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骨髓造血细胞移植在大鼠炎性反应肠道和正常脏器定植对照
目的 探讨骨髓造血细胞(HC)移植在大鼠实验性结肠炎(EC)模型的炎性反应肠管和正常脏器的定植情况.方法 健康雌性SD大鼠54只,完全随机分为移植组(A组)、模型对照组(B组)和非模型对照组(C组),每组均为18只.A组和B组采用三硝基苯磺酸(TNBS)法建立EC模型,C组用生理盐水灌肠.用悬浮培养法在体外培养获得雄性SD大鼠的HC,移植前24 h用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记HC.A组造模后24 h将含HC的细胞悬液经尾静脉注入大鼠体内;B、C组则同法注射生理盐水作对照.每组于移植后第7天、第14天及第2l天处死大鼠各6只,取全段结肠及肝脏、胃、胰腺组织送检,用免疫组化方法检测HC的定植情况.结果 BrdU阳性细胞在A组结肠组织各时间段均有定植(100%),移植后第14天和第2l天的病变区阳性细胞比例显著高于同时间段非病变区(P<0.05).A组的18例肝组织中有3例亦可检测到BrdU阳性细胞(16.7%).而胃、胰腺组织未检测到阳性细胞,两对照组均阴性.结论 同种异体HC移植能在EC大鼠模型的肠道及肝脏中定植,HC的定植与EC病变的严重程度和局部血供丰富情况均有关系.
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幽门螺杆菌定植相关致病因子研究进展
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染在世界范围内广泛存在,其感染基本的条件之一是在胃黏膜的粘附定植.Hp定植因素包括尿素酶活性、鞭毛的动力、特定的形状及粘附素.Hp的适应能力极强,可在同一宿主存活数十年,可能是通过多种受体特异性的粘附素直接与宿主细胞、粘蛋白及细胞外基质结合.Hp粘附于胃黏膜,引起胃上皮细胞IL-8释放,并诱导机体的细胞和体液免疫反应增强,参与疾病的发生发展.本文就Hp定植相关因子的研究进展做一综述.
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呼吸重症监护病房多药耐药菌定植与感染的临床鉴定分析
目的 临床鉴定呼吸重症监护病房多药耐药菌定植与感染,指导临床疾病预防和治疗. 方法 收集322例医院呼吸重症监护病房患者临床资料,检测患者机械通气时间、APACHEⅡ评分、住院时间及VAP发生情况.对患者进行黏膜活检和定量培养,分析结果. 结果 从322例呼吸重症监护病房患者中分离多药耐药菌113株,其中鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、其他多药耐药菌分别为42、28、23、12、3和5株.不同性别定植组和感染组患者间,差异无统计学意义(x2 =0.0129,P=0.909 7);不同年龄定植组和感染组患者间,差异有统计学意义(x2 =7.543 5,P=0.006 0).感染组患者机械通气时间比定植组患者时间长(t=46.981,P=0.000);感染组患者住院时间比定植组患者时间长(t=40.101,P=0.000);感染组患者APACHEⅡ评分比定植组患者评分高(t=10.837,P=0.000).230例定植组患者VAP发生率46.09％ (106/230);92例感染组患者VAP发生率为31.52％(29/92),差异有统计学意义(x2=5.7257,P=0.0167).黏膜活检的特异性、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值分别为76.41％、100.00％、100.00％和67.71％;定量培养的特异性、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值分别为91.960％、82.270％、90.450％和100.000％;两者合用的特异性、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值分别为80.44％、100.00％、100.00％和69.14％. 结论 呼吸重症监护病房多药耐药菌分布以鲍曼不动杆菌常见,住院时间和机械通气时间长的患者发生多药耐药菌感染几率更高.APACHEⅡ评分、VAP发生情况对鉴别多药耐药菌定植与感染有一定的指示作用.黏膜活检和定量培养合用对感染和定植的鉴别具有重要意义.
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铜绿假单胞菌粘附对肠上皮细胞膜生物物理特性的影响
严重烧(创)伤后肠道细菌移位并致感染这一现象已被公认.细菌移位的第一步是其粘附于肠粘膜上皮细胞,进而定植于肠粘膜表面,随后侵入肠系膜淋巴结,终播及全身.铜绿假单胞菌是肠道细菌移位的主要菌群之一.为了更好的了解铜绿假单胞菌粘附于肠上皮细胞表面后细胞膜的一系列变化,本研究拟从体外铜绿假单胞菌粘附肠上皮细胞模型入手,探索粘附后细胞膜生物物理特性的变化规律及可能的机制.
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motA基因在空肠弯曲菌致病性相关趋化和定植中的作用
目的 确定鞭毛马达蛋白(flagellar motor protein)MotA编码基因在空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)致病性相关趋化和定植中的作用.方法 采用PCR扩增motA基因以及用于motA基因敲除的Kan~r基因和plus-motA基因片段,目的扩增产物克隆后测序.根据同源重组原理,构建空肠弯曲菌NCTC11168株motA基因自杀质粒(pBlueskrit-Ⅱ-SK~(motA-kan))和motA基因敲除突变株(motA~-).采用半固体平板迁移试验、基于硬琼脂平板(hard agar plus,HAP)的脱氧胆酸钠(SDC)体外趋化试验、小鼠空肠定植试验,了解空肠弯曲菌motA~-突变株和野生株鞭毛动力、SDC趋化和BALB/c-ByJ小鼠空肠内定植能力差异性.结果 所克隆的空肠弯曲菌motA基因核苷酸和氨基酸序列与已报道的相应序列相似性为100%.PCR和测序及含抗生素培养基连续传代培养结果证实,自杀质粒和motA~-突变株构建成功.motA~-突变株在半固体琼脂平板上的菌斑直径、在HAP上对0.2moL/L SDC趋化聚集环直径、黏附于小鼠空肠黏膜表面以及空肠内容物中motA~-突变株数量均明显少于野生株(P<0.05).结论 本研究成功构建了空肠弯曲菌motA基因敲除突变株.motA基因是空肠弯曲菌鞭毛动力以及致病性相关趋化和定植的必需基因.
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新的细胞壁锚定蛋白SasX促进金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力
目的 研究新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力的影响.方法 采用基因敲除及基因互补技术获得耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)ST-239 HS770 sasX基因突变株及基因互补株.显微镜下直接观察sasX 基因突变前后细菌自身的黏附聚集能力.通过黏附实验检测sasX基因突变前后对金黄色葡萄球菌黏附至人体鼻腔上皮细胞能力,并通过阻断实验检测表达纯化的SasX蛋白对金黄色葡萄球菌黏附至人体鼻腔上皮细胞的阻断能力,分析SasX蛋白对金黄色葡萄球菌定植能力的影响.结果 与野生株相比,突变株HS770△sasX自身的聚集能力明显减弱,而互补表达株HS770 △sasX( pRBsasX)的自身聚集能力与野生株无明显差异.与野生株相比,突变株HS770△sasX黏附至人体鼻腔上皮细胞能力明显减弱(P＜0.01),互补表达株HS770△sasX(pRBsasX黏附能力明显增强(P＜0.01).表达纯化的GST融合蛋白SasX和人体鼻腔上皮细胞预培养对于野生株HS770黏附至人体鼻腔上皮细胞的能力具有明显的抑制作用.结论 新的细胞壁锚定蛋白SasX影响金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力,金黄色葡萄球菌通过获得sasX基因更加容易定植到宿主易感部位,进而引发感染.
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乳酸菌的黏液黏附特性及其影响因素
食物源乳酸菌发挥有益作用的前提是能在胃肠道定植.定植可能和乳酸菌细胞表面性质有关.用大鼠或鸡小肠黏液作为黏附基质,研究了10株乳酸菌的黏附性和细胞表面性质.
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福赛斯拟杆菌与牙龈卟啉单胞菌表面蛋白间相互结合机制
福赛斯拟杆菌(Bacteroides forsythus, 简称B.forsythus)和牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonas gingivalis,简称P.gingivalis)是人类牙髓根尖周疾病以及牙周疾病的重要致病菌,在慢性根尖周炎患牙根管内定植呈正相关关系.但两菌间相互结合的蛋白分子以及结合机制目前尚未见报道.本文采用Western blot技术探讨牙龈卟啉单胞菌与福赛斯拟杆菌相互作用及其作用机制.
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肺炎支原体诱导A549细胞胞内TLR2的表达
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)是能独立存活的病原微生物,其通过黏附、定植于呼吸道上皮细胞进而引起呼吸道的炎性反应.Mp的感染存在着复杂的免疫学机制,国外近来研究显示,Toll样受体2(TLR2)在启动机体天然免疫系统并介导支原体感染所致的炎性反应中起了重要作用[1].
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双歧杆菌的完整肽聚糖对大鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的调控
双歧杆菌定植于人体肠道内,对维持肠道的微生态平衡和人体的健康起重要作用.完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG)是双歧杆菌细胞壁中的多糖,能激活巨噬细胞,增强其吞噬能力,提高其能量代谢水平以及细胞毒功能.此外,WPG也能促使巨噬细胞分泌多量的IL-1、IL-6、IL-12、IL-18、TNF-α和NO.本文以Westem blot和凝胶迁移电动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测了分叉双歧杆菌的WPG对大鼠腹腔巨噬细胞PKC、IκBα和NF-κB的影响,旨在探讨WPG激活巨噬细胞的信号途径.
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CheA/CheY二元信号系统调控空肠弯曲菌体外趋化和体内定植的研究
目的 探讨空肠弯曲菌CheA和CheY调控细菌体外趋化和体内定植中的作用及其机制.方法 分别以pET42a和E.coli BL21DE3为表达载体和表达宿主菌,构建空肠弯曲菌NCTC11168株cheA和cheY基因原核表达系统.制备重组表达的rCheA和rCheY兔抗血清并用DEAE-52离子交换法提取其IgG.采用pBiuescript-Ⅱ-SK构建自杀质粒,制备cheA基因敲除的cheA-突变株.采用基于脱氧胆酸钠硬琼脂法(DOC-HAP)的空肠弯曲菌体外趋化模型,检测cheA-突变株趋化能力的变化,同时分别观察rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠对细菌趋化的抑制作用.采用rCheA-IgG和CheY-IgG捕获法,测定DOC作用后空肠弯曲菌CheA和CheY磷酸化水平变化.采用小鼠感染模型比较cheA-突变株和野生株定植能力的差异.结果 所构建的原核表达系统能有效表达rCheA和rCheY.PCR和测序结果证实eheA-突变株染色体DNA中cheA基因被敲除.cheA-突变株丧失对DOC的趋化能力,rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均对空肠弯曲菌野生株趋化有明显的抑制作用(P<0.05).在DOC作用下,空肠弯曲菌野生株CheA和CheY磷酸化水平迅速下降(P<0.05).cheA-突变株定植小鼠空肠的能力也明显不如野生株(P<0.05).结论 CheA/CheY组成了空肠弯曲菌趋化相关二元信号传导系统(Che-TCSS),两者均去磷酸化被激活.Che-TCSS中CheA在空肠弯曲菌体外趋化和体内定植中发挥了关键作用,可作为研发抗空肠弯曲菌感染新药的靶标.
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变异链球菌的传播、定植及其与唾液sIgA的关系
目的 利用夫妻配对模式,纵向监测变异链球菌的基因型,探讨其传播和定植的特点,以及唾液sIgA与不同基因型菌株的免疫印迹的差异.方法 选择9对夫妻,取口腔唾液和牙菌斑的样本,计数唾液中变链菌数,牙菌斑中变链菌分离株采用PCR技术鉴定菌种,限制性核酸内切酶分析REA基因型.每隔2个月取样1次,经过3次跟踪鉴定分离菌株的基因型.Westem blot分析个体唾液sIgA与自身变链菌株、配偶菌株、2株参考菌株GS-5、Ingbritt C的免疫印迹反应.结果 (1)变链菌菌株的定植是稳定的,一般只有1～2种基因型.在正常成年人群,变链菌可以出现短暂的一过性传播,但外源性变链菌株难以长期定植.(2)个体sIgA对自身菌株的免疫印迹可以不同于对配偶的反应.(3)不同唾液sIgA对参考菌株的免疫印迹存在个体差异.结论 个体变异链球菌在口腔中的定植是稳定的,该菌株的定植和对外源性菌株的排斥不是由sIgA单因素决定的.
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幽门螺杆菌粘附素基因babA2的克隆及免疫应答的初步研究
目前,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)疫苗的研制仍处在抗原的筛选阶段,已经评价的基因重组抗原基本上是着眼于阻断Hp的毒力因素,而与Hp定植密切相关的粘附素评价较少.babA是迄今为止唯一明确受体的Hp粘附素,研究表明babA基因存在两个等位基因:babA1和babA2,其中只有babA2具备与Leb结合的功能[1].本实验对babA2基因进行了克隆和表达并研究了其免疫反应.
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鲍曼不动杆菌定植与感染鉴定方法的对照研究
目的 探讨白细胞吞噬现象、细菌定量培养两种方法对鉴别鲍曼不动杆菌下呼吸道定植与感染的临床意义.方法 筛选2012年6月1日至2012年12月31日入住重症医学科下呼吸道感染且下呼吸道分泌物检出鲍曼不动杆菌的患者,根据患者临床表现、CPIS评分将患者分为定植组和感染组,进行一项前瞻式队列研究,在获取培养结果后第1、3、7、9、14、16天分别采集患者下呼吸道分泌物分别进行革兰染色镜检、细菌定量培养,记录实验结果,并进行统计学分析.结果 ①研究期间共有38例患者入选,感染组13例,定植组25例.感染组发现白细胞吞噬现象8例,定植组发现白细胞吞噬现象0例,两者比较差异有统计学意义(P=0.000);感染组细菌定量培养≥106CFU/L有 9例,定植组细菌定量培养大于106CFU/L 的6例,两者比较差异有统计学意义(P=0.013);②两种鉴别方法行Kappa检验,Kappa值为0.494,提示两种方法有中度相关性.结论 白细胞吞噬现象和细菌定量培养可以有效判断鲍曼不动杆菌定植与感染,两者结合用来判断感染的敏感性显著提高,两种方法具有中度一致性.
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幽门螺杆菌诱发胃十二指肠疾病相关的信号传导通路
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种螺旋形革兰氏阴性微需氧菌,定植于人胃黏膜并引起不同胃疾病.在世界范围内约有50%人群感染Hp,当今运用不同分子生物学技术的研究结果发现,其基因遗传学变异导致的生理学功能差异与致病的多样性有关[1].
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消化道真菌定植与感染的临床研究
目的 调查不同疾病住院患者消化道真菌定植与感染发生率,为真菌感染控制提供实验依据.方法 收集我院不同疾病住院患者的粪便标本2144份,做革兰氏染色镜检,同时接种真菌分离培养平板并经API 20C AUX进行真菌鉴定.结果 经涂片镜检检出真菌624例,阳性率为29.10%,其中13例查见真菌孢子及菌丝,根据患者临床资料提示其中10例为消化道真菌感染所致腹泻,与临床的符合率为76.92%,余下611例为仅见真菌孢子,未见菌丝.真菌培养阳性700例,阳性率为32.65%,其中有112例分离到2种或以上真菌,占真菌分离培养阳性总数的16.00%.分离真菌主要为白色念珠菌516例(73.71%),其次为光滑念珠菌48例(6.86%).真菌分离率较高的疾病有恶性肿瘤(18.14%)、慢性呼吸系统疾病(17.00%)、慢性心脑血管疾病(14.57%).随着年龄的增高,真菌培养的阳性率有增高趋势.结论 涂片镜检与真菌培养联合检测有助于提高消化道真菌感染检出率.
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RICU患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌定植特点与护理
目的 探讨呼吸重症监护病房(RICU)患者MRSA体表定植的特点及对患者预后的影响,为RICU患者临床护理的方法提供依据.方法 前瞻性研究,纳入首都医科大学附属北京同仁医院RICU 2010年1月至2011年11月收治的患者246例.患者入院当日以拭子留取鼻腔、咽后壁、腋窝、腹股沟、前胸部和手等部位的微生物标本并进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)培养,且此后每3天重复1次.根据MRSA培养结果将患者分为MRSA定植组30例与MRSA非定植组216例,分析两组患者性别、年龄、APACHEⅡ评分、APACHEⅢ评分、1年内住院次数及病死率的差异,并分析MRSA的定植部位.结果 RICU患者MRSA定植率为12.19％,其中16例为院内获得性定植.MRSA定植组和非定植组在性别组成、APACHEⅡ评分和APACHEⅢ评分方面差异无统计学意义(P＞0.05)；MRSA定植组平均年龄显著大于非定植组[(81.13±6.86)岁比(74.78±11.89)岁；t=2.955,P=0.003)]；MRSA定植组1年内住院次数和病死率分别为(1.83±1.206)次,40.0％均显著高于MRSA非定植组的(1.06±0.257)次,16.7％,差异均有统计学意义(t=2.998,x2=9.132;P＜0.01).MRSA定植患者定植部位以鼻腔为主.结论 MRSA的定植对RICU患者的预后有着重要影响；MRSA定植的患者中,50％以上的患者是在医院内形成定植的,应该加强床旁护理,预防交叉感染.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 护理 RICU 定植 -
医院内泛耐药肺炎克雷伯菌定植及感染风险因素调查与控制
目的 调查医院内泛耐药肺炎克雷伯菌(Pandrug- resistant isolates of Klebsiella pneumoniae)定植、感染状况,对感染控制措施进行评价.方法 对2008年1月～2011年12月北京协和医院住院患者的泛耐药肺炎克雷伯氏菌定植、感染进行前瞻性调查,对危险因素进行分析;对感染控制措施进行评价.结果 共发现泛耐药肺炎克雷伯菌阳性检出者37例,阳性检出者涉及全院15个病区,加强医疗及老年病区相对集中59.45% ( 22/37 ),新生儿2例,65岁以上的老年人56.76%(21/37).全部患者具备1 项以上泛耐药肺炎克雷伯菌感染风险因素.初次检出标本主要来源依次为痰( 15/37)、血液( 10 /37,3例来自中央静脉留置者)、尿(3/37)、创面泌物(3/37)、直肠拭子( 2 /37)、胆汁(1/37)、PTCD引流(1/97)、导管尖(1/37)、其他引流液(1/37).37例泛耐药肺炎克雷伯菌阳性检出病例中,8例为定植,其余29例为临床感染并进行治疗.阳性检出菌株体外药敏对阿米卡星和/或米诺环素外其他药物全部耐药,对阿米卡星敏感性为60%,对米诺环素敏感性为57%.29例感染者米诺环素治疗,有效率72.4% ( 21 /29).37例患者死亡14例(病死率37.8%,归因病死率21.6% ).未发生泛耐药肺炎克雷伯菌院内水平传播.结论 泛耐药肺炎克雷伯菌定植、感染者的病死率高;老年人、入院前半年内曾使用抗菌药物、留置导管等可能是泛耐药肺炎克雷伯菌定植、感染的主要危险因素;应加强抗菌药物应用的管理,强化医院感染控制措施(特别是接触隔离) 在加强医疗部门的实施和监督.
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98例下呼吸道鲍曼不动杆菌感染和定植患者回顾性分析
目的 分析重症监护病房(ICU)下呼吸道鲍曼不动杆菌感染或定植的危险因素,探讨其防治策略.方法 对武警总医院ICU2007年1月~2009年12月收治的98例痰培养鲍曼不动杆菌阳性下呼吸道感染患者进行定植或感染的初步诊断后,将病原学检测结果,临床资料,治疗措施和病情转归等进行回顾性分析比较.结果 鲍曼不动杆菌(AB)感染者32例,定植者66例.AB感染患者具有以下临床特点:长时间使用三代头孢菌素、长时间机械通气、存在慢性肺部疾病和使用免疫抑制剂、合并低蛋白血症、高APACHE II评分、容易合并真菌感染.体外药敏试验提示:该菌对米诺环素敏感率为91.84%,对其他常用抗菌药物均高度耐药,其中对碳青霉烯类敏感率仅为21.43%,属多重耐药不动杆菌株(MDR-A).结论 充分重视AB定植和感染的鉴别,合理使用抗生素;积极改善患者的营养状况,提高患者免疫力;缩短机械通气时间;严格消毒隔离,切断AB水平传播途径.
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介绍开颅术前皮肤包裹固定简易方法
《中国误诊学杂志》编辑部:剃毛后细菌会在皮肤表面的小破损处定植,成倍地增加SSI的机会.另加骨组织抗感染能力较差,易引起细菌感染.
