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LY294002抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌细胞MGC-803的影响
[目的]探讨磷脂肌醇3-激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002对胃癌细胞MGC-803的PI3K/丝-苏氨酸蛋白激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路活性及细胞株生物学行为的影响.[方法] 12.5、25、50μrnol/L LY294002作用于胃癌细胞MGC-803(实验组),分别应用实时荧光定量PCR和Western blot检测PI3K/AKT/mTOR通路中关键信号分子PTEN、PI3K、AKT、mTOR、P70S6K、4EBP的mRNA和蛋白的表达情况;同时通过MTT实验、流武细胞术,测定LY294002对胃癌细胞MGC-803的增殖、细胞周期和凋亡的影响.[结果]实验组的PI3K、PTEN、AKT、mTOR、4EBP、P70S6K基因的mRNA相对表达量与对照组(二甲基亚砜)相比,差异有统计学意义(P＜0.05),且AKT、mTOR、4EBP、P70S6K的表达量随着LY294002浓度升高而逐渐下降.LY294002对MGC-803细胞AKT、p-mTOR、p-70S6K、p-AKT蛋白的表达有明显抑制作用,且p-mTOR、p-70S6K、p-AKT蛋白的表达随着LY294002浓度升高而逐渐下降.MTT实验结果显示,LY294002对MGC-803细胞的增殖有明显的抑制作用,增殖率随LY294002浓度升高而逐渐降低(F=26.15,P＜0.01).细胞周期实验结果显示,加入LY294002的MGC-803细胞相比于对照组细胞的G0/G1期比例较高(F=358.594,P＜ 0.001).凋亡实验显示,LY294002组的凋亡率高于对照组且凋亡率随LY294002浓度增加而增加(F=4.929,P＜0.05).[结论] LY294002作用于MGC-803细胞,可使其PI3K/AKT/mTOR信号通路关键信号分子受到不同程度的抑制,AKT、mTOR、4EBP、P70S6K基因的mRNA和磷酸化蛋白的表达量随LY294002浓度升高呈下降趋势,且LY294002可降低细胞增殖率、改变细胞周期比例、提高细胞凋亡率.
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LY294002对人胃腺癌细胞株BGC-823糖酵解水平的影响及其机制探讨
背景:有氧糖酵解是肿瘤细胞的特征性表型之一,靶向糖酵解有望成为一种有效的肿瘤治疗策略.M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈高表达,参与肿瘤细胞的有氧糖酵解.缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是调控肿瘤细胞糖酵解相关基因表达的重要转录因子,而PI3K信号在肿瘤细胞中可上调HIF-1α表达.目的:探讨PI3K特异性抑制剂LY294002对人胃腺癌细胞增殖和糖酵解水平的影响及其可能机制.方法:以不同浓度LY294002(10~100 μmol/L)在不同条件下(常氧或缺氧)处理人胃腺癌细胞株BGC-823,CCK-8实验和流式细胞分析检测细胞增殖和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测p-Akt、p-mTOR、HIF-1α、PKM2表达,比色法检测反映糖酵解水平的胞内乳酸脱氢酶活性和胞外乳酸浓度.结果:LY294002可呈浓度和时间依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,在较高浓度时可诱导细胞早期凋亡.LY294002可呈浓度依赖性地抑制p-Akt、p-mTOR、HIF-1α表达,在较高浓度时可抑制PKM2表达,同时降低糖酵解水平.缺氧诱导可消除LY294002对HIF-1α、PKM2表达和糖酵解水平的抑制作用.结论:LY294002可通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制人胃腺癌细胞增殖及其糖酵解水平,而HIF-1α介导了糖酵解的抑制过程.
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骨唾液酸蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞P13K-AKT信号通路的影响
目的:探讨骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞P13K-AKT信号通路的影响.方法:BSP基因沉默的乳腺癌MDA-MB-231细胞(简称231 BO-BSP27)经重组人BSP(recombinant human BSP,rhBSP)和P13K-AKT抑制剂LY294002处理后,Western blotting检测磷酸化AKT水平的变化,实时定量PCR检测caspase-3、cyclin Dl mRNA表达水平,MTT法检测细胞增殖能力.结果:与BSP基因未沉默的对照组231 BO-Scrambled细胞相比,BSP基因沉默的231 BO-BSP27细胞BSP蛋白表达明显下调(74.32±2.18)%(P<0.01);AKT磷酸化水平明显下降(33.30±2.61)%(P<0.01),而caspase-3和cyclin Dl mRNA表达分别上升和下降(1.000±0.000vs1.733±0.039,1.000±0.000vs0.370±0.012;均P<0.01);231 BO-BSP27细胞增殖能力显著下降(P<0.05).外源添加rhBSP蛋白分别上调231 BO-Scrambled和231BO-BSP27细胞AKT磷酸化水平(17.86±2.27)%和(33.78±1.51)%(均P<0.01),231 BO-BSP27细胞caspase-3 mRNA表达降低(1.000±0.039vs0.541±0.091,P<0.01)、cyclin Dl mRNA表达升高(1.000±0.000vs2.921±0.032,P<0.01),促进231 BO-Scrambled和231 BO-BSP27细胞的增殖(均P<0.01).LY294002则能逆转rhBSP对231BO-Scrambled和231BO-BSP27细胞AKT磷酸化激活作用(P<0.05),使231BO-BSP27细胞caspase-3 mRNA表达升高(P<0.01)、cyclin Dl mRNA表达降低(P<0.01),使该两种细胞增殖能力下降(均P<0.01).结击:BSP通过P13K-AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-3和cyclin Dl的表达,并影响细胞的增殖.
关键词： 骨唾液酸蛋白 乳腺癌细胞 LY294002 PI3K-Akt信号通路 -
羟基红花黄色素A通过PI3K通路抑制人肝癌细胞增殖、迁移并促进其凋亡
目的:探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对人肝癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并判断是否通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B,PKB,又称Akt)信号通路发挥作用.方法:HSYA和PI3K抑制剂LY294002处理人肝癌HepG2、Hep3B和SMMC7721细胞后,分别采用CCK-8法、克隆形成实验和划痕愈合实验检测细胞增殖、克隆形成和迁移能力.FCM法检测HSYA和LY294002对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法检测HSYA和LY294002对人肝癌HepG2细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein 2,MMP2)、caspase 3、cleaved-caspase 3和磷酸化Akt (phospho-Akt,p-Akt)蛋白表达的影响.结果:50 μ mol/L HSYA和10 u mol/L LY294002均可抑制人肝癌HepG2、Hep3B和SMMC7721细胞的增殖(P值均＜0.05).50 μ mol/L HSYA、10 u mol/L LY294002和50 u mol/L HSYA联合10 u mol/L LY294002处理组HepG2、Hep3B和SMMC7721细胞克隆形成率和迁移率均低于未处理的对照组(P值均＜ 0.05),HSYA联合LY294002处理组HepG2、Hep3B和SMMC7721细胞克隆形成率和迁移率低于HSYA和LY294002单独处理组(P值均＜ 0.01).HSYA、LY294002和HSYA联合LY294002处理组HepG2细胞凋亡率均高于未处理的对照组(P值均＜0.05),HSYA联合LY294002处理组HepG2细胞凋亡率高于HSYA和LY294002单独处理组(P值均＜ 0.01).HSYA、LY294002和HSYA联合LY294002处理组HepG2细胞中p-Akt、MMP2和caspase 3蛋白表达水平均低于未处理的对照组(P值均＜0.01),cleaved-caspase 3蛋白表达水平高于未处理的对照组(P＜0.01),HSYA联合LY294002处理组的效果均好于HSYA和LY294002单独处理组(P值均＜0.01).结论:HSYA可以抑制肝癌HepG2、Hep3B和SMMC7721细胞的增殖和迁移,并可促进HepG2细胞凋亡.HSYA可能通过抑制PI3K/Akt信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡.
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抑制PI3K/Akt信号转导通路提高化疗效果的实验研究
目的:探讨通过抑制PI3K/Akt信号转导通路提高抗癌药物对恶性肿瘤细胞的杀伤作用.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人宫颈癌HeLa细胞和人乳腺癌MCF-7细胞的抑制率;采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对HeLa细胞和MCF-7细胞凋亡的影响.结果:①联合LY294002能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF-7细胞抑制率(P＜0.05).②LY294002与塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇的协同治疗指数均小于1,具有协同治疗作用.③联合LY294002能够增加HeLa细胞和MCF-7细胞的凋亡水平.结论:抑制PI3K/Akt信号转导通路能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF-7细胞的杀伤作用.
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LY294002对唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞周期和细胞凋亡的影响
目的:研究LY294002对唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:用LY294002处理体外培养的SACC-83细胞,采用透射电镜技术进行细胞形态观察,MTT法计算细胞存活率,流式细胞术测定各细胞周期细胞分布比例和细胞凋亡情况.实验数据采用SAS8.2软件包进行单因素方差分析和两因素方差分析.结果:SACC-83细胞经LY294002(50μmol/L)处理96h,细胞存活率显著降低(P＜0.01);LY294002(50μmol/L)处理SACC-83细胞72h,G0/G1期细胞逐渐增加,而S期和G2/M期细胞逐渐减少,凋亡的细胞逐渐增加(P＜0.01).结论:LY294002能显著抑制体外培养的SACC-83细胞增殖,使SACC-83细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导SACC-83细胞凋亡.
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LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响
目的 探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-(4-吗啉基)- 8-苯基- 4氢-1-苯并吡喃- 4-酮(LY294002)对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达的影响.方法 应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞(低氧+LY294002组),采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达.以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照(低氧组).结果 LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时为明显(P＜0.05),低氧+LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组(P＜0.01).LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K/Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达.
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磷脂酰肌醇3激酶抑制剂体外对弱精子症患者精子运动参数的影响
目的: 研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的特异性抑制剂LY294002在体外对弱精子症患者精子运动参数的影响,并探讨其可能的作用机制. 方法: 弱精子症患者和精液参数正常男性各10例,手淫法留取精液,经上游优化处理后的精子与不同浓度的LY294002孵育10、30、60 min后,采用计算机辅助精液分析系统检测精子的运动参数.结果: LY294002在体外能显著提高弱精子症患者精子的活动率、前向性运动精子百分率和直线运动速度、平均路径运动速度. 结论: LY294002在体外显著增强弱精子症患者精子的运动功能.
关键词： 弱精子症 磷脂酰肌醇3激酶抑制剂 LY294002 精子运动参数 体外研究 -
LY294002抑制PI3K-Akt信号通路对人甲状腺癌细胞的影响
目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮(LY294002)对人甲状腺未分化癌HTH-15细胞中PI3K-丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、细胞生长、细胞凋亡及细胞侵袭性的影响.方法:HTH-15细胞用不同浓度(O～100 μmol/L)LY294002处理,以DMSO处理作为对照组,四甲基偶氮唑盐(MTF)试验检测细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞周期百分比;Western blot检测磷酸化Akt(p-Akt)蛋白、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;Transwell小室检测细胞侵袭性.结果:LY294002能抑制HTH-15细胞的增殖,且呈一定的浓度及时间依赖性,经LY294002处理组后细胞停留在G1期的百分比明显高于DMSO对照组(P＜0.05);LY294002能明显抑制p-Akt蛋白和MMP-2蛋白表达,且应用LY294002后,能降低HTH-15细胞的侵袭性.结论:甲状腺未分化癌HTH-15细胞中存在有活性的PI3K-Akt通路,表达高水平的p-Akt蛋白,LY294002可能通过抑制PI3K-Akt信号通路中p-Akt的表达抑制HTH-15细胞增殖,促进细胞凋亡,降低细胞侵袭能力.
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磷脂酰肌醇3(PI3K)激酶信号途径对血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响
目的观察磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂(LY294002),对血小板源生长因子(PDGF-BB)促大鼠肝星状细胞(HSC)增殖与Ⅰ型胶原表达的影响,并探讨其作用机制.方法用不同浓度的PDGF-BB和LY294002对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)进行处理,MTT法检测细胞的增殖,逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测HSC-T6内I型胶原mRNA的表达.结果 PDGF-BB在浓度1～10 ng/ml 时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖(P《0.05),当浓度大于10 ng/ml 时处理组间无显著差异(P》0.05),其促增殖作用达到饱和.5 μmol/L、10 μmol/L、25 μmol/L 的LY294002均能显著且剂量依赖性地抑制PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖(P《0.001). PDGF-BB能促进HSCⅠ型胶原mRNA表达,24 h、48 h时相对于对照组的表达量为112.2%,182.5%.LY294002能显著抑制PDGF-BB促Ⅰ型胶原表达,24 h、48 h时相对表达量为76.4%,52.6%.结论磷脂酰肌醇3激酶信号途径是调节血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与分泌胶原的重要通道,抑制该通路可以抑制肝星状细胞增殖和胶原表达,具有抗肝纤维化的作用,对防治肝纤维化有一定的意义.
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LY294002对胃癌细胞株生长增殖及侵袭能力的影响
目的 探讨LY294002(PDK/Akt信号通路特异性阻断剂)对胃癌细胞生长增殖、凋亡和侵袭转移的影响.方法 采用不同浓度LY294002处理胃癌AGS细胞,MTT法检测胃癌AGS细胞经LY294002作用后生存率的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变.结果 MTY检测结果 显示,一定浓度的LY294002可抑制AGS细胞的生长,且随着浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用明显增强(P<0.05).流式细胞术显示,AGS细胞经LY294002作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞有明显凋亡,并呈现浓度依赖性(P<0.05).Transwell实验和划痕实验显示,AGS细胞经LY29400作用后,其侵袭和转移能力受到抑制.结论 LY294002可抑制胃癌AGS细胞的生长增殖,且呈时间和剂量的依赖性.其机制可能是阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡.LY294002也可抑制胃癌AGS细胞的侵袭和转移.
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抑制PI3 K／Akt通路对钛颗粒诱导小鼠巨噬细胞炎症反应的研究
目的：观察PI3K抑制剂（LY294002）对钛颗粒诱导下小鼠巨噬细胞（RAW264．7）表达炎性因子的影响。方法采用钛颗粒与巨噬细胞共培养，建立磨损颗粒诱导小鼠巨噬细胞的炎症模型。实验分为5组：空白对照组；钛颗粒组：给予浓度为0．1 g／L钛颗粒处理小鼠巨噬细胞；实验组：分别用1．25、2．5、5．0μmol／L LY294002处理小鼠巨噬细胞，然后用0．1 g／L钛颗粒处理细胞。采用酶联免疫吸附法（ ELISA）检测各组肿瘤坏死因子（ TNF）－α和白细胞介素（ IL）－1β的表达情况；用Western blotting检测各组p－Akt、Akt的表达情况。结果LY294002能抑制钛颗粒诱导小鼠RAW264．7巨噬细胞释放炎性因子，抑制p－Akt的表达。结论 LY294002能通过抑制PI3K／Akt通路来抑制钛颗粒诱导小鼠RAW264．7释放TNF－α和IL－1β。
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PI-3K在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用
目的 研究磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用.方法 采用H2O2诱导PC12细胞制作凋亡模型,通过MTT法、Hoechst/PI荧光双染及流式细胞术分析使用PI-3K特异抑制剂LY294002预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡作用的影响.结果 100 μMH2O2处理PC12细胞24 h,细胞出现明显凋亡;LY294002预处理1 h后凋亡细胞数增多(P＜0.05).结论 PI-3K对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用.
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姜黄素联合LY294002对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的抑制作用
目的 探讨姜黄素与PI3K抑制剂LY294002及两者联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的增殖抑制作用及其作用机制.方法 体外培养鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3,0～80 μmol/L姜黄素与相同浓度LY294002单独及联合用药分别作用12、24、48 h,MTT方法检测T1、T2、T3细胞的增殖活性;Western blot法检测细胞内Akt、p-Akt蛋白表达水平.结果 姜黄素能显著抑制T1、T2、T3细胞增殖,呈时间与剂量依赖性,其中对T2、T3抑制作用更明显;姜黄素明显降低T2、T3细胞内p-Akt蛋白的表达,对Akt蛋白表达改变不明显;姜黄素与LY294002联合用药明显加强姜黄素对T2、T3细胞增殖抑制作用.结论 姜黄素能显著抑制Akt转基因型细胞系T2和T3的生长;小剂量PI3K抑制剂LY294002即能明显增强其对Akt转基因型细胞系T2、T3的增殖抑制作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路下调p-Akt表达来实现的.
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活性维生素D3联合LY294002体外抑制大鼠肝星状细胞增殖作用研究
目的 探究维生素D的活性形式-1,25-(OH)2D3联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的特异抑制剂LY294002对体外培养大鼠肝星状细胞的抑制作用.方法 将HSC-T6细胞分为正常对照、DMSO组、1,25-(OH)2D3、LY294002组和1,25-(OH)2D3+LY294002联合组,采用MTT法检测细胞增殖;在倒置显微镜下观察细胞形态变化;使用流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡;采用Western blotting法检测Phospho-Akt(Ser473)、AKT(PAN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白表达.结果 体外干预肝星状细胞48 h后,两药联合干预组细胞抑制率为87.5％,显著高于1,25-(OH)2D3组的50.3％或LY294002组的40.3％(P＜0.05);联合组细胞凋亡率为92.12％,显著高于1,25-(OH)2D3组的71.0％或LY294002组的34.0％(P＜0.05);在显微镜下观察,两药处理组细胞形状由星形变为不规则形,凋亡数量增多,表现为正常活细胞数目明显减少,胞间隙增宽,细胞体积缩小,胞浆浓缩,胞核固缩,可见空泡及细胞碎片,有的细胞出现数量不等的凋亡小体;与单药干预组比,联合组细胞Bax/Bcl-2比值上升明显(P＜0.05),活化的凋亡蛋白caspase-3表达显著增加(P＜0.05).结论 1,25-(OH)2D3可协同LY294002共同诱导HSC-T6细胞凋亡,增强其抗肝纤维化的效果.
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17β雌二醇对氯胺酮诱导皮层神经元凋亡的影响
目的：研究17β雌二醇对氯胺酮诱导的原代培养皮层神经元凋亡的影响。方法原代培养大鼠皮层神经元,分别给予不同浓度的氯胺酮及17β雌二醇培养24 h,MTT法检测神经元的存活率,显微镜下观察神经元的形态变化, TUNEL法检测神经元调亡,Western blot法测定pAkt蛋白的表达。结果与对照组比较,氯胺酮能剂量依赖性降低神经元存活率。与氯胺酮组比较,17β雌二醇能剂量依赖性提高神经元的存活率。100μmol·L-1氯胺酮组显微镜下神经元数量减少,胞体立体感消失,细胞轮廓不清,神经元轴突断裂,TUNEL阳性神经元明显增加, pAkt表达明显降低。0.1
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CD44单抗A3 D8对NB4细胞IL-3 Rα及其下游信号通路的调节
目的：探讨CD44单抗A3D8对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞IL-3Rα及其下游PI3K/Akt信号通路的调节。方法以NB4细胞为研究对象,以同型抗体IgG1为阴性对照,以A3D8为实验组,A3D8诱导NB4细胞分化凋亡过程中,real-time RT-PCR 方法检测IL-3Rα基因转录水平,运用Western blot 法检测IL-3Rα及下游PI3K/Akt信号通路中重要信号分子,随后将 PI3K/Akt 信号通路抑制剂LY294002与A3D8联合,观察二者联合对 NB4细胞 PI3K/Akt信号通路的影响。结果 A3D8诱导NB4细胞分化凋亡过程,可明显下调NB4细胞中IL-3Rα mRNA和蛋白表达水平,抑制PI3K/Akt信号通路；LY294002可增强A3D8对NB4细胞增殖和凋亡的抑制作用,并可进一步抑制PI3K/Akt信号通路。结论 A3D8可抑制NB4细胞IL-3Rα的转录水平和蛋白表达水平,并抑制其下游PI3K/Akt信号通路。
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PI3K/Akt信号通路活化在曲妥珠单抗耐药机制意义的研究
目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号转导通路激活是曲妥珠单抗耐药的重要靶点之一,为乳腺癌曲妥珠单抗耐药的靶向治疗提供理论基础.方法 对人乳腺癌细胞株BT474连续处理建立了耐曲妥珠单抗的耐药亚株BT-HerR,FISH法对耐药细胞株BT-HerR做Her-2表型分析,MTT法检测曲妥珠单抗对BT474和BT-HerR细胞的体外增殖抑制情况,流式细胞仪检测曲妥珠单抗干预后细胞的凋亡变化,PI3K/Akt抑制剂LY294002干预细胞后Western blot检测p-Akt表达.结果耐药细胞株BT-HerR Her-2基因表达为强阳性;曲妥珠单抗干预细胞72 h后,细胞的体外增殖受到抑制且随着浓度的升高而增强;经曲妥珠单抗处理后比较BT474与BT-HerR细胞凋亡率,差异具有显著性(P<0.01);曲妥珠单抗仅能抑制BT474的Akt蛋白磷酸化,LY294002则能同时抑制BT474的BT-HerR Akt蛋白磷酸化.结论 曲妥珠单抗耐药细胞Akt蛋白磷酸化活化,PI3K/Akt抑制剂LY294002能明显抑制曲妥珠单抗耐药细胞Akt蛋白磷酸化,PI3K/Akt信号转导通路与曲妥珠单抗耐药存在明确相关性.
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抑制PI3K/PKB信号通路提高胃癌细胞化疗敏感性的研究
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002提高胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和亲代细胞SGC7901对化疗药物敏感性的作用及其机制.方法 MTT法分别检测胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR对化疗药长春新碱(VCR)的敏感性;RT-PCR法和免疫细胞化学法检测LY294002处理前后多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein-1,MDR1)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitoRof apoptosis,XIAP)基因和蛋白水平;Western blot法检测LY294002处理前后细胞PKB总蛋白水平和磷酸化水平;并用流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 2×10-5 mol·L-1 LY294002能明显增加SGC7901和SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性(P<0.01),其IC50分别由(0.20±0.03)和(8.09±0.60) mg·L-1降至(0.05±0.006)和(1.70±0.20)mg·L-1;降低细胞MDR1和XIAP的基因和蛋白水平;降低磷酸化PKB水平,而对其总蛋白水平无影响;LY294002联合VCR用药后细胞凋亡率明显高于单独VCR处理(P<0.01).结论 LY294002通过降低耐药基因MDR1和抗凋亡基因XIAP的表达,提高耐药和非耐药胃癌细胞对化疗药物的敏感性,此过程与抑制PI3K/PKB通路密切相关.
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PI3K抑制剂LY294002抑制人卵巢癌耐紫杉醇细胞的增殖与迁移
卵巢癌是妇女常见的恶性肿瘤之一,严重威胁女性的生命健康.紫杉醇作为临床化疗的一线用药,目前在卵巢癌的治疗中发挥重要作用.但是,大多数卵巢癌患者出现耐药和转移,这给治疗造成很大障碍[1].研究表明,磷脂酰肌醇-3 激酶 (phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K) 信号通路在多种肿瘤中被激活,这可促进肿瘤细胞的生长、增殖,抑制细胞凋亡,促进血管生成,引起肿瘤的侵润与转移,增强对化疗药物的抵抗能力[2].本实验选用人卵巢癌耐紫杉醇细胞 A2780/PTX,并给予PI3K 抑制剂 LY294002 处理,观察细胞对药物的敏感性、细胞增殖及迁移能力的变化,以探讨 PI3K 通路与卵巢癌耐药及功能的可能关系.
