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cAMP反应元件结合蛋白在头痛与抑郁中的研究现状
目的:cAMP(cyclic adenosine monophosphate,环磷腺苷)反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)是一种转录因子,其蛋白家族激活后主要的功能是调节基因转录,与抑郁、疼痛等均有密切关系,但在头痛中的研究并不充分,本文旨在初步阐述CREB在头痛与抑郁中的研究现状及其内在联系.方法:本文回顾了近年关于CREB在头痛及抑郁中的研究情况,并阐述其交叉研究领域.结论:CREB在抑郁中的研究较成熟,CREB及其上下游因子很有可能成为抗抑郁药物研究的靶点;其在头痛中的研究较少,主要集中在三叉神经脊束核、三叉神经节、脑干等水平,CREB与中枢敏化可能相关.头痛和抑郁很可能存在共同的神经通路、神经递质,CREB是头痛与抑郁信号通路上共同的调节靶点.
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鞘内注射可乐定对甲醛致痛大鼠脊髓磷酸化cAMP反应结合蛋白表达影响
目的 研究鞘内注射可乐定对大鼠甲醛炎性痛脊髓磷酸化cAMP反应结合蛋白(pcREB)表达的影响.方法 24只成年雄性SD大鼠,体质量230-270 g,随机分为3组:空白对照组(NS组),致痛组(F组),可乐定组(CF组),每组8只鞘内注射可乐定或生理盐水后,在大鼠左足底部注射5%甲醛建立模型,记录大鼠1h内每5min的缩腿舔爪时间.待行为学观察结束,取脊髓L4-L,节段免疫组织化学染色,计数pCREB免疫反应阳性(pCREB-IR)神经细胞数量.结果 CF组的缩腿舔爪时间显著短于F组(P<0.01).F组pcREB-IR神经细胞数量多于NS组(P
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慢性应激大鼠不同脑区pCREB表达水平的研究
目的 探讨慢性应激状态下大鼠不同脑区pCREB表达水平的变化特征.方法 体质量185～255g雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组(C组15只)和实验组(T组15只).T组大鼠单只分笼喂养,给予21d的不可预见性综合刺激;C组大鼠分5只/笼喂养,不给予任何刺激.第22天脑组织取材、切片并进行pCREB的免疫组织化学测定;实验前后分别进行旷场分析法和体质量测定.结果 实验后的T组与C组相比:体质量减轻(P<0.05);中央格停留时间延长(P<0.01);水平穿越格数减少(P<0.01);直立次数减少(P<0.01);修饰次数减少(P<0.01);粪便粒数增多(P<0.01).2组在海马CA3区和齿状回(DG)均有阳性表达,但T组的平均光密度值均比C组显著减少(P值均<0.01),结论慢性综合应激减少大鼠的探究行为,抑制修饰行为,增加排便量;慢性应激后,大鼠海马神经元pCREB表达显著下降.
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中药止痛巴布贴对骨癌痛大鼠脊髓背角p - ERK、p-CREB的影响
目的:观察中药止痛巴布贴对骨癌痛大鼠痛行为及骨髓背角神经节pERK、pCREB表达的影响.方法:108只180 ～ 220g雌性Wistar大鼠随机分为3组,分别为空白对照组(Con组,n=24)、假手术组(Sham组,n=24)、骨癌痛模型组(Ca组,n=60),3组分别于手术前2天、术后每隔4日测定机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).于术后7天确认造模成功后,将成功的模型鼠随机分为两组,即模型组(Ca组,n=28)和中药止痛巴布贴组(CM组,n=25).术后7天、14天和21天各组处死大鼠(n≥8),取大鼠脊髓腰椎L4-6膨大处,用免疫组化方法测定脊髓背角pERK、pCREB的变化.结果:脊髓背角神经pERK、pCREB表达:Ca组阳性神经元数目增加,术后7天、术后14、21天与Con组和Sham组比较有统计学差异(P＜0.05)；CM组于术后14天、术后21天与Con组和Sham组统计学差异逐渐缩小(P＞0.05).结论:中药止痛巴布贴对骨癌痛有比较明显的镇痛作用,其对脊髓背角c-fos的影响,可能是通过降低脊髓背角神经节pERK、pCREB的表达而产生的,即通过ERK - CREB 信号转导通路完成的.
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大鼠局灶性脑缺血后LMO4和pCREB的表达
目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后核转录因子LMO4和pCREB在缺血半暗带的表达规律及与凋亡抗原的共表达.方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组及缺血再灌注1h、3h、6h、12h、24h、48h组,线栓法制备局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2h后恢复再灌住,采用Western blot法、免疫荧光法检测LMO4、pCREB在缺血半暗带的表达变化,免疫荧光双标观察LMO4、pCREB的表达定位及与TUNEL阳性细胞之间的共表达情况.结果 与假手术组比较,缺血侧半暗带皮层组织LMO4蛋白水平再灌后3h开始升高,24h达高峰,48h明显下降,pCREB蛋白水平6h开始升高,24h达高峰,48h逐渐下降(P＜0.05或P＜0.01)；LMO4、pCREB阳性细胞数再灌后6h开始升高,24h达高峰,48h显著下降(P＜0.05或P＜0.01)；免疫荧光双标显示LMO4和pCREB仅表达于神经元,LMO4主要表达于细胞核,少量位于细胞浆,pCREB仅表达于细胞核；LMO4与pCREB完全共表达；LMO4、pCREB均与TUNEL阳性细胞呈分离表达.结论 脑缺血再灌后诱导LMO4、pCREB表达升高,并呈动态变化趋势,可能为神经细胞对缺血再灌注损伤的一种内部适应性保护机制.
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Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗药AIDA对吗啡耐受大鼠脊髓pCREB表达的影响
目的 观察Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗药AIDA对吗啡耐受大鼠脊髓背角磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响.方法 24只雄性SD大鼠,随机均分为四组:吗啡耐受组(M组)、AIDA组(A组)、吗啡加AIDA组(MA组)和对照组(C组).每组连续给药8 d,每天2次.行为学上测定大鼠甩尾潜伏期(TFL)观察大鼠吗啡耐受情况,根据公式计算大镇痛效应百分比(MPE%).8d后处死动物,采用Western blot方法测定并比较每组脊髓背角蛋白pCREB表达量.结果 第1、2天M组和MA组MPE%明显高于C组(P＜0.01),但随着用药天数增加,M组的MPE%逐渐下降,第7天后与C组比较差异无统计学意义.用药后第3至第8天MA组MPE%显著高于M组(P＜0.01).MA组各时点MPE%均显著高于A组和C组(P＜0.01).M组脊髓背角pCREB表达量明显高于其他三组(P＜0.01).MA组pCREB表达量亦较C组和A组升高(P＜0.05).结论 吗啡耐受时pCREB表达上调.AIDA可以延缓吗啡耐受形成,其机制与抑制pCREB表达有关.
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皮质酮复合丙泊酚对大鼠pCREB表达的影响
目的 探讨皮质酮复合丙泊酚对大鼠pCREB表达的影响.方法 将24只21 d龄的Wistar大鼠随机分为4组(n=6):对照组(Ⅰ组)、丙泊酚组(Ⅱ组)、皮质酮组(Ⅲ组)及丙泊酚+皮质酮组(Ⅳ组),分别以0.9％氯化钠注射液10 ml/kg、丙泊酚100 mg/kg、皮质酮10 mg/kg、丙泊酚100 mg/kg+皮质酮10 mg/kg腹腔注射,连续用药7d后,以免疫组织化学法检测前额叶皮质pCREB的表达.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅳ组pCREB表达下调(均P＜0.05)；与Ⅱ组、Ⅲ 组比较,Ⅳ组pCREB表达减少(均P＜0.05).结论 100 mg/kg丙泊酚或10 mg/kg皮质酮多次重复应用,大鼠pCREB的表达减少,两药复合应用时抑制作用增强.
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慢性吗啡处理对大鼠交感神经节pCREB和CREB mRNA表达的影响
目的 观察慢性吗啡(Mor)处理对大鼠交感神经节-颈上神经节(SCG)环腺苷酸反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)磷酸化和mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分成4 组(正常对照组、吗啡急性给药组、吗啡依赖组、吗啡戒断组),免疫组织化学方法及RT-PCR法分别检测磷酸化的CREB(phosphorylated CREB,pCREB)和CREB mRNA在SCG中的表达.结果 (1) 与正常对照组相比,吗啡急性给药组大鼠SCG中pCREB含量明显降低 (P<0.05);(2) 吗啡依赖组大鼠SCG中pCREB含量回到正常对照组水平,并有增高趋势 (与正常对照组比较,P>0.05;与吗啡急性给药组比较,P<0.01);(3) 吗啡戒断组大鼠SCG中pCREB含量明显高于正常对照组(P<0.01);(4) 各组大鼠SCG的CREBmRNA表达无差异(P>0.05).结论慢性吗啡处理大鼠交感神经节CREB磷酸化水平存在适应性上调现象.
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奥曲肽在蜜蜂毒疼痛模型中的抗伤害感受作用及对背根神经节pCREB表达的影响
目的：利用伤害感受敏感型 DA 大鼠研究奥曲肽( OCT)在蜜蜂毒( BV)疼痛模型中的抗伤害感受作用以及背根神经节( DRG )内磷酸化 cAMP 反应元件结合蛋白(pCREB)表达的变化,为生长抑素受体(SSTR)的外周镇痛作用提供理论依据。方法于DA大鼠右爪足底中间部位,用50μl微量注射器皮下注射BV(0．1 mg/50μl)建立BV疼痛模型。成年雄性DA大鼠随机分为5组：对照组、BV组、OCT组、对侧OCT组和环生长抑素( c-SOM )组。分别用秒表和计数器记录大鼠注射BV后抬/舔爪时间和自发性缩足反射次数等伤害感受行为。大鼠机械敏感性阈值用up-down法测定,用50%机械缩爪阈值( PWMT)表示,分别于注射前1 h和注射后1．5 h 测量。热刺激反应用热缩爪潜伏期( PWTL)表示,于注射前30 min和注射后2 h测量。采用免疫组织化学方法观察pCREB在DRG表达的变化。结果在DA大鼠足底注射BV后1 h内,OCT组比BV组的抬/舔爪持续时间均缩短( P <0．05)；OCT 组 PWMT 较 BV 组升高,但这两组间PWTL差异无统计学意义。注射BV后BV组同侧DRG中pCREB阳性细胞百分数较对照组明显增加(P<0．05),局部OCT预处理明显减少pCREB阳性细胞百分数(P<0．05)。结论足底注射OCT抑制BV导致的自发性伤害感受行为和机械痛敏,并伴有同侧DRG内pCREB表达降低,这一作用可能是OCT通过激活外周局部SSTR导致的。
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鞘内注射布托啡诺对福尔马林炎性痛大鼠脊髓背角PKA和pCREB表达的影响
目的 观察鞘内注射布托啡诺对福尔马林炎性痛大鼠脊髓背角PKA和pCREB表达的影响.方法 18只鞘内置管的雄性SD大鼠,随机分为3组:生理盐水组(NS)；低剂量布托啡诺组(LB)；高剂量布托啡诺组(HB),n=6.鞘内置管后5d,在各组大鼠的左后足掌面皮下注射5％福尔马林50μL,致痛前30 min,3组大鼠鞘内分别预先注射生理盐水、布托啡诺12.5μg、25.0μg,采用疼痛加权评分法评价疼痛行为学,所有大鼠福尔马林注射2h后处死,取大鼠脊髓L5节段标本,用免疫组化方法测定脊髓背角PKA和pCREB的表达.结果 HB组大鼠疼痛较NS组减轻,其脊髓背角PKA和pCREB表达弱于NS组(P＜0.01),且呈正相关,r=0.940.结论 在大鼠福尔马林炎性痛模型中,鞘内注射布托啡诺25.0μg可产生明显的镇痛作用,其镇痛机制与下调PKA、CREB表达有关.
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抗抑郁药丙咪嗪对CREB/BDNF信号转导通路的影响
目的 研究经典三环类抗抑郁药丙咪嗪对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子(CREB/BDNF)信号转导通路的影响.方法 40只昆明小鼠随机平均分成4组:对照组、丙咪嗪组、咯利普兰组、丙咪嗪+咯利普兰联合给药组.通过建立绝望状态下的抑郁模型,比较各组小鼠悬尾不动时间、强迫游泳不动时间以及在旷场实验中的自主活动情况.另30只昆明小鼠随机平均分成5组:对照组、应激组、丙咪嗪组、咯利普兰组、丙咪嗪+咯利普兰联合给药组,建立束缚应激的抑郁模型,采用Western blot方法比较各组小鼠海马内CREB的磷酸化水平(pCREB)、BDNF含量的变化.结果 丙咪嗪、咯利普兰等单次给药显著缩短小鼠在悬尾、强迫游泳实验中的不动时间,而对各组小鼠在旷场实验中的表现无影响.丙咪嗪、咯利普兰显著升高应激小鼠海马内pCREB、BDNF含量.结论 经典抗抑郁药改善抑郁样症状的作用有可能与增强pCREB/BDNF信号通路有关.
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惊厥性和非惊厥性癫痫持续状态对大鼠学习记忆功能的影响
目的 探讨惊厥性和非惊厥性癫痫持续状态发作对大鼠学习记忆功能的影响及其海马磷酸化的环磷腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)的表达变化.方法 戊四氮点燃大鼠惊厥性癫痫持续状态(SE)和非惊厥性癫痫持续状态(GNCSE)两种动物模型,采用水迷宫和交替电刺激Y迷宫试验观察致痫后大鼠学习记忆功能改变.免疫组化染色观察大鼠海马pCREB蛋白水平表达变化.结果 SE大鼠致痫后近期出现水迷宫逃避潜伏期延长(P＜0.05),平台象限游泳时间及其百分比降低(P＜0.05),穿越平台次数减少(P＜0.05);电Y迷宫错误次数增多(P＜0.05),而远期均恢复正常.GNCSE组大鼠在致痫后近期水迷宫部分时段逃避潜伏期延长(P＜0.05),而平台象限游泳时间及其百分比和穿越平台次数与对照组相比均无明显差别(P＞0.05);电Y迷宫错误次数近期有所增加(P＜0.05).远期与对照组相比无明显差别.学习记忆功能下降的同时伴有海马组织pCREB蛋白水平表达的下降.结论 SE较GNCSE更易导致实验动物学习和记忆能力下降.无论哪种癫痫发作对学习记忆的影响均有一定的时限性.海马组织pCREB的表达变化可能参与了癫痫大鼠学习记忆功能改变的病理生理过程.
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培养大鼠海马脑片模拟痫性发作后pCREB在细胞凋亡中的作用的初步研究
目的:观察痫性发作对体外培养海马脑片的损伤作用,研究细胞磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(PhosphorylatedcAMP response element-binding protein,pCREB)对损伤海马神经元的作用.方法:以培养11d的海马脑片为研究对象,随机分为3组:(1)正常对照组:正常海马脑片培养液培养至14 d.(2)痫性发作模型组:正常海马脑片培养液培养至14 d,更换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1h后终止培养.(3)抗pCREB抗体干预组:用含pCREB抗体的海马脑片培养液(pCREB抗体终浓度为5μg/ml)预培养3d,换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1h后终止培养.采用TUNEL原位末端标记法检测各组培养海马脑片凋亡细胞；免疫组化染色观察海马脑片神经元内pCREB蛋白的表达变化.结果:(1)痫性发作模型组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(95.44±14.30)显著多于对照组(41.30±9.30)(P ＜0.05)；pCREB表达(201.36±19.31)较对照组(75.12± 13.71)显著升高(P＜0.05).(2)抗pCREB抗体干预组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(140.88 ±18.32)较痫性发作模型组显著增多(P＜0.05)；pCREB表达(172.60±17.68)较对照组显著升高、较模型组显著降低(P＜0.05).结论:(1)痫性发作可以增加体外培养海马脑片神经细胞凋亡发生,加重神经元损伤.(2)痫性发作后海马脑片神经细胞CREB的磷酸化增强,阻断CREB的磷酸化可导致神经细胞凋亡加重.
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奥曲肽对福尔马林诱导的大鼠痛反应和脊髓背角pCREB表达的抑制作用
目的:本研究旨在观察局部应用奥曲肽对福尔马林诱发的痛反应以及脊髓背角磷酸化的cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP response element binding protein,pCREB)表达的影响.方法:实验采用行为学观察和外周神经单纤维记录的方法,研究足底注射2.5％福尔马林50μl诱发的SD大鼠痛反应;同时采用免疫组织化学染色观察脊髓背角pCREB的表达.结果:福尔马林足底注射可以引起大鼠典型的双相性痛行为,敏化C和A8类初级传入单位,包括机械阈值的下降和传入放电率的增加(P ＜0.001);同时福尔马林注射还可以明显增加双侧脊髓背角pCREB的表达,以注射侧为显著(P＜0.05和P＜0.01).足底注射生长抑素类似物奥曲肽(20 μmol/L,50μl)可明显降低福尔马林诱发的第二相特异性伤害行为评分,减少C和Aδ类单位的传入放电率;同时局部应用奥曲肽还可以部分抑制福尔马林诱发的脊髓背角pCREB表达增加.结论:结果提示,局部应用奥曲肽可以显著抑制福尔马林诱发的痛反应,脊髓背角pCREB参与了此过程.
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强迫游泳后大鼠杏仁体中谷氨酸神经元中的pCREB水平显著上调
杏仁体在情绪性学习记忆及情绪行为中起关键性作用,而这些功能是由杏仁体的三个主要亚核(外侧核、基底外侧核和中央核)执行完成,并与一种转录因子-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 (CREB) 密切相关.CREB在多种神经活动中都会被激活成为磷酸化的CREB (pCREB).为探讨杏仁体中哪种神经元表达pCREB以及在情绪性应激刺激后不同时间段内杏仁体中pCREB水平的变化,本试验对大鼠用强迫游泳作为情绪性应激刺激;以抗pCREB、抗谷氨酸 (Glu) 和抗小清蛋白 (PV) 抗体标记了杏仁体中的神经元;用Western blot法测定了杏仁体中的pCREB蛋白水平.结果显示,pCREB表达于谷氨酸免疫阳性神经元中,而不在含小清蛋白的神经元中表达;而pCREB的表达水平在强迫游泳后显著提升.本结果提示,pCREB是通过谷氨酸神经元行使其对情绪过程的调解功能;情绪性刺激后pCREB的表达水平显著提升以应对应激性刺激.
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条件恐惧大鼠消退保持与边缘下区磷酸化CREB的变化
目的:探讨大鼠条件恐惧记忆在不同消退时间和消退后不同时间点,消退记忆保持与边缘下区磷酸化环磷酯腺苷反应元件(pCREB)的变化.方法:80只SD雄性成年大鼠随机分为:对照组(正常对照组、假训练A,B组、条件恐惧组);不同消退时间组(立即消退组、自然消退组、24 h消退组);消退后不同时间点组(将条件恐惧后24 h消退大鼠随机分为消退后1,3,7 d组),每组大鼠8只.大鼠条件恐惧由声音提示的条件刺激与不可逃避足底电击的非条件刺激配对建立.假训练A,B组给予声音和足底电击非配对刺激,仅有声音而无足底电击的消退训练于建模后15 min或24 h后进行;大鼠消退保持成绩和边缘下区pCREB表达测定于消退后24 h进行;而消退后1,3,7 d组分别在消退后第1,3,7 d测定.采用免疫组织化学和图像分析方法观察大鼠边缘下区pCREB的变化.结果:与不同消退时间组相比较,24 h消退组消退保持成绩(%)和pCREB表达数(个)均好于立即消退和自然消退组[(53±12),(820±106),P＜0.01],立即消退与自然消退组组间差异比显著.假训练A组(20±7),B组(22±6)消退保持成绩差;pcREB阳性表达数少(432±97),(453±49)且组间无差异.与条件恐惧组相比较,消退后不同时间各组消退保持成绩、边缘下区pcREB阳性表达呈逐渐增加趋势(P＜0.01);与消退后3 d组组间比较,消退后1,3 d组组间差异显著(P＜0.01);与正常对照组(87±7),(994±31)相比较,条件恐惧大鼠消退保持、IL区pcREB表达显著降低[(37±11),(692±60),P＜0.01].结论:边缘下区pCREB的表达水平与消退保持成绩正相关,条件恐惧建立后24 h进行恐惧消退的效果好,消退后第1～3 d可能是决定条件性恐惧消退效果的关键时期.
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慢性应激大鼠不同脑区pCREB表达水平的研究
目的 探讨慢性应激状态下大鼠不同脑区pCREB表达水平的变化特征.方法 体质量185～255g雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组(C组15只)和实验组(T组15只).T组大鼠单只分笼喂养,给予21d的不可预见性综合刺激;C组大鼠分5只/笼喂养,不给予任何刺激.第22天脑组织取材、切片并进行pCREB的免疫组织化学测定;实验前后分别进行旷场分析法和体质量测定.结果 实验后的T组与C组相比:体质量减轻(P<0.05);中央格停留时间延长(P<0.01);水平穿越格数减少(P<0.01);直立次数减少(P<0.01);修饰次数减少(P<0.01);粪便粒数增多(P<0.01).2组在海马CA3区和齿状回(DG)均有阳性表达,但T组的平均光密度值均比C组显著减少(P值均<0.01),结论慢性综合应激减少大鼠的探究行为,抑制修饰行为,增加排便量;慢性应激后,大鼠海马神经元pCREB表达显著下降.
