ml和400μg/ml;(2)QGY-7703和Hep3B细胞株各获得2个稳定表达RASSF1A基因的细胞克隆.结论成功建立了稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株.
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膀胱癌和肾癌中RASSF1A和BLU的甲基化状态
目的 探讨RASSF1A和BLU在膀胱癌和肾癌中启动子甲基化状态及其意义.方法 采用甲基化特异性PCR (MSP) 技术分别在45例膀胱癌组织和相应癌周正常组织、12例肾癌组织及其相应癌周正常组织和3例非肿瘤患者正常膀胱组织中检测RASSF1A和BLU启动子区域的甲基化状态.结果 膀胱癌组织中,RASSF1A和BLU甲基化率分别为55.6% 和31.5%;肾癌组织中, 两基因甲基化率为66.7% 和33.3%.RASSF1A和BLU启动子甲基化状态与膀胱癌临床病理参数无明显相关性(P>0.05).在膀胱癌或肾癌中,RASSF1A和BLU启动子甲基化状态之间均无明显相关性(P>0.05).结论 膀胱癌和肾癌中,RASSF1A和BLU频繁发生高甲基化,高甲基化可能参与膀胱癌和肾癌两类肿瘤的发生.
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肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测对肺癌的诊断价值
[目的]评估肺泡灌洗液(BALF)中SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测(任意阳性)在肺癌诊断中的临床价值.[方法]收集经病理确诊的580例患者,其中肺癌261例,良性肺部疾病293例,非肺部的恶性肿瘤26例.将良性肺部疾病和非肺部的恶性肿瘤患者共319例作为对照组.对全部580例患者的BLAF样本,采用实时荧光PCR(RT-PCR)与测序法检测BALF中SHOX2和RASSF1A两种基因甲基化情况,比较两种检测方法的一致性.以病理诊断为金标准,对277例具有细胞学结果的患者(肺癌组130例,对照组147例),比较采用RT-PCR法SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测与细胞学检测对肺癌诊断的敏感性和特异性.[结果] RT-PCR法与测序法两种方法检测580例患者BLAF样本SHOX2基因和RASSF1A基因甲基化结果的一致率分别是97.5％和98.0％.580例BLAF样本采用RT-PCR法检测SHOX2和RASSF1A基因甲基化任意阳性对肺癌诊断的敏感性和特异性分别是74.3％和87.1％.在277例有细胞学结果的患者中,RT-PCR法SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测任意阳性对肺癌诊断的敏感性和特异性分别为83.2％和92.5％,与细胞学检测(44.6％和98.6％)相比,敏感性显著提高,但特异性有所降低,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).基因甲基化联合检测(任意阳性)阳性率在细胞学发现癌细胞组为98.2％(57/58),结果未明组为100.0％ (35/35),未发现癌细胞组为37.8％(14/37).[结论]采用RT-PCR法进行BALF中SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测,可以作为肺癌细胞学检查的补充,特别是在细胞学检测结果未明或阴性时.
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膀胱移行细胞癌尿沉渣RASSF1A基因启动子的甲基化状况及意义
目的 探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义.方法 选取病理确诊的39例膀胱癌标本,采用甲基化特异PCR方法检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者的相关检测情况作为对照,分析膀胱肿瘤患者RASSF1A基因异常甲基化的情况.结果 膀胱癌组RASSF1A基因启动子甲基化阳性率(61.5%,24/39)显著高于非肿瘤组(4.4%,2/45)(P<0.01),非肿瘤组与志愿组间(阳性率为0)并无明显差异(P＞0.05);尿沉渣RASSF1A基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为61.5%(24/39),特异性为95.6%(43/45).性别、年龄、病理分级及临床分期与RASSF1A基因甲基化均无明显相关性(均P＞0.05).膀胱癌肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化阳性率为69.2%(27/39).膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣同时出现RASSF1A基因甲基化为20例,同时仅出现非甲基化为8例,两者明显相关(P<0.05).结论 RASSF1A基因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,其异常甲基化状态可能成为非侵入性诊断膀胱癌的分子标志物之一.
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食管鳞状细胞癌组织中RASSF1A、LSD1的表达及其与预后的关系
目的 探讨RASSF1A和LSD1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其与预后的关系.方法 采用免疫组化SP法,检测RASSFlA和LSD1在80例ESCC组织及其癌旁正常组织中的表达.结果 ESCC组织中RASSF1A阳性率低于正常组织,LSD1阳性率高于正常组织(P均＜0.05).RASSF1A阳性与ES-CC的TNM分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及肿瘤大小有关(P＜0.05);LSD1阳性与ESCC淋巴结转移及肿瘤大小有关(P＜0.05).RASSF1A阳性患者的生存时间高于阴性患者(P＞0.05);LSD1阳性患者的生存时间明显低于阴性患者(P＜0.05).TNM分期、浸润程度、肿瘤大小均可作为ESCC独立的预后风险因素.结论 RASSF1A、LSD1在ESCC的发生、发展中表达异常,其与患者的肿瘤进展、转移及预后有关,结合临床病理可作为判断预后的指标.
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抑癌基因RASSF1A与胆管癌的研究进展
Duand-Fardel于1840年第一次描述了胆管癌是一种起源于胆总管上皮的恶性肿瘤,是一种较少见的胆道恶性肿瘤,约占消化道肿瘤的3％.RASSF1A是Dammann等[1]于2000年利用酵母双杂交筛选方法,在染色体3p21.3这个区域克隆出的一个新型的Ras因子,它属于RASSF1家族(Ras Association Domain family 1)(RASSF1A-RASSF1 H)的一个亚型,后续的研究又表明它是一个新型的抑癌基因,其失活可以导致人类多种恶性肿瘤的发生.其失活方式有突变、杂合性缺失、纯合型缺失、启动子甲基化,其中以启动子甲基化为常见.RASSF1A表达的失活同胆管癌的发生、发展、治疗、预后息息相关.
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RASSF1A和P16在食管鳞癌中的表达及临床病理意义
目的:探讨食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中RASSF1A和P16的表达及临床病理意义.方法:应用免疫组织化学法检测90例ESCC患者癌组织及癌旁正常组织中RASSF1A、P16的表达,分析其与食管鳞癌临床病理参数的关系.结果:食管鳞癌组织中RASSF1A 蛋白表达显著低于相应癌旁正常黏膜组织(51.1% vs 93.3%,P<0.01);P16蛋白表达显著低于相应癌旁正常黏膜组织(41.1% vs 91.1%,P<0.01).RASSF1A蛋白低表达与食管鳞癌的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05),与大体类型无关(P>0.05).P16蛋白低表达与食管鳞癌TNM分期、大体类型、浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05).两者表达皆与食管鳞癌患者的年龄、性别无关(P>0.05).结论:RASSF1A和P16可成为判断食管鳞癌恶性程度和预后的检测指标.
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RASSF1A在乳腺癌中表达及临床意义
目的 研究乳腺癌及癌旁组织中RASSF1A的表达情况,并探讨其与临床、病理资料的相关性.方法 收集60例乳腺癌及相应癌旁组织,通过免疫组化染色检测RASSF1A的表达情况;统计60例临床病例的各项临床、病理资料,并分析其相关性.结果 RASSF1A在乳腺癌组织中的表达阳性率为35％ (21/60),而在癌旁组织中86.7％ (52/60),癌旁组织中RASSF1A的表达明显高于乳腺癌组织(P＜0.05);RASSF1A的表达与淋巴结转移有无、组织学分级、脉管侵犯、人类表皮生长因子受体2(HER-2)、Ki-67表达有关;TMN分期中的Ⅰ期、Ⅱ期以及部分ⅢA期(T3N1MO)患者RASSF1A表达48.4％(15/31)高于Ⅲ期(除T3N1MO外)患者20.7％ (6/29)(x2=5.053,P=0.025).结论 相较于癌旁组织,乳腺癌组织中存在RASSF1A表达缺失的情况,其缺失表达与和淋巴结转移有无、组织学分级、脉管侵犯、HER-2、Ki-67、TMN分期密切相关.
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RASSF1A,p16及Ki67在宫颈液基细胞蜡块中的表达及意义
目的 研究RAS相关领域家族基因1A (Ras-associated domain family genes 1A,RASSF1A)、p16及Ki67在宫颈病变中的表达情况,结合组织学诊断结果,探讨RASSF1A、p16及Ki67的表达水平与宫颈病变发展的关系.方法 应用免疫组化法检测RASSF1A、p16及Ki67在139例宫颈液基细胞蜡块中的表达,包括20例未见上皮内病变或恶性细胞(NILM)、49例非典型鳞状细胞-不能明确意义(ASCUS)、32例低度鳞状上皮内病变(LSIL)、12例非典型鳞状细胞-不除外高度鳞状上皮内病变(ASC-H)和26例高度鳞状上皮内病变(HSIL).结果 与NILM组及ASCUS/LSIL组比较,ASC-H/HSIL组p16、Ki67的表达显著增高,RASSF1A的表达显著降低.宫颈病变级别与p16、Ki67的阳性率呈正相关.结论 p16、Ki67的高表达及RASSF1A的低表达可用于HSIL及以上病变的诊断及鉴别诊断,RASSF1A的表达缺失可能成为宫颈癌变的辅助监测指标.
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RASSF1A基因在肿瘤发生发展中的作用
肿瘤的发生发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关.大量研究发现,抑癌基因的失活与其启动子高甲基化有密切关联[1].Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)是2000年发现的新型候选肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene,TSG).
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循环肿瘤DNA中TSHR、RARβ2和RASSF1A启动子甲基化在甲状腺癌早期诊断中的价值
目的 研究甲状腺结节患者循环肿瘤DNA中TSHR、RARβ2和RASSF1A启动子甲基化状态,探讨其在甲状腺癌早期诊断中的价值.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)对16例甲状腺癌患者和59例良性甲状腺结节患者循环肿瘤DNA中TSHR、RARβ2和RASSF1A基因启动子甲基化进行检测,分析其甲基化率与临床病理之间的关系,并评价其临床诊断效能.结果 TSHR在甲状腺癌组甲基化率为56.3%,与良性结节组(37.3%)间差异不显著(P>0.05);RARβ2和RASSF1A在甲状腺癌组甲基化率分别为37.5%和62.5%,均显著高于良性结节组(3.4%,22%),P<0.01.TSHR基因甲基化率在甲状腺癌患者性别、年龄、不同临床分期间均无统计学差异(P>0.05);RARβ2和RASSF1A基因甲基化率在状腺癌患者性别、年龄间无统计学差异,但与不同临床分期有关(P<0.05).临床诊断效能比较显示:单独检测RASSF1A基因敏感度和Yonden指数高,而RARβ2特异性高.三个基因联合检测,其敏感度、特异性和Yonden指数均高.结论 TSHR、RARβ2和RASSF1A基因异常甲基化与甲状腺癌发生发展相关,三者联合检测有助于甲状腺癌的诊断.
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RASSF1A基因在胰腺癌组织中的表达及临床意义
探讨RASSF1A基因在胰腺癌组织中的表达及与其临床病理因素的关系.采用逆转录聚合酶链反应CRT2PCR)技术,检测56例胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因的表达.癌旁组织RASSFIA的表达量高于胰腺癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05).癌旁组织中RASSF1A基因表达高于癌组织;高分化腺癌组织RASSF1A的表达量高于中低分化腺癌组织,差异均有统计学意义(P＜0.05). RASSF1A基因丢失与胰腺癌的发生、发展及较差的生物学特性相关.
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新型肺癌候选抑癌基因RASSF1A研究进展
Ras相关区域家族1A(RASSF1A)是近从3p1.3上发现的新型候选抑癌基因,在肺癌、乳腺癌和结肠癌等十几种恶性肿瘤中均出现高频率表达失活和异常高甲基化.将该基因转染入肺癌、肾癌等肿瘤细胞株中均可显著抑制癌细胞生长,逆转其恶性表型,提示该基因的失活可能在肺癌等多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用.
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EGCG对黑素瘤A375细胞增殖及RASSF1A基因表达的影响
目的:评价表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人黑素瘤A375细胞增殖及Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因表达的影响.方法:不同浓度的EGCG处理A375细胞后,分别于不同时间点用MTr法检测A375细胞的生长抑制率；并应用甲基化特异性PCR法以及荧光半定量PCR法检测EGCG作用前后细胞中RASSF1A甲基化及mRNA的表达.结果:EGCG浓度在5～30 μg/mL时抑制细胞生长并呈时间剂量依赖；作用后可使RASSF4A基因由原有的高甲基化变为低甲基化；细胞中RASSF1A基因的mRNA表达量与药物作用浓度和作用时间呈正相关.结论:EGCG可以抑制A375细胞的生长,并可通过逆转RASSF1A基因启动子区域甲基化状态,恢复该基因在细胞中的部分表达,从而达到抑制其增殖的作用.
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幽门螺旋杆菌感染在喉鳞癌发生发展中的作用及机制
目的 探讨幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染在喉鳞癌(LSCC)发生发展中的作用及可能机制.方法 选取2016年3月至2018年2月期间就诊的患者124例,包括71例LSCC患者(LSCC组)和53例良性病变患者(对照组),采集喉黏膜组织标本和血清标本,采用PCR法和ELISA法检测两组组织和血清标本中H.pylori表达;分析H.pylori感染与LSCC患者病理特征间的关系;采用免疫组化法和PCR法检测H.pylori感染与未感染LSCC患者喉黏膜组织中RASSF1A和FHIT表达;采用PCR法和Western blotting法检测H.pylori感染FaDu细胞株RASSF1A和FHIT表达.结果 PCR检测结果显示,LSCC组与对照组H.pylori阳性表达率分别为71.83％(51/71)、26.42％(14/53),两组比较,P<0.001.PCR检测LSCC患者肿瘤组织和癌旁组织结果显示,6例(11.76％)患者只有肿瘤组织H.pylori呈阳性表达,24例(47.06％)患者只有癌旁组织H.pylori呈阳性表达,21例(41.18％)患者肿瘤组织和癌旁组织H.pylori均呈阳性表达,癌旁组织和肿瘤组织+癌旁组织H.pylori阳性表达率高于仅肿瘤组织H.pylori阳性表达率(P<0.05).ELISA检测结果显示,LSCC组与对照组H.pyloriIgG抗体阳性率分别为78.87％(56/71)、64.15％(34/53),两组比较,P=0.069.单因素Logistic回归分析结果提示,H.pylori感染是喉癌的危险因素(OR=7.09,95％CI 3.11～17.28,P<0.001).纳入年龄、性别、吸烟史、饮酒史等因素,多因素Logistic回归分析结果提示,H.pylori感染是喉癌发生的独立危险因素(OR=6.94,95％CI 2.87～15.31,P<0.001).经Mann-whitney秩和检验分析,LSCC患者肿瘤不同发病部位、不同T分型及不同TNM分期H.pylori阳性表达率未见统计学差异(P>0.05).免疫组化法检测结果显示,H.pylori感染与未感染LSCC患者喉黏膜组织中RASSF1A相对表达量分别为4.46±1.93、8.78±1.82,FHIT相对表达量分别为7.52±1.69、2.86±1.15,二者比较,P均<0.05.qRT-PCR法检测结果显示,H.pylori感染与未感染LSCC患者喉黏膜组织中RASSF1AmRNA相对表达量分别为0.74±0.10、0.19±0.06,FHITmRNA相对表达量分别为0.42±0.10、1.16±0.12,二者比较,P均<0.05.不同H.pylori干扰量与FaDu共培养48 h后,随着细菌干扰量升高,RASSF1A相对表达量升高(P均<0.05),而FHIT相对表达量降低(P均<0.05).qRT-PCR法检测H.pylori干扰量分别为30:1、100:1、300:1时RASSF1A表达量分别为0.20±0.08、0.43±0.10、1.41±0.08,FHIT表达量分别为1.26±0.22、0.70±0.13、0.18±0.10;Western blotting法检测H.pylori干扰量分别为30:1、100:1、300:1时RASSF1A表达量分别为0.53±0.12、0.59±0.10、1.07±0.14,FHIT表达量分别为0.69±0.11、0.42±0.14、0.28±0.09.结论 H.pylori定植于喉癌患者的喉黏膜组织,是喉癌发生的重要危险因素;其机制可能通过影响抑癌基因RASSF1A和促癌基因FHIT的表达而参与调控喉癌的发生.
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肺癌RASSF1A基因甲基化与cyclin D1的表达
目的 探讨肺癌中RASSF1A基因甲基化与cyclin D1表达对肺癌诊断的意义及RASSF1A基因甲基化与cyclin D1表达两者之间有无相关性.方法 甲基化特异性PCR检测33例肺癌及10例癌旁组织中RASSF1A基因启动子区甲基化情况;用免疫组织化学S-P法检测cyclin D1在上述组织中的表达情况.分析两者分别与患者年龄、性别、组织分型的关系及与肿瘤分化间的相关性,同时对RASSF1A基因甲基化与cyclin D1表达间的关系进行分析. 结果 33例肺癌中有18例(54.5%)显示RASSF1A基因已被甲基化,16例(48.5%)肺癌组织显示为cyclin D1表达阳性;而10例癌旁组织RASSF1A基因未甲基化且cyclin D1免疫组化染色显示为阴性.RASSF1A基因甲基化与年龄、性别、组织分型、分化及cyclin D1表达均无关;而 cyclin D1表达与肿瘤的分化具有相关性(r=0.418,P＜0.05),但与年龄、性别、组织分型无关(P＞0.05).结论 RASSF1A基因甲基化与cyclin D1表达在肺癌的发生中具有重要作用,且cyclin D1表达与肿瘤分化有关,检测cyclin D1表达有助于对肺癌恶性程度作出判断.
