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IL-12细胞因子家族的新成员——IL-35
IL-35是新发现的IL-12细胞因子家族成员,由两个亚基组成的异二聚体,即EBI3和IL-12p35.EBI3由EB病毒感染的B淋巴细胞诱导产生,是编码为34 kDa的糖蛋白,27%的氨基酸与IL-12p40相同;IL-12p35与其他单链细胞因子如IL-6同源.1997年Devergne等发现EBI3和IL-12p35可以聚合为新的造血因子,且在体内形成异二聚体,但未对其功能进行研究.
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白细胞介素-27与哮喘疾病的研究前景
白细胞介素(interleukin,IL)-27是2002年由Plfan等在基因库中找到的一个新基因,用SDS-PAGE电泳技术检测分离出基因的产物分子质量为28 ku,由此命名为p28,进一步的研究结果证实p28与EB病毒诱导基因3(Epstein-Barrvinls induced gene 3,EBI3)形成的异二聚体,被命名为IL-27,居于IL-12家族.
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p35和EBI3 mRNA在结肠癌组织中的表达及意义
目的：探讨p35和EBI3 mRNA在结直肠癌中的表达并分析其临床意义。方法 RT-PCR检测30例结肠癌组织、30例癌旁组织和20例正常结肠组织中p35和EBI3 mRNA表达情况及与患者临床病理特征的关系。结果结肠癌组织p35和EBI3 mRNA相对表达量均显著高于癌旁组织和正常结肠组织（P均＜0.05）；癌组织中p35和EBI3 mRNA相对表达量均与组织Dukes分期、组织学分型和淋巴结转移相关（P均＜0.05），而与患者的性别和年龄无关（P均＞0.05）。DukesC～D期p35和EBI3 mRNA相对表达量显著高于DukesA～B期，低、未分化结肠癌组织p35和EBI3 mRNA相对表达量显著高于高、中分化组织，淋巴结转移患者癌组织p35和EBI3 mRNA相对表达量显著高于未发生转移患者癌组织。Pearson相关性分析显示癌组织p35和EBI3 mRNA相对表达量呈显著正相关。结论结肠癌患者癌组织p35和EBI3 mRNA高表达与临床病理学特征相关。IL-35在结肠癌患者肿瘤微环境中可能具有重要作用。
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支气管哮喘患儿外周血 IL-27、IL-35及 EBI3的表达变化及意义
目的：探讨支气管哮喘患儿外周血白介素27(IL-27)、白介素35(IL-35)及 EBI3在不同阶段表达水平的变化及意义。方法采集2012年2月—2013年12月78例支气管哮喘患儿未控制期、部分控制后1周、控制后1周及对照组75例健康儿童外周血，利用酶联免疫吸附试验检测血清中 IL-27及 IL-35的表达水平，并利用实时荧光定量 RT-PCR 的方法检测外周血中单个核细胞中 IL-27、IL-35及 EBI3的 mRNA 的表达情况。结果未控制期、部分控制后1周、控制后1周血清 IL-27、IL-35均明显低于对照组(P <0.05)。在控制后1周单个核细胞 IL-27、IL-35的表达水平明显高于未控制期、部分控制后1周的表达水平，但是仍低于对照组(P <0.05)；EBI3的表达水平在未控制期明显低于其他各组(P <0.05)，而在部分控制后1周、控制后1周和对照组之间没有明显差异(P >0.05)。结论动态监测外周血中的 IL-27、IL-35 mRNA 及血清水平可以作为儿童哮喘控制水平的指标。
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IL-27在Th1型免疫发生中的作用
IL-27是近发现的一种与IL-12相关的细胞因子,它由抗原提呈细胞产生,通过广泛表达于各种免疫细胞表面的IL-27受体WSX-1/gp130发挥生物学效应.IL-27对Th1型免疫反应具有重要的调节作用.IL-27可以促进初始CD4+T细胞的增殖,也可以促进其向Th1细胞的分化及产生IFN-γ.而在高度Th1极化的情况下,IL-27的主要作用是限制Th1型免疫反应的强度和持续时间,从而保护机体免受过度的免疫反应的损伤.IL-27在抗感染免疫,抗肿瘤免疫及自身免疫性炎症等Th1型免疫主导的病理过程中起重要作用.
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类风湿关节炎患者血清IL-35的水平及其与疾病活动度的关系
目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者血清IL-35表达水平与疾病活动度的相关性.方法 选取确诊RA患者118例,分为活动期组62例和缓解期组56例.同时选取90例健康人作为对照,ELISA法检测RA患者及对照者血清IL-35水平,实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-35亚基EBI3和P35 mRNA表达水平.分析血清IL-35水平与DAS28评分、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、类风湿因子(RF)、关节肿胀数(SJC)和关节压痛数(TJC)等的相关性.结果 活动期组RA患者血清中IL-35浓度(38.09±16.90) pg/mL显著低于对照组[(82.25±15.82) pg/mL,P＜0.01)]和缓解期组[(72.96±11.74) pg/mL,P＜0.01)];依据DAS28评分将活动期组RA患者分为轻度、中度和重度组,血清IL-35水平(pg/mL)在3组中依次降低(轻度60.95土7.31,中度39.68±9.51,重度28.02±9.16),轻度组与中度或重度组间差异具有统计学意义(P＜0.05).活动期组和缓解期组患者血清IL-35水平与SJC、CRP和DAS28评分呈负相关性(P＜0.05),与ESR、TJC、RF无相关性.PBMC中P35 mRNA在RA活动期组中显著降低,低于健康对照组和缓解期组(0.47±0.18 vs l.91±1.12&1.82±0.53,P＜0.01),但EBI3 mRNA在活动期组(1.62±0.68)、缓解期组(1.48±0.77)及对照组(1.86±1.21)中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 活动期组RA患者血清IL-35水平显著下降,且伴随P35 mRNA水平下降,并与RA疾病活动度密切相关,可作为RA疾病活动度评价的潜在指标.
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CD4+IL-9+T细胞及CD4+EBI3+T细胞在系统性红斑狼疮患者外周血中的变化及意义
目的 白细胞介素9及白细胞介素35可能在自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用,然而到目前为止尚没有研究证实其与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者的关系.本研究通过检测SLE患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononudear cell,PBMC)中CD4+IL-9+T细胞及CD4+EBI3+T细胞百分比,探讨其在SLE患者外周血中的变化及与疾病活动性的关系.方法 采用流式细胞仪分别检测28例SLE患者及12名健康体检者外周血中CD4+IL-9+T细胞及CD4+EBI3+T细胞百分比,比较其在正常对照组及SLE患者中的差异及其与部分临床指标的相关性.3组间比较采用方差分析,与临床资料的相关分析采用非参数的Spearmen的相关分析.结果 活动期SLE患者外周血中CD4+IL-9+T细胞百分比[(2.11±0.26)%]高于健康对照组[(0.28±0.05)%](P<0.01)和稳定组[(0.86±0.16)%](P<0.01),稳定组高于健康对照组(P<0.05);活动期患者外周血中CD4+EBI3+T细胞百分比[(0.19±0.05)%]低于健康对照组[(1.86±0.67)%](P<0.01)及SLE稳定组[(1.31±0.32)%](P<0.01),稳定组较健康对照组低(P<0.05).CD4+IL-9+T细胞百分比与抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)、抗dsDNA、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、24h尿蛋白定量、SLE活动指数(SIE disease activity index,SLEDAI)呈正相关,与C3呈负相关;CD4+EBI3+T细胞百分比与抗dsDNA、ESR、24h尿蛋白定量、SLEDAI呈负相关,与C3呈正相关.结论 SLE患者外周血CD4+IL-9+T细胞百分比增加,CD4+EBI3+T细胞百分比下降,与疾病活动性相关,提示CD4+IL-9+T细胞及CD4+EBI3+T细胞含量可作为反映SLE活动性的指标.
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人EBI3蛋白及其突变体的表达及定位研究
目的：研究人EB病毒诱导的基因3(EBI3)及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法基于NCBI 数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3．1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型纤连蛋白(FN3)结构域的缺失突变体的表达质粒pcDNA3．1-EBI3(1~135)-FLAG 和 pcDNA3．1-EBI3(125~230)-FLAG 以及第210位天冬氨酸(Asp)点突变体Asp210的表达质粒pcDNA3．1-EBI3-D210AFLAG； Western blot 方法检测EBI3及其突变体在HEK 293T 细胞中的表达；免疫荧光实验观察人EBI3及各突变体在 COS7细胞中的定位。结果成功构建了下游携带FLAG 标签的人EBI3及其突变体的真核表达质粒；Western blot 结果显示重组蛋白均能在HEK 293T 细胞中稳定表达；经激光共聚焦显微镜观察,EBI3及其缺失突变体在COS7细胞的表达位置发生明显变化。结论人EBI3及其突变体真核表达质粒均能在HEK 293T、COS7细胞中成功表达；人EBI3缺失突变体在COS7细胞中的定位发生明显变化,氨基端结构域可能在EBI3蛋白的正确定位中发挥重要作用；EBI3蛋白的第210位Asp 的突变影响了其在细胞内的定位。
关键词： EBI3 质粒构建 Western blot 免疫荧光 -
哺乳动物细胞中EB病毒诱导基因3的定位及表达
目的 构建带有FLAG-tag的人野生型EB病毒诱导基因3(EBI3)真核表达载体,用其转染COST和HEK 293T细胞,观察EBI3在哺乳动物细胞中的定位和表达情况.方法 设计带有FLAG-tag的引物,以含人EBI3全长cDNA序列的质粒为模板,以PCR方法扩增出EBI3全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中,构建pCDNA3.1-EBI3-FLAG质粒.将重组质粒转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察其在胞内的定位情况；转染至HEK 293T细胞,提取细胞总蛋白进行Western blot.结果 正确构建pCDNA3.1-EBI3-FLAG质粒；荧光定位实验表明在COS-7细胞中,EBI3蛋白主要分布在细胞质中,且较集中分布于靠近核膜的位置.Western blot结果表明该质粒能在细胞中有效表达.结论EBI3在COS-7细胞中有表达,且主要分布在胞质内,该研究结果为了解EBI3在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能奠定了一定基础.
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EBI3在其异源二聚体免疫反应中的作用
EB病毒诱导基因3(Epstein-Barr virus induced gene 3,EBI3)是IL-12家族成员,初发现于EB病毒感染的B细胞培养上清液,为可溶性细胞因子受体,在体内以同源二聚体、IL-27异源二聚体和IL-35异源二聚体三种形式存在.在免疫应答中,EBI3参与Th1、Th2和Th17细胞的活化与分化,发挥抗感染和抗炎症发生中起着重要的作用.
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小鼠 IL-35基因 shRNA 慢病毒载体构建与RNAi 效率的鉴定
目的：构建小鼠IL-35基因靶向shRNA干扰的慢病毒表达载体，抑制小鼠肝癌细胞Hepa1～6中IL-35的表达。方法设计合成IL-35EBI3亚基基因靶向shRNA序列，构建shRNA载体PLKO．1-IL-35 EBI3 shRNA-GFP，测序正确后，三质粒病毒包装系统（质粒载体＋psPAX2＋pMD2．G）包装成表达干扰IL-35 EBI3 shR-NA的慢病毒，慢病毒感染靶细胞Hepa1～6，荧光显微镜下观察感染效率，以实时定量RT-PCR分析对Hepa1～6细胞IL-35 EBI3基因表达的干扰效果。结果测序证实，成功构建了真核表达干扰载体PLKO．1-IL-35 EBI3 shRNA-GFP；并成功包装出表达干扰IL-35 EBI3 shRNA的慢病毒，以MOI值4．6pfu/细胞感染Hepa1～6细胞，镜下显示感染效率约90％；RT-PCR结果表明所构建的3个慢病毒载体PLKO．1-IL-35 EBI3 shRNA-GFP均可以有效干扰IL-35 EBI3的表达，其中E545干扰效率高，为64％．结论成功构建IL-35EBI3亚基基因的shRNA慢病毒表达载体，该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。
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慢性EAE模型C57 BL/6J小鼠脑和脊髓EBI3和p28.mRNA表达
目的:观察IL-27两个亚单位EBI3 mRNA和p28 mRNA在慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型C57BL/6J小鼠脑和脊髓动态表达的变化,探讨其在EAE发病机制中的作用.方法:72只近交系无特定病原体的6～8周健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、佐剂组和慢性EAE模型组,采用RT.PCR技术观察不同时期脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达变化.结果:EAE组小鼠在发病初期即有EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达升高,在疾病高峰期迅速增加,并在慢性期仍维持在较高水平;与空白对照组和佐剂组相比较,差异均有统计学意义(P<0.01).空白对照组小鼠脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达与佐剂组相比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:IL-27有可能在早期促进EAE发病,并维持后阶段的炎症反应.
关键词： 实验变态反应性脑脊髓炎 IL-27 EBI3 P28 动物模型 -
白细胞介素-35相关亚基基因多态性与疾病易感性关系的研究进展
白细胞介素(IL)-35作为IL-12家族中的一员,由EBi3亚基及IL-12A(IL-12p35)亚基构成,是一种抗炎因子,在调节炎症反应及自身免疫失衡中发挥重要作用.许多研究对EBi3及IL-12A基因多态性与疾病的易感性进行了研究,但目前尚缺乏统一结论,本文就近年来EBi3及IL-12A亚基基因多态性与疾病发病风险相关性的研究进展进行综述.
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鼻咽癌组织EBI3和p35蛋白的表达及临床意义
目的：检测EBI3、p35在鼻咽癌(NPC)组织中的表达水平，分析EBI3和p35在NPC发生发展中的作用及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测50例NPC患者、30例癌旁黏膜和25例鼻咽黏膜慢性炎患者炎症组织中EBI3和p35表达，并分析其与NPC患者临床分期、病理组织类型和淋巴结转移的关系。结果 NPC组织中EBI3高表达率为62.0%，显著高于癌旁黏膜组织中的36.7%(χ2=4.83，P<0.05)和鼻咽黏膜慢性炎患者炎症组织中的36.0%(χ2=4.53，P<0.05)。T3~T4期NPC患者中EBI3高表达率显著高于T1~T2期患者(χ2=17.24，P<0.01)；非角化型鳞癌NPC患者癌组织中EBI3高表达率显著高于角化型鳞癌患者(χ2=8.78，P<0.01)；有颈部淋巴结转移NPC患者癌组织中EBI3高表达率显著高于无颈部淋巴结转移癌患者(χ2=14.49，P<0.01)。p35高表达率为60.0%，显著高于癌旁黏膜组织中的33.3%(χ2=5.33，P<0.05)和鼻咽黏膜慢性炎患者炎症组织中的36.0%(χ2=3.85，P<0.05)。T3~T4期NPC患者中p35高表达率显著高于T1~T2期患者(χ2=19.28，P<0.01)；非角化型鳞癌NPC患者癌组织中p35高表达率显著高于角化型鳞癌患者(χ2=7.24，P<0.01)；有颈部淋巴结转移NPC患者癌组织中p35高表达率显著高于无颈部淋巴结转移癌患者(χ2=5.56，P<0.05)。NPC组织中EBI3和p35表达之间呈正相关(r=0.328，P<0.05)。结论 NPC组织中EBI3和p35高表达与鼻咽癌发生、发展相关，有望作为患者预后判断的重要标志物。
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IL-35与人类疾病关系的研究进展
白介素35(interleukin-35,IL-35)是IL-12家族的新成员,被认为是一种具有潜在治疗前景的新型抗炎因子.目前认为IL-35可能广泛参与了体内的免疫应答过程,不仅在细胞内感染及炎症过程中起着重要的调节作用,而且与自身免疫病和肿瘤等多种临床疾病的发生、发展密切相关,成为细胞因子研究的新热点,为感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的的生物治疗提供了新思路,必将有着广泛的应用前景.本文将近年来有关IL-35的结构及与疾病关系方面的研究进展做一简要综述.
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EBI3与弥漫大B细胞淋巴瘤的关系研究进展
弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中常见的类型,具有很强的侵袭性,预后不佳.EB病毒与弥漫大B细胞淋巴瘤的发生、发展及预后相关,EB病毒诱导的基因3(Epstein-Barr virus-induced gene 3,EBI3)亦参与弥漫大B细胞淋巴瘤的疾病进程,与预后呈负相关.本文对EBI3与弥漫大B细胞淋巴瘤的关系的相关文献做一综述,探讨EBI3在弥漫大B细胞淋巴瘤的诊断、鉴别诊断、治疗及预后的关系进展.
