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159有机磷农药对硫磷和马拉硫磷诱发的大鼠乳腺癌模型
本试验所用动物为SD雌性大鼠,有机磷农药染毒后观察乳腺细胞的增生和变异.研究目的是测定有机磷农药是否能导致大鼠乳腺恶性病变以及判定此改变是否影响胆碱能活性增加.此外,还研究毒扁豆碱、对硫磷、马拉硫磷诱发乳腺癌的可能,以及是否能被阿托品阻断.
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急性有机磷农药中毒抢救体会
有机磷农药属有机磷酸酯或硫化磷酸酯类化合物，进入人体后与CHE结合，形成磷酰化酶(即中毒酶)，因CHE失去催化水解Ach的活性，导致胆碱末稍受体附近或突触间隙Ach大量蓄积，Ach的作用增强和延长，使中枢神经系统和周围胆碱能神经支配的效应器产生一系列的功能紊乱，产生……
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养生保健1号对慢性不可预知温和应激抑郁大鼠学习记忆相关的脑神经递质及胆碱能调节作用
目的:观察养生保健1号对慢性不可预知温和应激刺激抑郁大鼠学习记忆能力相关的脑神经递质及胆碱能系统的调节作用.方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,保健方高、中、低剂量组(7.26、4.84、3.23g/kg),除正常组外建立慢性不可预知应激温和刺激抑郁模型(CUMS).采用旷场实验、糖水消耗实验评价大鼠行为学变化,采用Morris水迷宫考察CUMS大鼠的学习记忆能力,同时测定大脑神经递质5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)水平及乙酰胆碱(Ach)、AchE含量变化.结果:应激刺激3周,与正常组比较,大鼠糖水偏嗜度显著下降(P＜0.05).养生保健方各剂量组糖水的偏嗜度较模型组明显增加(P＜0.01).旷场实验中,模型组大鼠运动的总得分低于正常组(P＜0.01),保健方各个剂量组的运动总路程均明显高于模型组(P＜0.05).Morris水迷宫定位导航实验中,模型组大鼠平均潜伏期长于正常组(P＜0.05),与模型组比较,保健方各剂量组的潜伏期缩短(P＜0.05).Morris水迷宫空间探索实验中,模型组大鼠的穿越平台次数、原台所在象限游泳距离和时间明显少于正常组(P＜0.05,P＜0.01),而保健方各剂量组较模型组均明显增加(P＜0.01).与正常组比较,模型组脑内5-HT、NE、Ach降低AchE升高;与模型组比较,保健方高、中剂量组大鼠5-HT含量显著增加(P＜0.05,P＜0.01),保健方中剂量组NE含量显著升高(P＜0.05).保健方3个剂量组大鼠脑浆上清中Ach含量均显著升高(P＜0.05),而AchE含量明显降低(P＜0.05).结论:养生保健l号对CUMS大鼠具有抗抑郁、改善学习障碍、提高空间学习记忆能力的作用,其机制与其对大鼠脑单胺类神经递质5-HT、NE及Ach的上调有关.
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补肾中药对老年大鼠脑组织中胆碱能M受体分布的影响
采用受体放射配基结合分析、原位杂交和放射自显影术等方法,研究胆碱能M受体、M1受体mRNA在脑组织中的分布,观察补肾中药对胆碱能M受体的含量、功能及分布的影响,探讨补肾中药延缓脑组织衰老的机理.结果显示:老年大鼠大脑皮层、海马、纹状体中M受体明显减少,放射自显影的灰度值降低,胆碱能M1受体mRNA在老年大鼠纹状体部位的表达减少,在其他部位的不明显.补肾中药明显增加老年大鼠胆碱能M受体的数量,对脑内胆碱能M1受体mRNA转录水平降低的部位有改善作用.补肾中药可通过改善胆碱能M1受体的mRNA表达、增加脑内胆碱能M1受体数量来延缓脑组织衰老.
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骨形态发生蛋白-4在体内外诱导成年大鼠脑神经干细胞向胆碱能细胞分化的效应
目的 了解骨形态发生蛋白4 (BMP4)是否具有诱导成年大鼠脑神经干细胞(NSCs)向胆碱能细胞分化的效应.方法 将从两月龄大鼠脑海马、纹状体等区域分离的细胞培养于含EGF、bFGF的DMEM/F12培养液中,在光镜下观察细胞的形态特征,并行Nestin细胞化学染色,24h后换成含有BMP4的培养液,培养8d时,行ChAT间接免疫荧光染色,在光镜下观察细胞形态的变化,并行FITC标记的流式细胞术检测NSCs分化.以脑立体定位术给成年大鼠右侧海马齿状回内注射BMP4或生理盐水0.5μL；14d后取大鼠脑组织切片,行ChAT免疫组织化学染色；以图像分析仪测量ChAT阳性细胞总面积.结果 分离出的大鼠脑海马、纹状体等区的细胞约48％为Nestin阳性的NSCs.培养8d时,光镜下见加BMP4组约34％的细胞呈神经元形态特征；间接免疫荧光染色见呈较强绿色荧光的ChAT阳性细胞较多；FITC标记流式细胞术检测到16％的细胞呈ChAT阳性.而未加BMP4组呈ChAT阳性的细胞约7％,明显少于加BMP4组,且荧光较弱.给大鼠海马齿状回区脑组织中注射BMP4后14d时,可见该区细胞出现较高的胆碱能表达.结论 BMP4可在体外培养及体内注射条件下诱导大鼠脑神经干细胞向胆碱能细胞分化.
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骨形态发生蛋白4对大鼠脑神经干细胞的胆碱能诱导分化效应
观察了骨形态发生蛋白4(BMP4)对原代分离培养的大鼠脑神经干细胞(NSC)的胆碱能诱导分化效应.将从2个月龄大鼠脑海马、纹状体等区域分离的细胞培养于含EGF和bFGF的DMEM/F12培养液中, 在光镜下观察细胞的形态特征, 并行神经巢蛋白(nestin)细胞化学染色.24h后, 改换成含有BMP4的培养液, 继续培养7或8天.在光镜下观察细胞的形态变化, 并行胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT)和nestin双标免疫细胞化学染色.结果表明, 加BMP4继续培养7或8天后,光镜下见有34%的培养细胞具有神经元的形态特征.用免疫细胞化学染色可见ChAT阳性的细胞与nestin阳性的细胞共存,其中ChAT阳性细胞占28%, nestin阳性细胞占38%.总之, 在培养液中加入BMP4, 可以诱导NSC分化成具有胆碱能特性的细胞.
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神经干细胞体外诱导分化为胆碱能神经细胞
本文观察骨形态发生蛋白4(BMP4)在体外对原代分离培养的大鼠脑神经干细胞(NSCs)的胆碱能诱导分化效应.将从两月龄大鼠脑海马、纹状体等区域分离的细胞, 培养于含EGF和bFGF的DMEM/F12培养液中, 在光镜下观察细胞的形态特征, 并行nestin免疫细胞化学染色.24h后, 一半细胞改换成含有BMP4的培养液培养作为实验组, 另一半细胞继续用原培养液培养作为对照组.在培养第8天, 采用间接免疫荧光染色, 观察培养细胞的胆碱乙酰转移酶(ChAT)抗原的表达.结果表明实验组呈ChAT阳性的细胞较多, 发出较强的绿色荧光, 具有神经元的形态特征;对照组呈ChAT阳性的细胞较少, 发出的荧光较弱.另外行FITC标记的流式细胞术, 检测NSCs的分化、结果表明实验组有16%的细胞呈ChAT阳性,而对照组只有约7%.由此认为BMP4具有诱导NSCs分化成具有胆碱能特性的细胞的功能.
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高表达人淀粉样前体蛋白降低SH-SY5Y细胞M胆碱受体结合
目的 观察阿尔茨海默病致病相关基因淀粉样前体蛋白(APP)基因的高表达致高度生成,对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性及M和N胆碱受体功能的影响,探讨β-淀粉样肽(Aβ)生成增加对细胞胆碱功能的作用.方法 采用Lipofectamine 2000试剂盒将携带野生型人APP基因的pCMV695质粒转染至人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中.以ELISA方法测定Aβ生成量.取稳定高表达Aβ细胞的克隆,用放射免疫法测定ChAT的活性;放射配基结合测定M、N乙酰胆碱受体结合.结果 与未转染APP的SH-SY5Y细胞相比,当Aβ生成量为对照的2～2.6倍时,SH-SY5Y-APP细胞中未观察到明确的细胞毒性形态学改变;ChAT活性无明显变化,但细胞M受体结合降低18.5%～21.8%(P＜0.05);N受体结合未出现明显变化.结论 单纯Aβ产生增加就可通过影响M受体结合功能而引起脑内胆碱能功能障碍.
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高原低氧对血浆降钙素基因相关肽含量的影响
降钙素基因相关肽(calcitoningene-related peptide,CGRP)是目前已知的强的非肾上腺素能、非胆碱能受体型血管舒张活性物质[1].在人体肺循环对高原低氧的适应性生理反应中CGRP发挥着重要作用.肺自身也在CGRP浓度的动态平衡方面起调节作用.
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二苯乙烯苷对β-淀粉样肽致痴呆模型小鼠行为及胆碱能功能的影响
老年性痴呆(alzheimer disease,AD)是以脑老化为基础的神经退行性疾病,发病机制复杂.研究表明,β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ-)沉积是AD发病的中心环节.二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxy stilbene-2-O-β-D-glycoside,TSG)是中药何首乌的主要有效成分.我室以往的研究表明,TSG可明显保护体外培养的神经细胞抵抗Aβ-、H2O2及高糖所致的细胞存活率下降和乳酸脱氢酶漏出增多[1];明显改善急性脑缺血致啮齿类动物学习记忆功能,减少缺血半暗带,抑制脂质过氧化和细胞内钙超载[2].本研究的目的是观察TSG对Aβ1-40片段右侧脑室注射(Aβicv)致痴呆小鼠模型的影响.
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横纹肌肉瘤胚胎型骨骼肌乙酰胆碱受体γ亚基mRNA表达的临床诊断价值
目的探讨胚胎型骨骼肌乙酰胆碱受体γ亚基(AChR-γ)mRNA的表达在横纹肌肉瘤病理诊断中的价值.方法运用双重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)在17例石蜡包埋横纹肌肉瘤[胚胎型(ERMS) 9例,腺泡型(ARMS) 6例,多形型(PRMS)2例]、20例非横纹肌源性肿瘤(低分化滑膜肉瘤6例,尤文/原始神经外胚层肿瘤6例,淋巴瘤6例,神经母细胞瘤2例)和3例正常肌肉中同时检测AChR-γ和α亚基(AChR-α) mRNA的表达并比较两者比值.结果 17例横纹肌肉瘤均表达AChR-α和AChR-γ,且两者表达量的比值即AChR-γ/AChR-α≥1,20例非横纹肌源性小圆细胞肿瘤无AChR-γ的表达,1例正常肌肉AChR-γ/AChR-α<1.结论检测AChR-γ mRNA的表达有助于横纹肌肉瘤的诊断和鉴别诊断.
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α7尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞β淀粉样蛋白生成的影响
目的 通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)的基因表达,以了解α7 nAChR对β淀粉样蛋白(Aβ)的影响,进一步探讨阿尔茨海默病的发病机制.方法 SH-SY5Y细胞转染α7 nAChR的小干扰RNA(siRNA),用real-time PCR法和蛋白免疫印迹法分别测定细胞中α7 nAChR、β分泌酶两个亚型(BACE1和BACE2)在mRNA和蛋白表达水平的变化；用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定Aβ1-42含量的变化.结果 转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平分别降低了84％和79％(P＜0.01)；BACE1 mRNA及蛋白表达水平分别升高了527％和71％(P＜0.01)；BACE2 mRNA及蛋白表达水平分别降低了58％和75％ (P＜0.01)；Aβ1-42含量升高了208％(P＜0.01).结论 α7 nAChR基因表达抑制后Aβ含量明显升高,其机制可能与BACE1表达上升和BACE2表达抑制有关,这种改变可能与阿尔茨海默病的发病有一定的关系.
关键词： 阿尔茨海默病 淀粉样β蛋白前体 淀粉样前体蛋白分泌酶类 受体 胆碱能 -
β-淀粉样肽对人SH-SY5Y神经细胞膜性脂质和胆碱能受体的影响
目的研究β-淀粉样肽对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞膜性脂质和胆碱能受体的影响及其意义.方法选择不同浓度β-淀粉样肽1-42 处理 SH-SY5Y 细胞,用比色法测定细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)还原率、脂质过氧化产物(丙二醛)、蛋白氧化产物(蛋白羰基)及磷脂含量,高效液相色谱法测定细胞胆固醇及辅酶Q水平,放射性配体-受体结合实验测定胆碱能受体-配体结合率,Western印迹方法测定细胞膜神经型尼古丁受体亚单位α3及α7蛋白表达水平,并对照研究维生素E的抗氧化作用.结果用低浓度(0.1 μmol/L)β-淀粉样肽处理细胞后即出现MTT还原率和磷脂水平的下降,丙二醛及蛋白羰基水平升高,用较高浓度(1 μmol/L)β-淀粉样肽处理细胞后胆碱能受体-配体结合密度、尼古丁受体亚单位α3,α7蛋白水平及辅酶Q含量降低,但未引起细胞胆固醇含量的改变.维生素E能明显对抗β-淀粉样肽的细胞毒性作用.结论β-淀粉样肽引起细胞膜脂质成分改变以及胆碱能受体水平降低,这些改变可能与其诱导的氧化应激增强有关.
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呼吸道合胞病毒感染对豚鼠肺组织β、M受体的影响
目的 研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染豚鼠后肺组织β肾上腺素能受体(β受体)和M胆碱能受体(M受体)的变化.方法 应用放射性配基结合分析法,测定病毒接种组和对照组豚鼠肺组织β、M受体密度和亲和力的变化.结果 ①RSV接种后豚鼠肺组织均出现毛细支气管炎、肺炎的病理改变.②β受体大结合容量(Bmax)在RSV接种后无明显改变.β受体平衡解离常数(Kd)在RSV接种后3 d增高,5～7 d达高峰,以后逐渐下降,接种后14、21 d与对照组比较差异无统计学意义.③高亲和力M受体亚型的B max和Kd值在感染前后无明显变化.低亲和力M受体亚型在RSV接种后3 d出现B max增高,Kd值降低,5～7 d达高峰,第21天与对照组差异有统计学意义.结论 RSV感染可使β受体亲和力下降,低亲和力M受体密度增加、亲和力上升,两种受体系统之间的平衡失调是引起气道高反应性的机制之一.
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心脏M2-胆碱能受体抗体的检测
近年研究发现,慢性病毒性心肌炎(VMC)、扩张型心肌病(DCM)与持续性病毒感染和自身免疫抗体有关.Fu等[1]在DCM患者血清中发现抗M2-胆碱能受体抗体.
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吗啡及M-胆碱能受体阻断剂对Oddi括约肌压力变化的影响观察
目的:经胆道镜行Oddi括约肌测压,观察常规剂量吗啡对Oddi括约肌的作用,以及常规剂量的山莨菪碱、阿托品与解痉灵对吗啡的拮抗作用.方法:胆道术后留有T管的患者共40例,随机分为山莨菪碱组、阿托品组、解痉灵组、对照组.测定用药前后的十二指肠压(DP)、Oddi括约肌基础压(SOBP)、收缩波幅(SOCA)、收缩频率(SOF)、收缩间期(SOD)及胆总管压(CBDP).结果:肌注吗啡后Oddi括约肌基础压、收缩波幅、收缩频率及胆总管压均明显增高,肌注15 mg山莨菪碱、0.75 mg阿托品后,Oddi括约肌收缩幅度,基础压明显降低,肌注20 mg解痉灵后Oddi括约肌收缩波幅,Oddi括约肌基础压及收缩频率明显下降.但是解痉灵组,阿托品组,山莨菪碱组各组数据无差别.结论:常规剂量的吗啡可引起十二指肠压、Oddi括约肌收缩波幅、Oddi括约肌基础压、胆总管压增加,山莨菪碱、阿托品、解痉灵可以拮抗吗啡对Oddi括约肌的激动作用.
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电针足三里对脓毒症大鼠小肠促炎症因子、二胺氧化酶活性及组织含水率的影响
目的:探讨电针足三里(ST36)对脓毒症大鼠促炎症因子所致小肠损伤的抑制作用.方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型, 取♂SD大鼠32只, 随机分为CLP+电针(EA)足三里组(CLP+EA组)、CLP+假电针(shame EA)(CLP+SEA)组、迷走神经切断(VA)+CLP(VA+CLP)组和迷切后CLP再电针(VA+CLP+EA组)组, 每组8只. EA组持续针刺双侧足三里30 min, 强度为2 mA, 2-100 Hz.CLP/SEA组采用相同频率和强度刺激非经非穴(足三里外侧旁开0.5 cm)30 min. VA组先手术切断腹腔迷走神经再CLP. 各组大鼠于CLP术后6 h处死取空肠组织, 检测TNF-α和NO含量、髓过氧化物(MPO)和二胺氧化酶活性及肠组织含水率.结果:采用盲肠结扎穿孔术后6 h, 与其余3组相比, CLP/EA组小肠组织促炎因子TNF-α、NO、MPO水平和组织含水率均显著降低、DAO活性显著升高(均P<0.05). VA+CLP组和VA+CLP+EA组TNF-α、NO和MPO水平显著高于CLP+SEA组(748.80±112.45 pg/g protein,737.58±100.56 pg/g protein vs 560.23±82.25pg/g protein; 1.32±0.15 μmol/g protein, 1.12±0.24 μmol/g protein vs 0.97±0.12 μmol/gprotein; 0.57±0.06 U/g, 0.61±0.12 U/g vs 0.45±0.07 U/g, 均P<0.05), DAO活性显著低于CLP+SEA组(0.07±0.02 U/L, 0.06±0.04 U/Lvs 0.12±0.04 U/L,均P<0.05); VA+CLP+EA组、VA+CLP组、CLP+SEA组上述指标的变化无统计学差别.结论:电针足三里显著抑制CLP大鼠小肠促炎症因子水平, 减轻肠组织水肿和功能损害.
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阿片类药物对冠状动脉旁路移植术患者胆碱能抗炎通路影响的研究现状
冠状动脉缺血所致心肌梗死及低心排出量综合征(低心排)是不停跳冠状动脉旁路移植手术(OPCABG)围术期死亡的主要原因,由多种炎症介质导致的炎症反应是其主要因素之一.现在越来越多的研究证实,手术刺激导致的一系列细胞炎症因子,如TNF、IL-1、IL-6及IL-8等的大量产生,机体发生持续而严重的炎症反应,进而导致全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),它是OPCAGB围术期冠状动脉缺血心肌梗死导致血流动力学不稳定的重要原因[1].目前认为,NF-κB的激活是调控炎性细胞多种炎症介质基因表达的起始环节,为细胞因子网络之根源,是导致SIRS的主要因素[2].而且其中约20％的SIRS患者将发展为脓毒血症(sepsis),可进一步导致多脏器衰竭综合征(multiple organ dysfunction syndrom,MODS).
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心脏 β1肾上腺素能受体和M2乙酰胆碱能受体的自身抗体与肥厚型心肌病的关系研究
目的:探讨心脏 β1肾上腺素能受体和M2乙酰胆碱能受体的自身抗体与肥厚型心肌病的相关性.方法:以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,应用酶联免疫吸附技术,检测81例肥厚型心肌病患者(肥厚型心肌病组)和50例健康受试者(正常对照组)血清中心脏 β1肾上腺素能受体和M2乙酰胆碱能受体的自身抗体.结果:(1)肥厚型心肌病组 β1受体自身抗体的阳性率为58.02%(47/81),明显高于正常对照组12.00%(6/50),差异有统计学意义(P<0.05);肥厚型心肌病组M2乙酰胆碱能受体自身抗体阳性率为44.44%(36/81),显著高于正常对照组10.00%(5/50),差异有统计学意义(P<0.05).(2)肥厚型心肌病组 β1肾上腺素能受体和M2乙酰胆碱能受体的自身抗体的平均几何滴度分别为1:85和1:80,显著高于正常对照组的1:36和1:35,差异有统计学意义(P<0.05).(3)肥厚型心肌病组 β1肾上腺素能受体自身抗体阳性血清中43.48%(20/46)的患者同时具有M2乙酰胆碱能受体的自身抗体.结论:肥厚型心肌病患者血清中存在心脏 β1肾上腺素能受体和M2乙酰胆碱能受体的自身抗体,可能与其心肌结构变化和舒张功能下降有关.心脏 β1肾上腺素能受体和M2乙酰胆碱能受体的双抗体阳性可能是自身免疫反应的多重性表现,提示免疫学机制参与肥厚型心肌病的病理生理过程.
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心脏M2乙酰胆碱能受体自身抗体与肥厚型心肌病的相关性研究
目的:研究肥厚型心肌病(HCM)患者血清M2乙酰胆碱能受体自身抗体(M2-AAb)的浓度及其与临床指标的关系.方法:连续入选133例HCM患者为HCM组.HCM组进一步分为梗阻性肥厚型心肌病(HOCM)亚组(72)、隐匿梗阻性肥厚型心肌病(LHOCM)亚组(22)、非梗阻性肥厚型心肌病(NOCM)亚组(39),由于静息状态采血时LHOCM和NOCM患者均无左心室流出道(LVOT)梗阻,又将LHOCM、NOCM患者归为LHOCM+NOCM亚组(61),并与HOCM亚组作比较.另选择经12导联心电图、经胸超声心动图及血液学常规检验结果证实无器质性心脏病及自身免疫性疾病,且未服用β受体阻滞剂、糖皮质激素及免疫抑制剂的40例受试者为正常对照组.所有入选者取外周静脉血血清通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定M2-AAb浓度.收集患者的临床资料,研究血清M2-AAb浓度与临床指标的关系.结果:HCM组患者血清M2-AAb浓度[22.91(17.21, 29.64)ng/ml]显著高于正常对照组[(17.14±5.66) ng/ml, P<0.01],且HOCM亚组、LHOCM亚组和NOCM亚组患者两两比较血清M2-AAb浓度差异均无统计学意义.女性HCM患者M2-AAb浓度显著高于男性(P=0.001).进一步分析显示,有猝死家族史者M2-AAb浓度显著高于无猝死家族史者(P<0.05).合并心房颤动、左心房内径≥50 mm或合并中-重度二尖瓣反流的患者的血清M2-AAb浓度显著高于不合并这些特征者(P均<0.05).HCM患者logM2-AAb与静息状态LVOT压力阶差呈显著正相关(r=0.178, P=0.040),与HOCM组静息LVOT压力阶差呈临界性正相关(r=0.224,P=0.058).结论:HCM患者血清M2-AAb浓度显著高于正常人群,性别、是否有猝死家族史可能影响其浓度.合并心房颤动、或左心房内径≥50 mm或合并中-重度二尖瓣反流的HCM患者血清M2-AAb水平显著升高.HCM患者血清M2-AAb浓度与静息状态LVOT压力阶差相关.
