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吡格列酮对胰腺炎相关性腹水诱导的人单核细胞炎症信号通路的影响
目的 用胰腺炎相关性腹水(PAAF)刺激人单核细胞,探讨PPARγ激动剂吡格列酮对细胞炎症信号通路的影响.方法 PAAF收集自重症胰腺炎患者.将体外培养的人单核细胞THP-1分为4组:对照组(C组)、实验组(A组)、吡格列酮组(P组)、GW9662(G组).A组用PAAF刺激细胞；P组加入终浓度为20 μmol/L吡格列酮,2h后再用PAAF刺激细胞；G组先加入PPARγ拮抗剂GW9662,30 min后加入吡格列酮,2h后再用PAAF刺激细胞.12 h后收集4组细胞,采用实时定量PCR方法检测细胞TNF-α、IL-6的mRNA表达,蛋白质印迹法检测NF-κB p65、p38MAPK的活化程度和IκB蛋白表达变化.结果 PAAF刺激后,A组细胞促炎细胞因子TNF-α、IL-6的mRNA表达增加,NF-κB、p38MAPK活化,IκB蛋白水平降低,与C组相比差异有统计学意义(P＜0.05) ;P组经吡格列酮干预后,TNF-α、IL-6的mRNA表达降低,NF-κB、p38MAPK活性下调,IκB蛋白表达升高,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；G组应用GW9662后可拮抗吡格列酮降低促炎细胞因子的作用,TNF-α、IL-6的mRNA表达增加,NF-κB、p38MAPK活化,IκB蛋白水平降低,与P组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 吡格列酮可能通过抑制NF-κB、p38MAPK炎症信号通路活化,减少促炎细胞因子产生,控制炎症发生发展.
关键词： 吡格列酮 胰腺炎 单核细胞 NF-κB p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
p38MAPK对大鼠肾小球系膜细胞表达NF-κB和COX-2的调控
目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)、核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB ) 和环氧化酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)之间的关系,从而研究p38MAPK和NF-κB、COX-2在糖尿病肾病中的作用机制.方法:分别以一定浓度的高葡萄糖(25 mmol/L)、高胰岛素(100 mmol/L)、过氧化氢(100 μmol/L)和糖基化终产物(100 mg/L)孵育大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1一定时间;先分别以一定浓度的p38MAPK特异抑制剂SB203580(10 μmol/L)预处理细胞系HBZY-1,再给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1 p38MAPK、NF-κB和COX-2的表达.结果:高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,NF-κB、COX-2表达也明显增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);SB203580预处理后,NF-κB、COX-2表达显著降低,与相应刺激组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:p38MAPK可通过激活NF-κB、COX-2而诱导DM时肾脏的损害, p38MAPK和NF-κB、COX-2在糖尿病肾病的发生发展过程中可能起重要作用.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 NF-κB 环氧化酶2 糖尿病肾病 肾小球系膜细胞 -
大鼠肾缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶的活化及氧自由基清除剂对其的影响
目的:观察肾缺血再灌注损伤后p38活化的情况,并探讨应用氧自由基清除剂tempol后对其的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(n-10)、缺血再灌注损伤组(IRI,n=45)和tempol预处理组(n=10).IRI组采用右侧肾摘除左肾蒂夹闭50 min后松开制备缺血再灌注模型,分别干再灌注0、5、10、15、30、45 min及1、2 h处死动物取肾组织,Western印迹法观察p38活化情况.Tempol处理组动物同样制备缺血再灌注模型,术前1 h尾静脉注射tempol(100 mg/kg),再灌注45 min取肾组织;假手术组行右侧肾摘除但不夹闭左肾蒂,术后45 rain取肾组织.Western印迹法观察3组p38活化情况,分析肾组织丙二醛(MDA)含量,ELlSA法检测肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1p(IL-1β)的含量.结果:大鼠肾组织磷酸化p38含量在再灌注早期(5 min)开始升高,45 min达到高峰,再灌注2 h仍较高(P＜0.05).与假手术组相比,IRI和tempol预处理组磷酸化p38含量明显升高(0.103±0.008 vs 2.025±0.136 vs 0.833±0.191,P＜0.05),且tempol预处理组低于IRI组(P＜0.05).3组间肾组织MDA、TNF-α、IL-1β的含量检测结果与磷酸化p38结果类似(P0.05).结论:氧自由基介导的p38磷酸化在缺血再灌注引起的大鼠肾脏炎症性损害中具有重要作用;应用tempol可以抑制p38磷酸化,防治缺血再灌注损伤.
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情绪应激与银屑病的相关性研究进展
银屑病是一种慢性复发性炎症性皮肤病,其发病与遗传、免疫、感染、情绪应激等因素有关.大部分银屑病患者常合并焦虑、抑郁、失眠等情绪应激问题,严重影响患者的生活质量,情绪应激也通过可能的机制(神经-内分泌-免疫网络及p38丝裂原活化蛋白激酶通路)加重银屑病.情绪应激与银屑病的相关已得到广泛关注,了解情绪应激,包括抑郁症、焦虑、生活事件或工作压力和睡眠问题等与银屑病发生发展的关系和可能的作用机制,为银屑病的治疗提供依据.
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烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶的影响
目的 探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞内信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活的影响.方法 106、107 CFU/ml烟曲霉悬液(106和107 CFU/ml烟曲霉组)、100 mg/L阳性刺激物β-葡聚糖(β-葡聚糖组)及培养基(空白对照组)分别与2×105/ml THP-1细胞共孵育1、3、6h,实时荧光定量PCR分析各组THP-1细胞TNF-αmRNA表达水平.107 CFU/ml烟曲霉悬液(烟曲霉组)、β-葡聚糖(β-葡聚糖组)及培养基分别作用THP-1细胞24 h,酶联免疫吸附法检测各组培养上清液中TNF-α含量.Western印迹法检测107 CFU/ml烟曲霉体外作用THP-1细胞后15、30、60 min p38MAPK和磷酸化p38MAPK水平.采用20 μmol/LSB203580预先与THP-1细胞共培养2h后,再用107 CFU/ml烟曲霉、β-葡聚糖或培养基作用6h,检测各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平变化.结果 106、107 CFU/ml烟曲霉组、100 mg/L β-葡聚糖组及空白对照组TNF-α mRNA表达水平差异有统计学意义(F=110.983,P＜0.001),且随培养时间延长,THP-1细胞TNF-α mRNA水平增高(F=701.680,P＜0.001).107 CFU/ml烟曲霉刺激THP-1细胞24 h后,TNF-α蛋白水平(6 236.30±437.12 ng/L)较空白对照组(132.10±0.61 ng/L)明显升高(P＜0.01).107 CFU/ml烟曲霉作用THP-1细胞30 min后磷酸化p38MAPK蛋白水平明显升高,60 min时开始减弱.SB203580阻断的烟曲霉组TNF-α mRNA表达水平(3.83 ± 0.62)较未阻断的烟曲霉组(187.23±21.62)明显降低.结论 人THP-1细胞体外与烟曲霉作用后激活信号分子p38MAPK并分泌TNF-α,表明单核细胞可能参与抗烟曲霉感染固有免疫反应.
关键词： 烟曲霉菌 肿瘤坏死因子α p38丝裂原活化蛋白激酶类 THP-1细胞 -
白介素6在痤疮囊肿皮损中的表达及痤疮丙酸杆菌体外对THP-1细胞白介素6水平的影响
目的 检测寻常痤疮患者囊肿皮损中白介素6(IL-6)的表达,并观察痤疮丙酸杆菌体外对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1信号分子p38MAPK及白介素6水平的影响.方法 实时荧光定量PCR检测6例痤疮患者囊肿皮损和6例健康人皮肤组织中IL-6 mRNA表达水平.用2× 106、2×107、2×1o8 CFU/ml灭活痤疮丙酸杆菌菌悬液或脂多糖(100 μg/L)刺激THP-1细胞,同时设培养基对照组和p38MAPK抑制剂SB203580组(先用20 μmol/LSB203580处理,再用2×108 CFU/ml痤疮丙酸杆菌刺激),作用不同时间(1～6 h)后,实时荧光定量PCR检测IL-6 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验检测上清液中IL-6含量.2×108 CFU/ml灭活痤疮丙酸杆菌菌悬液刺激THP-1细胞15、30、60 min或脂多糖(100 μg/L)刺激30 min后,Western印迹法检测p38MAPK和磷酸化p38MAPK表达水平.结果 痤疮囊肿皮损和健康对照皮肤IL-6 mRNA水平分别为3.680±0.790、1.155±0.250,两组比较差异有统计学意义(t=3.047,P＜0.05).双因素方差分析显示,不同浓度痤疮丙酸杆菌组、脂多糖组、培养基对照组IL-6 mRNA表达水平差异有统计学意义(F=532.3,P＜0.001,v=4),痤疮丙酸杆菌刺激1、3、6h之间差异也有统计学意义(F=526.6,P＜0.001,v=2).2×1o8 CFU/ml痤疮丙酸杆菌组、脂多糖组、培养基对照组上清液中IL-6浓度分别为(1 618.22±32.23)、(3 212.06±353.00)、(147.10±0.53) ng/L,3组间差异有统计学意义(v=2,F=102.35,P＜0.01).2×108 CFU/ml痤疮丙酸杆菌作用于THP-1细胞15、30、60 min后磷酸化p38MAPK蛋白水平升高.SB203580组THP-1细胞IL-6 mRNA水平与未抑制组比较明显降低(t=15.91,P=0.004).结论 寻常痤疮患者囊肿中IL-6mRNA水平显著升高.痤疮丙酸杆菌体外可激活人THP-1细胞信号分子p38MAPK,促进其分泌IL-6.
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申克孢子丝菌酵母相对人THP-1巨噬细胞样细胞p38MAPK激活及白细胞介素6表达的影响
目的 探讨申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)巨噬细胞样细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活化及白细胞介素6(IL-6)表达的影响.方法 实时荧光定量反转录PCR分析申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1巨噬细胞样细胞3、6h后IL-6 mRNA表达水平变化,酶联免疫吸附法检测刺激24 h后IL-6分泌量;Western印迹法分析2×106 CFU/ml申克孢子丝菌酵母相体外作用于THP-1巨噬细胞样细胞30 min和60 min后p38MAPK磷酸化水平的变化,同时检测100 nmol/L地塞米松(p38MAPK抑制剂)预处理THP-1巨噬细胞样细胞30 min后p38MAPK磷酸化水平及IL-6 mRNA表达水平的变化.采用SPSS19.0统计软件,进行多因素方差分析、单因素方差分析,组间多重比较采用LSD检验.结果 刺激THP-1巨噬细胞样细胞3h后,酵母相组、凝胶多糖组、空白对照组IL-6 mRNA表达水平分别为56.81±7.36、26.69±1.22、0.97±0.05,刺激6h后分别为378.03±16.67、276.24±39.13、1.02±0.04,组间差异有统计学意义(F=5 552.22,P＜0.001).申克孢子丝菌酵母相刺激6h后IL-6 mRNA表达高于刺激3h后(q=16.74,P＜0.001),申克孢子丝菌酵母相与THP-1巨噬细胞样细胞共孵育24 h后,酵母相组、凝胶多糖组及空白组细胞上清液中IL-6浓度分别为(59.96±18.16)、(91.01±17.27)、(5.50±2.30) pg/L,组间差异有统计学意义(F=26.62,P＜0.01);酵母相组高于空白对照组(P＜ 0.01).地塞米松处理后,酵母相组IL-6 mRNA表达水平(4.46±1.03)低于未用地塞米松处理组(493.52±113.87,P＜0.001).申克孢子丝菌酵母相作用THP-1巨噬细胞样细胞30、60 min后,磷酸化p38MAPK蛋白相对表达量均高于空白对照组(P＜0.01).地塞米松预处理THP-1巨噬细胞样细胞后,磷酸化p38MAPK水平低于未用地塞米松处理组,差异有统计学意义(q=10.81,P＜ 0.01).结论 人THP-1巨噬细胞样细胞体外与申克孢子丝菌酵母相作用后,通过激活p38MAPK信号通路促进IL-6表达.
关键词： 孢子丝菌属 巨噬细胞 白细胞介素6 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
两性霉素B对人THP-1细胞产生肿瘤坏死因子α、白细胞介素8及p38MAPK活化的影响
目的 探讨两性霉素B对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞系分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)以及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的影响.方法 将THP-1细胞分为空白对照组、两性霉素B组(分别加入2、4、8mg/L两性霉素B处理);阳性对照组(用100 μg/L β葡聚糖或者100 mg/L脂多糖处理).实时荧光定量PCR分析不同刺激物和THP-1细胞作用一定时间后TNF-α、IL-8 mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验检测8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h后上清液中TNF-α分泌量.Western印迹检测8 mg/L两性霉素B作用THP-1细胞后p38MAPK和磷酸化p38MAPK的水平.结果 2、4、8 mg/L两性霉素B刺激6h,TNF-α mRNA水平分别为7.55±1.17、19.47±2.91、57.22±0.65,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01、0.001、0.001).IL-8mRNA水平分别为2.98±0.04、5.22±1.35、11.82±1.66,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01、0.001、0.001).8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞1、3、6h后TNF-αmRNA水平分别为8.61±0.30、10.75±0.08、56.98±2.43,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05、0.01、0.001).IL-8 mRNA水平分别为2.63±0.28、5.35±0.98、11.73±1.18,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05、0.01、0.001).8mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h上清液中TNF-α蛋白水平为(4039.06±223.87) ng/L,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.001).结论 两性霉素B体外可促进人THP-1细胞p38MAPK蛋白磷酸化及TNF-α和IL-8分泌,具有免疫调节作用.
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光线性角化病和鳞状细胞癌表皮生长因子受体与MAPK信号通路的研究
目的 探讨磷酸化ERK1/2、JNK和p38MAPK与其上游因子表皮生长因子受体(EGFR)及下游转录因子Elk-1在光线性角化病(AK)和皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达.方法 收集确诊为AK和高、中、低分化SCC患者各30例的病变组织,同时收集30例非癌患者正常皮肤组织作为正常对照组.采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-EGFR、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p-Elk-1蛋白在AK和不同分化程度SCC中的表达情况.结果 p-EGFR在SCC组中的表达高于AK组及正常对照组(P＜0.05),AK组与正常对照组表达差异无统计学意义;p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p-Elk-1在SCC的表达均高于AK组及正常对照组(P＜0.05),且在AK中的表达又均高于正常对照组(P＜0.05).除p-EGFR和p-Elk-1在高分化和中分化SCC中的表达差异无统计学意义,p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK随着SCC分化程度的降低,其表达逐渐增高(P＜0.05).相关性分析显示,在SCC中p-EGFR的表达与p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK的表达强度呈正相关(r=0.843、0.819、0.902,均P＜0.01),且p-Elk-1的表达与p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK的表达强度亦呈正相关(r=0.874、0.843、0.893,均P＜0.01);在AK中p-EGFR的表达仅与p-p38MAPK的表达强度呈正相关(r=0.707,P=0.022).结论 p-EGFR、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p-Elk-1蛋白在皮肤SCC中的表达与其病理分级有关.磷酸化EGFR→ERK1/2、JNK、p38MAPK→Elk-1信号转导途径可能在AK和SCC的发生发展中起作用.
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绞股蓝皂苷对光损伤小鼠皮肤中核因子κB、p38MAPK的影响
目的 观察绞股蓝皂苷(GP)对光损伤Balb/C小鼠皮肤中核转录因子kappa-B(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的影响,进一步探讨GP抗皮肤光损伤的可能机制.方法 将80只雌性Balb/C小鼠随机分为8组,每组10只.①空白对照组:不做任何处理；②UVB模型组:UVB照射60 s；③GP乳膏Ⅰ组；④GP乳膏Ⅱ组；⑤维生素E乳膏Ⅰ组；⑥维生素E乳膏Ⅱ组；⑦基质Ⅰ组；⑧基质Ⅱ组.Ⅰ组均先外涂相应的乳膏或基质,30 min后照射UVB 60 s；Ⅱ组均先用UVB照射60 s,30 min后外涂相应的乳膏或基质.采用隔日UVB照射7次Balb/C小鼠建立皮肤光损伤动物模型,应用Western印迹法检测小鼠皮肤中NF-κB抑制蛋白(IκB蛋白)、κB抑制蛋白激酶(IKK蛋白)及p38MAPK、磷酸化p38MAPK(pp38)的表达.结果 空白对照组小鼠表皮中IκB、IKK蛋白未见表达.UVB模型组小鼠表皮中IκB蛋白水平为0.40±0.07,IKK蛋白为2.01±1.75.GP乳膏Ⅰ组与Ⅱ组IκB蛋白表达(分别为1.63±0.85和0.90±0.40)明显高于UVB模型组(P值均＜0.05),IKK蛋白表达(分别为0.23±0.12和0.45±0.29)明显低于UVB模型组(P值均＜0.05),与维生素E组小鼠皮肤中IκB蛋白、IKK蛋白的表达结果相似.各组p38MAPK表达量没有明显差异.GP乳膏Ⅰ组与Ⅱ组磷酸化p38MAPK表达水平(分别为0.425±0.054和0.571±0.090)明显低于UVB模型组(0.835±0.049),与维生素E组相似.结论 UVB照射能促使NF-κB活化,激活磷酸化p38MAPK; 1.5％GP乳膏能抑制UVB诱导的NF-κB通路及p38MAPK的激活,可能是其抗炎、抗光损伤的作用机理之一.
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HB-13和HP-13对HaCaT细胞NF-KB活化和p38MAPK磷酸化的影响
目的 探讨盐酸13-己基小檗碱(HB-13)和盐酸13-己基巴马汀(HP-13)对肿瘤坏死因子α(TNF-ot)信号刺激HacaT细胞后核因子-KB(NF-KB)活化和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化的影响.方法 在HaCaT细胞培养体系中,用30 ng/mL外源性重组人TNF-α(rhTNF-α)分别刺激120 min和15 min,用免疫印迹法检测磷酸化-I KB-α(p-I KB-α)和磷酸化-p38MAPK(p-p38)的表达,并观察HB-13和HP-13对p-I KB-α和p-p38表达的影响.结果 HB-13和HP-13在0.39～1.56 μg/mL实验浓度范围内抑制rhTNF-α信号刺激下p-I KB-α表达(n=3,P<0.05),抑制作用具有剂量依赖趋势,IC50值分别约为0.441μg/mL(r=-0.990,m=3,P>0.05)和0.832 μg/mL(r=-0.992,n=3,P>0.05).HB-13和HP-13在0.39-1.56 μg/mL实验浓度范围内对rhTNF-α信号刺激下p-p38的表达均无明显抑制作用n=3,P>0.05).结论 HB-13和HP-13在实验浓度范围内对TNF-α信号引起的NF-KB活化均有抑制作用,对TNF-α信号引起的p38MAPK磷酸化均无抑制作用.
关键词： 肿瘤坏死因子α NF-kB p38丝裂原活化蛋白激酶类 小檗碱 巴马汀 -
慢性低O2高CO2对小鼠海马细胞凋亡、caspase-3和p38 MAPK活性的影响
目的:研究慢性低O2高CO2对小鼠海马细胞凋亡、caspase-3以及p38 MAPK活性的影响.方法:雄性C57BL/6小鼠24只,随机分成2组:4HH组(低O2高CO2组12只)和NC组(正常对照组12只).4HH组饲养于氧舱中,舱内O2浓度为9％～11％,CO2浓度为5％～6％,每天8 h,每周6 d,共4周,其余时间与NC组一样,生活于正常环境.原位末端标记(TUNEL)法检测海马细胞凋亡指数(AI),caspase-3活性检测试剂盒测定海马caspase-3活性,Western blot检测海马p-p38 MAPK蛋白的表达.结果:4HH组小鼠海马细胞凋亡指数(AI)、caspase-3活性及p-p38 MAPK蛋白含量显著高于NC组(P<0.01).结论:慢性低O2高CO2促进小鼠海马细胞凋亡,促进caspase-3以及p38 MAPK活化.
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丝裂原活化的蛋白激酶p38在健脾清化方改善大鼠慢性肾衰竭中的意义
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) p38在健脾清化方改善模型大鼠慢性肾衰竭肾纤维化中的作用.方法:SPF级SD大鼠分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、健脾清化方组(n=10)、氯沙坦组(n=10).健脾清化方组每日灌胃1次,每次3.9 g/200 g大鼠,连续60 d;氯沙坦组每日灌胃1次,每次3.3 g/200 g大鼠,连续60 d;假手术组和模型组等体积生理盐水灌胃.5/6肾切除大鼠模型(Platt法),采用生化法检测大鼠血清肌酐、尿素氮,蛋白质印迹法检测MAPK p38,HE染色观察肾脏组织病理学变化.结果:与模型组比较,健脾清化方、氯沙坦能显著降低血清肌酐水平(42.67±5.98 vs 60.90±9.54,40.90±5.07 vs 60.90±9.54,均P＜0.01)及MAPK p38表达(0.555±0.004 vs0.930±0.265,0.587±0.045 vs0.930±0.265,均P＜0.01),降低大鼠血清尿素氮水平(8.56 ±0.75 vs 8.62±0.62,7.97±0.86vs8.62±0.62,均P＜0.05);模型组可见肾小球增生,系膜细胞轻度增生,间质炎性细胞浸润,健脾清化方组、氯沙坦组与模型组比较病变明显减轻,且健脾清化方组较氯沙坦组病变减轻更明显.结论:健脾清化方对Platt模型大鼠的肾功能和肾脏病理有一定的改善作用,该机制可能与健脾清化方对MAPK p38相关免疫炎症通路的抑制有关.
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极低频电磁场诱导人骨肉瘤细胞凋亡及其机制研究
目的：探索极低频电磁场对人骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响及其分子机制。方法：采用50 Hz、1 mT 的极低频电磁场作用于人骨肉瘤细胞MG－63，通过MTT法检测MG－63细胞的存活率，通过流式细胞术检测MG－63细胞的凋亡率及活性氧水平，并检测 MG－63细胞给予活性氧抑制剂 N－乙酰半胱氨酸（ NAC ）及p38 MAPK抑制剂SB203580作用后细胞凋亡率的变化；通过蛋白质印迹法检测极低频电磁场处理及NAC干预后MG－63细胞p38 MAPK蛋白水平。结果：极低频电磁场能够显著抑制MG－63细胞的存活率，诱导MG－63细胞凋亡及活性氧生成；给予2．5 mmol／L NAC或SB203580干预后MG－63细胞凋亡率显著下降；极低频电磁场处理MG－63细胞后胞内p38 MAPK表达增多，而NAC干预后磷酸化p38 MAPK减少。结论：极低频电磁场可诱导人骨肉瘤细胞MG－63凋亡，其机制可能与活性氧生成增加、p38 MAPK激活有关。
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吡格列酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β-1的影响
目的：观察吡格列酮（PIO）对高糖（HG）培养的肾小球系膜细胞（MCs）p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和转化生长因子β-1（TGF-β1）表达的影响，探讨PIO肾保护作用及机制。方法体外培养MCs，取对数生长期的细胞以2×105/孔的密度接种于6孔细胞培养板，同步化后随机分为正常对照（NG）组、HG组、p38MAPK抑制剂（S）组及 PIO（P）组。Western blot 测定磷酸化 p38MAPK（p-p38）和总 p38MAPK （t-p38）蛋白含量，半定量RT-PCR测定细胞TGF-β1 mRNA表达情况。结果与NG组比较，HG组细胞内p-p38MAPK含量和TGF-β1mRNA表达增强（P＜0．01）；与HG组比较，p38MAPK抑制剂显著抑制HG刺激的细胞内p38MAPK活性和 TGF-β1表达（P＜0．05）；与 HG组比较，P 组细胞内上述变化亦明显降低（P＜0．05），与S组相似；p38MAPK活性和TGF-β1表达呈正相关（r＝0．587，P＜0．01）。结论 PIO可抑制肾小球系膜p38MAPK通路，降低TGF-β1表达，该作用可能与其肾脏保护部分有关。
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法舒地尔对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶激活的影响
目的 观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织p38MAPK磷酸化激活的影响.方法 45只雄性SD大鼠随机分为三组:对照组(NS组,n=15)、脂多糖组(LPS组,n=15)及法舒地尔干预组(FAS组,n=15),LPS组和FAS组采用股静脉注射LPS(5 mg/kg)建立ALI模型,FAS组在LPS注射前30 min腹腔注射法舒地尔(10 mg/kg).造模后3 h、6 h、12 h观察肺组织病理形态学改变,免疫组织化学及Western Blot法检测肺组织p-p38MAPK的表达.结果 造模后LPS组各时间点肺组织p-p38MAPK的表达较NS组明显增加(P＜0.05),与LPS组相比,FAS组各时间点p-p38MAPK的表达明显减少(P＜0.05).光镜显示LPS组病理形态学改变明显,而FAS组则明显减轻.结论 法舒地尔可明显抑制脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织p38MAPK的磷酸化激活,减轻脂多糖诱导的大鼠肺损伤程度.
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ApoE基因敲除小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α/p38丝裂原活化蛋白激酶/血清核因子-κB/视黄醇结合蛋白信号通路变化研究
目的 通过观察ApoE基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)/血清核因子-κ B(Nuclear Factor κB,NF-κ B)/视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Protein-4,RBP4)信号通路变化,探讨RBP4在动脉粥样硬化的炎症反应过程的作用及发生机制.方法 10只ApoE-/-小鼠给予高脂饲料喂养8周,进行动脉粥样硬化模型复制,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BI/6J小鼠10只.饲养8周后,分离两组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4％多聚甲醛和-80℃冰箱.Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)水平,HE染色法观察两组小鼠主动脉组织形态学变化,蛋白质印迹法和RT-PCR法检测主动脉TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白和基因表达情况.结果 血脂水平检测发现,与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高(P＜0.01),HDL-C水平显著降低(P＜0.01);HE染色观察发现,较空白对照组小鼠,模型组实验小鼠主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成.蛋白质印迹法(western blot)结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠TNF-α[(0.93±0.05) mg·L-1,t=-9.079,P＜0.001)]、NF-κB[(0.82±0.03) mg·L-1,t=-9.718,P＜0.001]水平明显升高,p38MAPK、RBP4水平显著升高(P＜0.01).PCR结果显示,模型组小鼠TNF-α(0.78 ±0.03 mg·L-1)和RBP4 (0.39±0.02 mg·L-)水平较空白对照组明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 TNF-α/p38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路可能参与了动脉粥样硬化的形成及炎症反应过程.
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抑制p38MAPK对大鼠缺血再灌注损伤心肌中TNF-α表达及细胞凋亡的影响
目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法:将30只SD大鼠按随机数字法随机均分为空白对照组、缺血再灌注组和抑制剂组,各10只.检测各组p38MAPK mRNA表达,TNF-α水平及心肌细胞凋亡率,并进行比较分析.结果:与空白对照组比较,缺血再灌注组TNF-α[(3.68±0.16) μg/L比(5.02±0.09)μg/L]、p38MAPK mRNA的表达[(1.76±0.46)比(2.35±0.02)]和心肌细胞凋亡率[-(3.51±0.40)％比-(1.8±0.23)％]显著升高(P均=0.001).抑制剂组p38MAPK mRNA的表达[(2.09±0.16)]、TNF-α水平[(4.15±0.11)μg/L]及心肌细胞凋亡[-(2.9±0.50)％]均较缺血再灌注组显著降低(P均=0.001).结论:通过抑制大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶的表达能减少肿瘤坏死因子-α的生成,减少心肌细胞凋亡,进而减轻心肌细胞缺血再灌注损伤.
关键词： 心肌 再灌注损伤 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
p38MAPK信号传导通路与重症急性胰腺炎
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路是细胞外信号引起细胞反应的共同通路,其中p38MAPK在介导炎症、应激等细胞反应中为引人注目.本文综述了p38MAPK这一信号传导通路的结构特征、激活与生物学效应,及其在重症急性胰腺炎发病机制中的作用,旨在为重症急性胰腺炎的诊治研究提供新的思路.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 p38丝裂原活化蛋白激酶类 信号传导 -
p38 MAPK抑制剂对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道黏液高分泌的影响
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌的影响及可能机制.方法 将大鼠随机分为空白对照组(NS组)、SB203580对照组(SB组)、COPD模型组(COPD组)以及SB203580干预组(COPD+ SB组).采用气道内滴入脂多糖联合香烟烟雾熏吸法制备COPD大鼠模型.于造模当天开始每天给药,SB组及COPD+ SB组给予SB203580(3 mg/kg)腹腔注射,NS组及COPD组给予等量生理盐水,于实验第29天处死各组大鼠,行苏木精-伊红(HE)染色,观察大鼠肺组织病理变化,应用免疫组化和免疫电泳法分别测定大鼠肺组织中黏蛋白(MUC5AC)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白的含量.结果 COPD组大鼠肺组织符合典型的COPD气道黏液高分泌表现,证明造模成功.与NS组比较,COPD组大鼠肺组织MUC5AC、MMP-9、p-p38 MAPK表达明显增高(F=3.23～6.95,P＜0.01);与COPD组比较,COPD+ SB组肺组织MUCSAC、MMP-9、p-p38 MAPK表达明显降低(F=3.53～8.36,P＜0.01).结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可减轻COPD大鼠气道黏液分泌,其机制可能通过调控MMP-9的表达,从而下调MUC5AC的表达来实现.
