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部分氨基糖苷类抗生素含量的快速测定法
氨基糖苷类抗生素的质控及分析测定,主要集中于各组分的快速准确分离测定的研究,除经典的微生物测定含量的方法外,还有TLC法,HPLC法,用HPLC法进行测定时,多以氨基糖苷类衍生化反应制成紫外吸收衍生物或荧光衍生物后,才便于检测,其衍生化试剂有邻苯二醛巯基化合物,荧光胺,2.4-二硝基氟苯,2,4,6-三硝基苯磺酸试剂等.
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不同方法测定聚乙二醇化天花粉蛋白的修饰度
目的:建立测定PEG化天花粉蛋白修饰度的方法.方法:利用电泳法初步确定PEG-TCS的分子量、用质谱法进行验证;通过TNBS法和荧光胺法测定其修饰度.结果:从质谱法和电泳法可知PEG-TCS的理论修饰度为9.0909%,TNBS法测得的修饰度为9.8613%%,荧光胺法所测得值为8.5955%.TNBS法测定结果尽管偏大,但是操作简单,不需要专门的仪器;荧光胺法需要荧光分光光度计,且丙酮易挥发.结论:TNBS法可作为测定PEG-TCS修饰度的方法.
关键词: 修饰度 聚乙二醇化天花粉蛋白 TNBS 荧光胺 -
5-氨基酮戊酸的柱前衍生化HPLC-荧光法测定
建立了柱前衍生化HPLC-荧光法测定5-氨基酮戊酸.以荧光胺为荧光衍生化试剂,使用C18柱,以乙腈-0.1%三氟乙酸溶液(30∶70)为流动相,激发波长和发射波长为398和480 nm.5-氨基酮戊酸在0.047 5~47.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好.回收率为99.2%,RSD为1.46%.
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高效液相色谱-荧光胺柱前衍生法测定氨磷汀微球中氨磷汀的含量
目的:建立一种测定氨磷汀聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)微球中氨磷汀含量的方法.方法:样品与荧光胺试剂碱性条件下衍生化后,以Agilent HC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分离,以乙晴-水-10%磷酸溶液(25:75:1)为流动相.流速为1mL·min-1,以荧光检测器检测,激发波长为395 nm,发射波长为480 nm.结果:氨磷汀样品在0.4~4.0 mg·L-1范围内与其峰面积有良好的线性关系(r=0.999 9).低、中、高3个浓度的回收率(n=9)分别为95.83%,94.66%,96.15%;RSD分别为1.6%,1.8%,1.5Z.结论:该方法灵敏度高,准确迅速,重复性好,能够满足氨磷汀微球中氨磷汀含量的分析测定.
关键词: 高效液相色谱柱前衍生 荧光胺 氨磷汀微球 -
RP-HPLC法测定人血浆中血管紧张素Ⅱ的浓度
目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光法检测人血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的方法.方法:采用固相萃取法纯化血浆样本,以荧光胺柱前衍生后进样测定.以乙腈-10 mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷盐缓冲液(pH 8.5)作为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,色谱柱为LunaC5,激发波长为273 nm,发射波长为476 nm.结果:血管紧张素Ⅱ血药浓度在10~200 ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9995),低栓出限(S/N=3)为5 ng·mL-1,日内、日间RSD分别为1.65%和4.20%.结论:本方法快速、灵敏、准确、重复性好,可用于血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的检测.
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荧光胺示踪氨基葡甘露聚糖的跨细胞膜能力与转运机制
目的 用荧光胺标记来示踪氨基葡甘露聚糖(aminoglucomannan, AGM)的跨细胞膜转运,以此证实氨基葡甘露聚糖跨(细胞)膜能力与转运机制.方法 用荧光胺标记氨基葡甘露聚糖,将标记所得的荧光衍生物与外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)和HepG2细胞在CO2培养箱中孵育,然后用荧光显微镜(紫光作激发光)观察.结果 PBMC和HepG2细胞内均出现靛色荧光.结论 氨基葡甘露聚糖能跨细胞膜转运进入细胞内.
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柱前衍生-HPLC-FLD法测定对甲苯磺酸拉帕替尼中的基因毒性杂质
目的:建立荧光胺柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法,测定对甲苯磺酸拉帕替尼中的基因毒性杂质3-氯-4-(3-氟苯基甲氧基)苯胺.方法:3-氯-4-(3-氟苯基甲氧基)苯胺在pH3.3条件下,与荧光胺反应生成荧光产物,采用高效液相色谱-荧光检测法测定,使用Kromasil 100-5C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以0.05 mol·L-1醋酸铵缓冲液(pH4.5)-乙腈(50∶50)为流动相,流速1.3 mL·min-1,荧光检测器激发波长290 nm,发射波长503 nm.结果:线性范围为5~50ng· mL-1(r=0.996 1);定量限为2.0 ng·mL-1(相当于0.000 04%);平均回收率(n=12)为96.4%;实验测得3批甲苯磺酸拉帕替尼中3-氯-4-(3-氟苯基甲氧基)苯胺含量分别为0.000 10%、0.000 08%与0.000 11%.结论:建立的方法经方法验证,适用于对甲苯磺酸拉帕替尼中3-氯-4-(3-氟苯基甲氧基)苯胺的测定.