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HPLC柱前衍生法测定舒血宁注射液中四种氨酸的含量
[目的]建立舒血宁注射液中4种氨基酸(天门冬氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸)的高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法,为舒血宁注射液的质量控制提供方法.[方法]以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,乙腈-水(5:1)-乙酸铵缓冲溶液(pH 6.5)为流动相,梯度洗脱,检测波长为254 nm,测定舒血宁注射液中天门冬氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸的含量.[结果]4种氨基酸的分离及线性关系良好,精密度,重复性,稳定性RSD均都小于5%,平均回收率在95.6%~98.9%之间且RSD小于5%.舒血宁注射液中4种氨基酸总含量为1738.47μg/mL.其中甲硫氨酸含量高,丙氨酸的含量低.[结论]本方法简便、准确、可靠,适用于舒血宁注射液中氨基酸含量的测定.
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柱前衍生HPLC法测定阿仑膦酸钠骨化三醇片中阿仑膦酸钠的含量
目的 建立阿仑膦酸钠骨化三醇片中阿仑膦酸钠的含量测定方法.方法 用0.1%FMOC的乙腈溶液进行柱前衍生,色谱柱填料为苯乙烯-二乙烯苯共聚物(Hamilton PRP-1柱适用);流动相为乙腈-甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠和0.05mol/L枸橼酸钠混合液(用磷酸调pH8.0)(20∶5∶75);检测波长266nm.结果 阿仑膦酸钠(以阿仑膦酸计)在5～15μg/ml的浓度范围内有良好的线性关系(r=0.99998,n＝5);平均回收率为100.8%,RSD=1.1%(n＝9).结论 该方法稳定,准确度、精密度高,重复性好,可用于阿仑膦酸钠骨化三醇片中阿仑膦酸钠的含量测定.
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柱前衍生RP-HPLC法测定胸腺五肽的氨基酸组成
胸腺五肽(thymopentin,TP5)是人工合成的五肽，对应胸腺生成素Ⅱ的32-36位氨基酸，基本序列为NH2-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-COOH，它保留了胸腺生成素的有效生物活性。TP5是一种免疫调节剂,对机体免疫功能具有双向调节作用，在临床上主要用于治疗原发性和继发性免疫缺陷，也可用作各种恶性肿瘤的辅助用药[1-3]。
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柱前衍生HPLC法测定生、炒决明子中七种单糖的含量
目的:建立决明子中葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖等7个单糖的HPLC测定方法,并比较其在生、炒决明子中的含量差别.方法:采用Kromasil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流速为1.0 mL·min-,检测波长为245 nm.流动相为乙腈(A)-水(B)、乙腈(A)-0.1％磷酸水(B),梯度洗脱,分别测定葡萄糖、半乳糖、木糖的含量与甘露糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖的含量.结果:生、炒决明子中葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖线性范围分别为0.028 8 ～ 1.15(r =0.999 6)、0.022 0～0.882(r =0.999 4)、0.025 8 ～ 1.03(r =0.999 5)、0.0514～2.05(r=0.9995)、0.010 6～0.426(r=0.999 3)、0.031 4～1.26(r =0.999 4)、0.047 8 ～ 1.19(r =0.999 3);加样回收率(n=5)在98.1％ ～99.3％,RSD在0.9％～1.7％.结论:炒决明子中单糖含量显著高于生决明子.
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基于“鲜用理论”基础测定金铁锁中氨基酸含量
目的:建立柱前衍生-高效液相色谱法测定金铁锁药材中的氨基酸含量.方法:以0.1 mol/L盐酸提取,105℃水解,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂衍生后进样分析.采用Venusil AA氨基酸分析专用柱,柱温:40℃.流动相A为醋酸钠缓冲液,流动相B为80％乙腈溶液,进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm.结果:建立的氨基酸测定方法方法学验证结果良好,并测定了金铁锁中16种氨基酸含量,其中鲜品和干品的氨基酸含量有明显差异.结论:本方法可用于金铁锁药材的氨基酸含量测定,对其药材的质量进行评价.
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柱前衍生-高效液相色谱-二极管阵列法测定婴幼儿配方食品中肉碱对映体含量
目的 采用柱前衍生化法拆分并测定婴幼儿配方食品复杂基质中肉碱对映体的含量.方法 样品以20％乙醇为提取溶剂,手性试剂L-丙氨酸-β-萘胺与样品中肉碱反应,反应衍生物以磷酸二氢钠缓冲液、乙腈、四氢呋喃的混合溶液作流动相在C18色谱柱中分离,244 nm波长下检测.结果 在该分离条件下左旋肉碱与右旋肉碱的色谱分离度Rs≥1.66,在4.0～200.0 mg/L范围内,左旋肉碱浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 09;右旋肉碱浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 38;样品液态奶加标回收率L-肉碱为76％～ 98％,RSD为3.87％ ～9.78％;D-肉碱为71％～90％,RSD为3.80％～7.15％;样品奶粉加标回收率L-肉碱为73％～ 96％,RSD为3.91％～7.08％;D-肉碱为80％～ 94％,RSD为4.36％～8.89％.结论 该方法数据稳定、操作易行,可满足婴幼儿配方食品中D/L-肉碱含量与纯度的测定要求.
关键词： 肉碱对映体 婴幼儿配方食品 柱前衍生 高效液相色谱-二极管阵列法 -
猪脑蛋白水解物注射液的多种氨基酸含量分析
本文介绍用反相高压液相色谱法分析猪脑蛋白水解物注射液中的游离氨基酸及其含量。游离氨基酸通过邻苯二甲醛和3-巯基丙酸为衍生化试剂柱前衍生，扩展的ODS柱(pH值2～11)分离，340nm紫外检测器检测，多种氨基酸均得到较好的分离，定量结果准确度较高。 在许多领域尤其是药物中，氨基酸分析的重要性日益增加。虽然大部分氨基酸很难直接进行检测，需要经过化学衍生化后再用荧光和紫外检测器进行……
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柱前衍生HPLC法测定五谷虫中脂肪酸含量
目的 建立HPLC法测定五谷虫中脂肪酸含量的方法.方法 采用2-溴代苯乙酮作为衍生化试剂,三乙醇胺作为催化剂对脂肪酸进行衍生化使其产生紫外吸收,利用HPLC法进行含量测定.色谱条件为Agilent-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);检测波长254 nm;流动相为水∶甲醇=10∶90;柱温为20 ℃;体积流量为1 mL/min,进样量为20 μL,内标为十七烷酸.结果 在上述色谱条件下,各脂肪酸衍生物均达到基线分离.亚油酸的含量为131.0 mg/L,软脂酸的含量为194.8 mg/L,油酸的含量为100.6 mg/L,硬脂酸含量为36.6 mg/L.结论 该方法稳定,重现性好,可用于五谷虫脂肪酸含量测定.
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柱前衍生HPLC法测定地龙中氨基酸的含量
目的:分析地龙中氨基酸的含量及其特征性.方法:采用邻苯二甲醛(OPA)、9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)联合柱前衍生HPLC测定地龙中的17种氨基酸,峰面积外标法定量.结果:各氨基酸在26min内可得到较好分离,氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,r值均在0.995以上.结论:所建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便,适宜地龙药材中氨基酸的测定.
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高效液相色谱法测定阿仑膦酸钠片有关物质
目的:建立高效液相色谱法检测阿仑膦酸钠片的有关物质.方法:通过柱前衍生反应,以苯乙烯基-二乙基苯共聚物为填充剂的色谱柱,采用梯度洗脱方法进行检测.结果:通过方法学验证此方法完全可用于检测阿仑膦酸钠片的有关物质.结论:本方法高效、准确、灵敏.
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流动相梯度与柱温梯度联合使用测定19种氨基酸
目的:利用2,4-二硝基氟苯(DNFB)作为衍生化试剂,利用XDB-C8柱,建立分离19种常见氨基酸的HPLC分析方法.结果:19种氨基酸浓度在2.5～250μmol/L(胱氨酸浓度在1.25～125μmol/L)时,其峰面积和氨基酸浓度的线性良好,回收率在94.3%～102.9%之间,取得了满意的结果.结论:本法能很好分离19种氨基酸,含量测定准确,重复性好.
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9-氯甲酸芴甲酯柱前衍生高效液相色谱法测定奶粉中的牛磺酸
[目的]建立一种简便、快速测定奶粉中牛磺酸的高效液相色谱测定方法. [方法]用纯甲醇沉淀奶粉样品中的蛋白后,以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)为柱前衍生剂,与奶粉中的牛磺酸发生衍生化反应后,反相高效液相色谱法测定含量.以甲醇-0.025mol/L磷酸盐缓冲溶液为流动相(pH=8.0),C18柱为分离柱,二极管阵列检测器(265nm)检测.[结果]本法相对标准偏差为3.38%,加标回收率范围为82.8%～96.7%,检出限为46ng.[结论]本方法具有快速、简单、准确度高的特点,适合于奶粉中牛磺酸的测定.
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柱前衍生RP-HPLC法测定黄芩中氨基酸含量
目的 采用柱前衍生RP-HPLC法对黄芩中游离及总氨基酸进行测定.方法 以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱为Ultimate Amino Acid氨基酸分析专用柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:A为乙腈-水(80∶20,V/V),B为三水合醋酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈(93∶7,V/V),梯度洗脱;检测波长为254 nm.结果 21种氨基酸在0.002 5 ～ 2.500 0 mmol/L内呈良好的线性关系(R2＞0.999 0).21种游离氨基酸平均回收率在93.72％ ～ 105.03％之间,RSD在0.81％ ～3.15％之间(n=6);总氨基酸平均回收率在95.22％ ～ 102.04％之间,RSD在0.47％～2.44％之间(n=6).结论 柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合黄芩中氨基酸含量测定.
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不同干燥方式对地龙提取物中17种氨基酸的影响
目的 研究不同干燥方式对地龙提取物中17种氨基酸的影响,确定其适宜的干燥方法.方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法,测定并比较真空冷冻干燥、真空减压干燥和微波干燥3种方式所得地龙干燥样品以及未经干燥样品中的17种氨基酸的量.结果 冷冻干燥所得产品中氨基酸的损失率小,含水量低,外观色泽和形态均较优;谷氨酸、组氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸这6种氨基酸在真空减压干燥下的损失率分别为5.01％、9.41％、7.45％、13.19％、4.99％和6.59％;除门冬氨酸和脯氨酸外,其他15种氨基酸在微波减压下的损失率均在22.65％～55.97％之间.结论 温度是地龙氨基酸提取液干燥过程中的重要因素.真空冷冻干燥对地龙提取物中的17种氨基酸的影响较小,是地龙提取物较适宜的干燥方式.
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纯化工艺对乙肝宁复方中氨基酸影响
目的 探讨乙肝宁复方氨基酸类吸湿性及壳聚糖絮凝澄清与醇沉工艺纯化后乙肝宁中氨基酸变化规律.方法 采用阳离子交换树脂分离乙肝宁水提液中的氨基酸,测定吸湿百分率；将乙肝宁水提液经絮凝澄清与醇沉工艺处理后,用732号阳离子交换树脂富集,采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,梯度洗脱,测定乙肝宁原浸膏及两种纯化工艺处理后游离氨基酸.结果 乙肝宁复方总游离氨基酸吸湿性远远高于乙肝宁复方原浸膏；壳聚糖絮凝澄清法对乙肝宁复方水提液中精氨酸、赖氨酸的保留明显优于醇沉法,而对于脯氨酸的保留,虽不如醇沉法,但仍有较高的保留率.结论 壳聚糖絮凝澄清法适合用于乙肝宁复方的纯化研究；壳聚糖絮凝澄清法相对于醇沉法可降低中药浸膏吸湿性的原因与氨基酸无关.
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柱前衍生反相高效液相色谱法测定西洋参中游离氨基酸
目的:建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定西洋参中17种游离氨基酸的分析方法.方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,用Venusil-AA氨基酸分析专用柱(5μm,4.6 mm×250 mm),醋酸钠缓冲溶液(pH6.5)-乙腈溶液和80%乙腈水溶液为流动相,采用梯度洗脱,紫外检测器在254 nm波长处检测.结果:氨基酸浓度在0.5～0.012 5 μmol范围内,线性相关系数均大于0.99.17种氨基酸的平均回收率在96.5%～102.3%.结论:西洋参根中的游离氨基酸主要以精氨酸为主,占游离氨基酸总量50%以上,这一结果为进一步研究西洋参的化学成分和药理作用提供了前提条件.
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RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质
目的：采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）-荧光检测技术建立一种用于测定脑海马组织中5种氨基酸[天门冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Aspa）、谷胺酰胺（Gln）、甘氨酸（Gly）]类神经递质的方法。方法采用甲醇∶水＝1∶1提取大鼠脑海马组织中多种氨基酸类神经递质。用6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚胺氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生RP-HPLC-荧光法测定海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量。结果5种氨基酸类神经递质在15 min内完全分离，分离效果良好；在0．5～100．0μg/μL范围有较好的线性关系，相关系数（r）≥0．99990；Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly的检出限分别为0．05、0．068、0．037、0．05、0．02μg/μL。精密度[相对标准偏差（RSD）]为0．4％～2．5％，加样回收率为70．27％～128．20％，RSD均＜5％；8只正常大鼠海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量分别为38．98±9．66、126．42±34．06、216．00±0．75、90．44±33．75、（12．95±4．42）μg/g。结论 RP-HPLC-荧光法快速、准确、灵敏度高，适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定。
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反相高效液相色谱法测定大鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质
目的:建立一种高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)荧光分析技术,用于测定大鼠脑组织中天门冬氨酸(aspartate,Asp)、谷氨酸(glutamate,Glu)、牛磺酸(taurine,Tau)和γ氨基丁酸(γ aminobutyric acid,γ-GA-BA).方法:色谱柱为Dikma Inertsil ODS (250 mm×4.6 mm,3.5 μm),预柱为Dikma C18柱,4.0 mm×3.0 mm;流动相为磷酸二氢钾缓冲液(0.1 mol/L,pH 6.0):甲醇:乙腈为6∶3∶1；流速为1 mL/min.结果:4种氨基酸在15 min内完全分离,其在0.1～2 μmol /L浓度范围内与峰面积有良好的线性关系,提取回收良好.结论:此种HPLC荧光分析法快速、准确、灵敏度高,适用于大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定.
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柱前衍生RP-HPLC法同时测定珐菲亚中14种水解氨基酸
目的 建立柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定珐菲亚中14种水解氨基酸含量的方法 .方法 采用Wa-ters XBridge Shield RP18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,梯度洗脱,流速0.8 ml/min,检测波长254 nm,柱温25℃.结果 14种氨基酸在一定浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数r值均>0.9990,加样回收率(n=6)为90.2%~105.1%,氨基酸衍生溶液在24 h内稳定.结论 本实验建立的方法 可靠,可用于珐菲亚中氨基酸的含量测定.
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柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度
目的:建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠(VPA)血药浓度的方法.方法:选择2-溴-对硝基苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,Nova-pak C18柱(150 mm×3.9 mm,4μm)为分析柱;流动相为甲醇-水(77:23,V/V),检测波长为262nm,流速1 mL·min-1,柱温25℃.结果:内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为3.0 min和4.5 min,线性范围为20～180mg·L-1,平均回收率为100.2%,日内、日间RSD均＜3.5%;230例服用VPA的癫癎患者应用本法监测,有77.8%的患者血药浓度在有效浓度范围之内,还有22.2%的患者血药浓度低于或高于有效浓度.结论:本法快速、简便、准确,适合临床常规监测需要.
