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大鼠星状细胞文献资料
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活性维生素D3联合LY294002体外抑制大鼠肝星状细胞增殖作用研究
目的 探究维生素D的活性形式-1,25-(OH)2D3联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的特异抑制剂LY294002对体外培养大鼠肝星状细胞的抑制作用.方法 将HSC-T6细胞分为正常对照、DMSO组、1,25-(OH)2D3、LY294002组和1,25-(OH)2D3+LY294002联合组,采用MTT法检测细胞增殖;在倒置显微镜下观察细胞形态变化;使用流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡;采用Western blotting法检测Phospho-Akt(Ser473)、AKT(PAN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白表达.结果 体外干预肝星状细胞48 h后,两药联合干预组细胞抑制率为87.5％,显著高于1,25-(OH)2D3组的50.3％或LY294002组的40.3％(P＜0.05);联合组细胞凋亡率为92.12％,显著高于1,25-(OH)2D3组的71.0％或LY294002组的34.0％(P＜0.05);在显微镜下观察,两药处理组细胞形状由星形变为不规则形,凋亡数量增多,表现为正常活细胞数目明显减少,胞间隙增宽,细胞体积缩小,胞浆浓缩,胞核固缩,可见空泡及细胞碎片,有的细胞出现数量不等的凋亡小体;与单药干预组比,联合组细胞Bax/Bcl-2比值上升明显(P＜0.05),活化的凋亡蛋白caspase-3表达显著增加(P＜0.05).结论 1,25-(OH)2D3可协同LY294002共同诱导HSC-T6细胞凋亡,增强其抗肝纤维化的效果.
