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柱前衍生RP-HPLC法测定人参中17种氨基酸的含量
目的:建立同时测定人参中17种游离氨基酸和总氨基酸含量的方法,并应用于不同生长周期、炮制方法和生长部位的人参研究.方法:采用异硫氰酸苯酯对样品进行柱前衍生,以反相高效液相色谱法测定,外标法计算含量.色谱柱为Ultimate(R)AAA氨基酸分析专用柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为三水合醋酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈溶液(93∶7,V/V)、B为80％乙腈-水(80∶20,V/V),梯度洗脱,检测波长为254 nm.结果:17种氨基酸的检测浓度线性范围为0.002 5～2.500 0 μmoLˉmL-1,r均＞0.998 0.17种游离氨基酸的平均加样回收率在87.30％～100.01％之间,RSD在0.59％～2.94％之间(n均为6)；测定总氨基酸时的平均加样回收率在91.50％～100.07％之间,RSD在0.41％～2.00％之间(n均为6).结论:本方法灵敏、准确、重复性好,可用于人参及其相关产品的质量控制.
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柱前衍生RP-HPLC法测定法半夏中γ-氨基丁酸的含量
目的:建立以反相高效液相色谱法测定法半夏中γ-氨基丁酸含量的方法.方法:在碱性条件下,氨基酸与异硫氰酸苯酯反应,生成异硫氰酸苯-氨基酸的衍生物;采用Venusil-AA氨基酸分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)、二元梯度洗脱方式测定样品含量,流动相A为0.05 mol·L-1醋酸钠溶液(pH6.5),流动相B为乙腈-水(80:20),检测波长为248 nm.结果:γ-氨基丁酸检测浓度在2.056～12.336 μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈较好的线性关系;加样回收率为99.0%,RSD=0.92(n=6).结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于法半夏的质量控制.
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RP-HPLC法测定人血浆中血管紧张素Ⅱ的浓度
目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光法检测人血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的方法.方法:采用固相萃取法纯化血浆样本,以荧光胺柱前衍生后进样测定.以乙腈-10 mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷盐缓冲液(pH 8.5)作为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,色谱柱为LunaC5,激发波长为273 nm,发射波长为476 nm.结果:血管紧张素Ⅱ血药浓度在10～200 ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9995),低栓出限(S/N=3)为5 ng·mL-1,日内、日间RSD分别为1.65％和4.20％.结论:本方法快速、灵敏、准确、重复性好,可用于血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的检测.
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柱前衍生化法测定血浆中醋酸精氨酸的浓度
目的:建立柱前衍生化高效液相色谱法测定血浆样品中醋酸精氨酸浓度的方法.方法:衍生剂为 2,4-二硝基氟苯,色谱柱为氨基酸分析专用 ODS色谱柱,流动相为 50%乙腈-0.1 mol/L醋酸钠溶液(29: 71),流速为 1.2 ml/ min,检测波长为 360nm,柱温为 30℃.结果:醋酸精氨酸检测浓度线性范围为 10～ 160μ g/ ml(r=0.9 998),高、中、低 3种浓度血浆样品的回收率分别为(96.64± 9.69)%、(90.94± 4.70)%、(92.72± 4.48)%,精密度 <3.91%.含药血浆在冰冻条件(- 24 ℃)下至少可以稳定 15d.结论:本法简便可行,适用于醋酸精氨酸的血药浓度监测及其药动学研究.
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柱前衍生－手性高效液相色谱法测定 R－3－奎宁环醇的光学纯度
目的：建立准确、可靠的测定 R－3－奎宁环醇光学纯度的柱前衍生－手性高效液相色谱法。方法采用苯甲酰氯对（ R，S）－3－奎宁环醇进行柱前衍生化，以直链淀粉－三（3，5－二甲苯基氨基甲酸酯）Daicel Chiralpak AD－H手性色谱柱为手性固定相，流动相为正己烷：乙醇：二乙胺（80：20：0.1，V/ V/ V），流速为1.0 mL/min，检测波长为232 nm，柱温为25℃。结果（ R，S）－3－奎宁环醇衍生物纯度不低于98%，对映异构体的衍生产物在上述色谱条件下能达到良好分离（ R≥4.0）。结论该方法准确、可靠，可用于测定R－3－奎宁环醇的光学纯度。
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天花粉中瓜氨酸与γ-氨基丁酸的含量测定
目的 建立测定天花粉中瓜氨酸与γ-氨基丁酸含量的方法.方法 采用柱前衍生反相高效液相色谱法.在碱性条件下,氨基酸与异硫氰酸苯酯反应,生成异硫氰酸苯-氨基酸的衍生物,采用Venusil-AA氨基酸分析柱(250mm×4.6mm,5μm),用二元梯度洗脱方式,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠溶液(pH=6.5),流动相B为乙腈-水(80:20),检测波长为248 nm.结果 瓜氨酸与γ-氨基丁酸的进样量分别在9.30~372.00 ng(r=0.999 7)与25.76~1 030.40 ng(r=0.999 6)范围内与各自峰面积呈良好的线性关系,样品平均加样回收率分别为98.45%(RSD=0.73%)与98.15%(RSD=0.64%).结论该方法测定天花粉中瓜氨酸与γ-氨基丁酸,结果准确、重现性好.
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柱前衍生高效液相色谱法测定门冬氨酸的含量
目的 建立测定门冬氨酸含量的异硫氰酸苯酯柱前衍生化方法.方法采用高效液相色谱法测定门冬氨酸的含量.色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相A为12.5 mmol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.8)、B为乙腈-水(80∶20),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm.结果 门冬氨酸质量浓度在50.0～800.0μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为99.18％,RSD=1.74％(n=9).结论 该方法准确、专属性强,稳定且无干扰,可用于门冬氨酸的含量测定.
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柱前衍生反相高效液相色谱法测定天花粉中γ-氨基丁酸含量
目的 测定天花粉中γ-氨基丁酸的含量.方法 在碱性条件下,将氨基酸与异硫氰酸苯酯反应生成异硫氰酸苯-氨基酸的衍生物,采用Venusil-AA氨基酸分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),二元梯度洗脱,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠溶液(pH=6.5),流动相B为乙腈-水(80:20),检测波长为248 nm.结果 γ-氨基丁酸质量浓度在8.224～41.120 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为99.1%(n=5).结论 该方法结果准确,重现性好.
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小牛血去蛋白提取物注射液中游离氨基酸的含量测定
目的用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生高效液相色谱法(HPLC法)测定小牛血去蛋白提取物注射液中游离氨基酸.方法采用PITC-甲醇-三乙胺(1:8:1)为衍生试剂(临用前配制),用C18柱在室温下采用二元梯度洗脱,于254 nm波长处检测.结果氨基酸浓度在3.5～56.0 mg/L范围内与峰面积呈良好线性关系.结论该方法简单可行.
关键词： 小牛血去蛋白提取物注射液 柱前衍生 异硫氰酸苯酯 游离氨基酸 -
氨基酸柱前衍生化法在动物药质量控制中的应用
查阅了目前应用于动物药中氨基酸类成分检测的几种常用柱前衍生化方法的研究相关文献,对其应用情况、优缺点以及衍生化条件、检测条件进行归纳总结,并就目前存在的问题及今后的研究方向进行探讨.
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高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质
目的 采用高效液相-荧光检测技术建它一种稳定的用于测定脑组织中多种氨基酸类神经递质的方法.方法 用微透析技术收集小鼠脑组织中多种氨基酸类神经递质,用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱(high perform-ance liquid chromatography,HPLC)法测定微透析液中天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、r-氨基丁酸(GABA)的含量.结果 兴奋性Asp、Glu及抑制性Gly、GABA在18 min内完全分离,在0.625~5umol/L浓度范围内与峰面积有良好的线性关系.结论 HPLC法快速、准确、灵敏度高,适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定.
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FMOC柱前衍生-高效液相色谱法测定饮料中的牛磺酸
目的:建立饮料中牛磺酸的高效液相色谱测定方法.方法:以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)为柱前衍生剂,与饮料中的牛磺酸发生衍生化反应后,反相高效液相色谱法测定.以甲醇-0.025 mol/L磷酸盐缓冲溶液为流劝相(pH=8.0),C18柱为分离柱,二极管阵列检测器(265 nm)检测.结果:本法相对标准偏差为3.38%,加标回收率范围为95.64%～108.3%,检出限为46ng.结论:本方法快速、简单、准确度高,适合于保健食品类饮料中牛磺酸的测定.
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RF-HPLC测定人免疫球蛋白中甘氨酸含量方法的建立
目的 采用反相高效液相色谱法(RF-HPLC)技术,建立人免疫球蛋白中甘氨酸含量的测定方法.方法 采用RF-HPLC,以邻苯二甲醛(OPA)为柱前衍生剂,采用自动进样器的自动衍生程序进行衍生化反应,在338nm波长处检测,用外标法计算甘氨酸的含量.结果 当甘氨酸衍生化的取样范围为0.05～0.15 g/L时,直线相关系数为0.9996～1.0000,甘氨酸的回收率为96％～101％,日内及日间重复测定的相对标准偏差(RSD)分别为2.3％和1.5％,2位操作人员测定结果经T检验P值为0.77.结论 RF-HPLC测定结果稳定、准确,可用于人免疫球蛋白中甘氨酸含量的测定.
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分级醇沉柳茶多糖的含量与单糖组成及抗氧化性研究
目的 研究分级醇沉的柳茶多糖(SAPs)含量、单糖组成及抗氧化活性.方法 采用水提、分级醇沉法制备SAPs,用硫酸-苯酚法测定多糖的含量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化HPLC法分析单糖的组成,红外分光光度法研究多糖的构型,DPPH·法评价分级多糖的抗氧化活性.结果 分级醇沉SAPs含量的高低顺序为60％＞ 40％＞ 80％＞ 20％;葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖在各级醇沉SAPs三氟乙酸水解产物中的含量均高,其次是半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、甘露糖和核糖,未检测到鼠李糖和木糖;分级醇沉SAPs的抗氧化性优劣顺序为40％＞ 80％＞ 60％＞ 20％,40％醇沉多糖浓度为0.4 mg·mL-1时对DPPH·清除能力与0.04 mg·mL-1抗坏血酸相当,其半数抑制浓度IC50=0.235 mg·mL-1.结论 实验结果为柳茶多糖进一步化学、工艺和药理研究提供了参考.
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柱前衍生高效液相色谱-荧光检测/质谱联用测定青藏高原产沙棘果实中的5种三萜酸成分
目的 采用柱前衍生高效液相色谱-荧光检测/质谱联用(HPLC-FLD-APCI/MS)分析青藏高原沙棘果实中的三萜酸.方法 选择2-(7H-二苯并[a,g]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯作为HPLC柱前荧光衍生标记试剂,采用Hypersil BDS C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为5％乙腈(A)-乙腈(B),流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,进样量10 μL,检测波长为λex=300 nm、λem=395 nm.结果 5种三萜酸衍生物均具有较好的线性、精密度、回收率和较低的检测限,其r均大于0.9994,检测限为1.21～1.54 ng·mL-1.结论 青藏高原产沙棘果实中富含三萜酸,尤其是熊果酸和齐墩果酸,还含有少量的桦木酸;不同产地沙棘果实中所含三萜酸的种类相同,但含量存在一定的差异.
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柱前衍生HPLC分析石榴皮中的脂肪酸
目的 采用HPLC-FLD-MS法分析石榴皮中的脂肪酸.方法 用2-(11H-苯[a]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯作为柱前荧光衍生试剂,选择Hypersil BDS C8液相色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相A、B分别为100％、5％乙腈,流速1.0mL· min-1柱温35℃,进样量10μL,检测波长荧光激发λex 279 nm、发射λem 380 nm.结果 所有脂肪酸衍生物均有较好的线性、灵敏度、回收率和精密度,r均大于0.9991,检测限为0.38 ～1.95 ng·mL-1.结论 石榴皮中富含饱和与不饱和脂肪酸,尤其是油酸和棕榈酸.该方法可为石榴皮的药理应用研究和质量控制提供依据.
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柱前衍生-HPLC测定大鼠海马组织中的谷氨酸和瓜氨酸
目的 采用HPLC法测定大鼠脑内海马组织中谷氨酸和瓜氨酸的浓度.方法 取20只大鼠的海马组织,经低温匀浆处理,利用邻苯二甲醛柱前衍生,采用Diamonsil RP-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.05mol· L-1乙酸钠(乙酸调pH6.0)水溶液进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,柱温30℃,荧光检测λex=334 nm、λem 456 nm,内标为β-丙氨酸.结果 0.5～100 μmol·L-1谷氨酸和瓜氨酸与峰面积的线性关系良好(r2分别为0.998、0.991),低检测限均为0.1μmol· L-,低、中、高浓度谷氨酸和瓜氨酸的加样回收率分别为90.6％、96.9％、98.8％和95.3％、97.9％、91.5％.日内和日间精密度的RSD ＜8.0％.结论 所用方法准确简便,可用于大鼠海马组织中谷氨酸和瓜氨酸的浓度分析.
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柱前衍生RP-HPLC测定法半夏中的精氨酸和γ-氨基丁酸
目的 采用柱前衍生RP - HPLC法测定法半夏中精氨酸和γ-氨基丁酸的含量.方法 在碱性条件下,氨基酸与异硫氰酸苯酯反应生成的衍生物用于检测；采用Venusil - AA氨基酸分析柱(250mm×4.6mm,5 μm),用二元梯度洗脱方式,流动相A为0.05 mol·L-1醋酸钠溶液(pH6.5),流动相B为乙腈-水(80∶20),检测波长248 nm.结果 精氨酸进样量10.20 ～132.60ng、γ-氨基丁酸进样量12.01～156.13 ng与峰面积的线性关系良好,加样回收率分别为98.3％ 、99.1％.结论 所用方法结果准确,重复性好.
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柱前衍生化RP-HPLC测定芜菁子中的12种游离氨基酸
目的 采用柱前衍生化PR-HPLC测定芜菁子中的游离氨基酸.探讨芜菁子的药用价值,挖掘新疆的芜菁子资源.方法 采用水中超声提取异硫氰酸苯酯柱前衍生化后,用HPLC法测定芜菁子中的氨基酸.结果 芜菁子中含有苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、丙氨酸、胱氨酸、色氨酸、异亮氨酸等12种游离氨基酸,其中人体必须氨基酸7种,约占总游离氨基酸的65.7%,12种氨基酸在45 min内可很好地分离,平均回收率为92.7%～98.2%.结论 所建方法不需专门的氨基酸分析仪,操作简便、灵敏度高、准确可靠.芜菁子中氨基酸的种类齐全,含量丰富,具开发价值.
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HPLC测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量
门冬氨酸鸟氨酸与2,4-二硝基氟苯在碱性条件下衍生化后,以C18柱分离,采用HPLC法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液中的门冬氨酸鸟氨酸;以0.3 mol·L-1醋酸盐缓冲液-甲醇(40:60)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长360 nm,空白不干扰门冬氨酸鸟氨酸的测定;0.4～ 1.6 mg·mL-1门冬氨酸鸟氨酸与其峰面积的线性关系良好(r =0.9999),其含量的RSD＜2.0％(n=12),测定溶液在12 h内稳定,高、中、低浓度下的平均回收率为100.02％,RSD=0.97％.所用方法专属性强、线性关系好、溶液稳定,准确度及精密度好,能够满足门冬氨酸鸟氨酸注射液中门冬氨酸鸟氨酸的含量测定.
关键词： 高效液相色谱 柱前衍生 2 4-二硝基氟苯 门冬氨酸鸟氨酸注射液
