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HPLC法测定人尿液中的3-甲基组氨酸
目的采用HPLC法测定人尿液中3-甲基组氨酸(3-MH)的含量.方法尿样经乙腈沉淀蛋白和邻苯二甲醛柱前衍生化,60s内进样,以乙醇胺为内标,测定尿液中的3-MH的含量.结果 3-MH的衍生物与尿液中其他杂质的衍生物完全分离.线性范围为10～400μmol·L-1(r=0.999 3),平均回收率为94.03%～97.13%(n=5),日内和日间RSD分别<7.80%和8.25%,低检出浓度达5 μmol·L-1.结论该方法灵敏度高,可用于人尿液中3-MH含量的测定.
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柱前衍生-高效液相色谱法测定肠内营养剂中18种氨基酸的含量
目的 建立柱前衍生--高效液相色谱法测定肠内营养剂中18种氨基酸的含量.方法 以邻苯二甲醛为衍生化试剂,Agilent C18色谱柱(150 mm × 4.6 mm,5.0μm),流动相为甲醇-50 mmol ·L-1醋酸钠缓冲液(pH 5.6),采用梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温30℃;FLD荧光检测,激发波长340 nm,发射波长460 nm.待测肠内营养剂样品经超声提取后,与衍生化试剂反应,取20 μL进样分析.结果 本法线性关系良好,18种氨基酸的线性回归系数范围在0.998 8～0.999 9;平均回收率在94.12%～113.73%,日间、日内精密度RSD均＜10%;样品溶液在24 h内稳定.结论 该法简便、灵敏、专属性强,能准确对肠内营养剂中18种氨基酸进行定量分析,适用于该类制剂的质量控制和评价.
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盐酸美金刚胶囊的丹磺酰氯柱前衍生化-HPLC法测定
建立了柱前衍生化-HPLC法测定盐酸美金刚胶囊的含量.样品与丹磺酰氯在25℃、避光衍生化反应90 min后测定.采用C_8 色谱柱,以磷酸盐缓冲液(pH 3.0)-乙腈(25:75)为流动相,检测波长218 nm.在5～180 μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),日内和日间RSD为1.15%和0.48%,平均回收率为99.7%～101.1%,衍生化产物在17h内稳定.
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13种氨基酸和牛磺酸的柱前衍生化HPLC测定
建立了OPA-FMOC柱前衍生化HPLC法同时测定复方氨基酸注射液中13种氨基酸和牛磺酸的含量.采用C18柱,梯度洗脱,自动在线衍生,检测波长338/262nm.结果表明13种氨基酸和牛磺酸均线性关系良好(r＞0.9992),各组分的平均回收率为99.2%～101.5%,RSD为0.11%～0.92%(n=9).
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反相高效液相色谱法测定人血清中甘油三酯含量
目的建立一种用反相高效液相色谱法准确、灵敏检测血清甘油三酯(triglycerides,TG)的新方法.方法苯甲酰氯为柱前衍生试剂,同血清皂化后的甘油衍生反应.衍生物用C18柱分离分析,乙腈-水(80:20,V/V)作流动相,二极管阵列检测器检测(λ=230.8 nm).结果本法甘油三酯的低检测浓度为0.018 mmol·L-1,在0.036～4.517 mmol·L-1范围内呈线性,回收率为96%～105%,日内RSD为1.3%～2.0%,日间RSD为1.5%～2.2%.结论该法准确、灵敏度高,可为临床血清甘油三酯的准确测定提供科学依据.
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快速测定组织、血浆中谷氨酰胺及其临床意义
目的:为基础研究和临床应用研究建立快速、准确、经济的测定大鼠血浆及小肠、肝和肌肉组织内谷氨酰胺水平的方法. 方法:采用反相高效液相色谱柱前衍生荧光法(RP-HPLC),衍生剂为邻苯二甲醛和3-巯基丙酸,流动相为磷酸缓冲液-乙腈(V/V,94∶6),Lichrosorb C18柱,样品与衍生剂按4∶1进行衍生反应,激发波长=230 nm,荧光检测波长=389 nm,流速为2.0 ml/min. 结果:谷氨酰胺的保留时间为3.158 min,检测限为25 μmol/L(S/N=3.5).线性范围50～3 200 μmol/L,r=0.999 6.日间精密度RSD值均不大于6.97%. 结论:应用RP-HPLC能准确、快速、灵敏地测定正常及辐射性肠粘膜损伤的大鼠血浆及组织的谷氨酰胺水平,为肠粘膜屏障损伤的防治研究提供了有效的实验室测定指标.
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多巴对映异构体的柱前衍生化HPLC法手性拆分
目的：建立多巴对映异构体的柱前衍生化拆分分析方法。方法：采用柱前衍生化反相高效液相色谱法，以氯甲酸乙酯为酰化剂，L-丙氨酸-β-萘胺（L-Ala-β-NA）为柱前衍生化试剂，在室温反应20 min 后，依利特 Hypersil ODS2（4.6 mm ×250 mm，5μm）为色谱柱；乙腈-0.05%三氟乙酸为流动相，梯度洗脱；流速为1.0 mL·min-1；柱温为25℃；检测波长为280 nm。结果：多巴对映体衍生物获得了基线分离，并确认了R（-）-和S（+）-两个衍生物的色谱峰。结论：该方法经济可行，操作较简便，为多巴的药理学研究和光学异构体纯度测定提供了参考。
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OPA柱前衍生反相高效液相色谱法测定脑组织中氨基酸类神经递质
目的:建立一种脑组织中氨基酸类神经递质测定的方法.方法:利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生反相高效液相色谱法结合荧光检测器测定标准品或脑组织中5种氨基酸(谷氨酸、门冬氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸)的含量.结果:5种氨基酸于15 min内得到了很好的分离,在1～10 μmol/L和10～100 μmol/L浓度范围内与峰高有良好的线性关系.结论:本方法具有快速、准确、灵敏度高、稳定性好等优点,适用于脑组织中微量氨基酸类神经递质的测定.
关键词： 高效液相色谱 氨基酸类神经递质 柱前衍生 邻苯二甲醛(OPA) -
柱前衍生高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中的氨基酸
目的 建立柱前衍生-高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中游离氨基酸和水解后总氨基酸的方法.方法 以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试剂,采用KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,140 mmol/L醋酸铵缓冲液(pH 5.10)和57％乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,同时测定胎盘多肽注射液中21种游离氨基酸和水解后氨基酸含量.结果 该方法重现性好,精密度高,各氨基酸浓度在0.005 ～0.50 mmol/L范围内线性关系良好;各氨基酸检出限≤1.57 ng.结论 建立的AQC柱前衍生-高效液相色谱法可用于检测胎盘多肽注射液中氨基酸的含量,测定的结果为胎盘多肽注射液的质量研究和评价提供了依据.
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AQC柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中游离氨基酸
目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中各种游离氨基酸的方法.方法:以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试荆,采用Kromasil C(18)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,醋酸铵缓冲液(pH5.10)和57%乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为248nm,同时分离测定胃乐宁片中21种游离氨基酸.结果:21种氨基酸在0.01-0.5 mmoL/L浓度范围内有良好的线性关系.r均不小于0.999,平均加样回收率为91.5%-107.O%,RSD为0.63%-3.79%.结论:建立的方法可用于检测胃乐宁片中游离氨基酸含量,测定的结果为胃乐宁片质量研究和评价提供了依据.
关键词： 胃乐宁片 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯 柱前衍生 氨基酸 含量测定 -
高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸含量
目的 建立高效液相色谱法检测酶促反应液中L-半胱氨酸含量.方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法测定.色谱柱:Waters Symmetry C18(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相A:醋酸钠缓冲溶液-乙腈(40:3),流动相B:乙腈-水(4:1);梯度洗脱,流速1.0 mL/min;柱温38 ℃;检测波长254 nm.结果 线性范围为0.01～0.1 mg/mL,r=0.999 5(n=6);平均回收率为100.03%,RSD为0.21%(n=6).结论 此法简便易行,重现性好.
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柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸
目的 用柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量.方法 采用二硝基氯苯(DNCB)为衍生试剂进行衍生,Waters Novapak C8(3.9 mm×150 mm,4 μm)色谱柱分离,以乙腈-乙酸钠水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长360 nm,在65 min内,测定各氨基酸含量.结果 回收率为97.5%～103.5%,RSD为0.7%～3.0%.结论 DNCB柱前衍生-反相高效液相色谱法可测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量.
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鹿肉酶水解液中游离氨基酸的高效液相色谱分析
目的应用高效液相色谱法对鹿肉酶水解液中游离氨基酸进行检测.方法以AQC为衍生化试剂,采用柱前衍生化技术、紫外检测考察了氨基酸衍生和液相分离过程中的各种影响因素,检测鹿肉酶水解液中各种游离氨基酸含量.结果鹿肉酶水解液中蛋白质含量为83.28%,总游离氨基酸含量为48.79 mg/g.结论柱前衍生高效液相色谱法可用于检测鹿肉酶水解液中游离氨基酸含量,此法可为鹿肉的综合利用提供依据.
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邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸类神经介质
目的建立测定神经中枢氨基酸类介质的方法.方法邻苯二甲醛柱前衍生,ODS(C18)柱分离,pH6.0醋酸盐缓冲溶液与甲醇二元梯度洗脱,荧光检测.结果仅在9 min内就分离测定了大鼠脑中5种氨基酸介质的含量.在一定浓度范围内,氨基酸的峰面积与其浓度呈现良好的线性关系,相关系数在0.997 8～0.999 9之间.结论本方法适用于神经药理学的研究.
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柱前衍生-HPLC测定白消安在家兔体内的药动学参数
目的 建立测定家兔血清中白消安浓度和家兔体内药动学特征的柱前衍生化HPLC.方法 以1,5-戊二醇二甲磺酸酯为内标,二乙基二硫代氨基甲酸钠为衍生化试剂.流动相:甲醇-水(54∶46),流速:0～20 min(1.0 mL·min-1),20～27 min(1.3 mL·min-1).柱温:30℃,检测波长:280 nm,进样量:25 μL.家兔分别以灌胃、静注的方式给予白消安,按本法测定血药浓度,DAS 3.0计算药动学参数.结果 白消安的血药浓度在0.1～3.4 mg·L-1内线性关系良好(r=0.999 7),日内、日间精密度以及样品稳定性符合中国药典2015年版的规定.低、中、高浓度的萃取回收率分别为90.0％,89.0％,91.5％.不同给药途径获得的药动学参数:单剂量口服t1/2=(2.26±0.66)h,k=(0.33±0.12)·h-1,ka=(2.54±1.3)·h-1,AUC0-t=(1.95±0.18)h·mg·mL-1;单剂量静脉注射t1/2=(1.53±0.09)h,k=-(0.45±0.03)·h-1,AUC0-∞=(4.38±0.26)h·mg·mL-1.多剂量口服后(-Css)=(0.48±0.03)mg·mL-1,AUC0-τ=(3.87±0.26)h·mg·mL-1.结论 建立的柱前衍生-HPLC法适用于白消安血药浓度测定及药动学研究,不同给药途径的药动学参数为临床药动学研究提供了依据.
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邻苯二甲醛柱前衍生化-HPLC测定复方氨基酸注射液中蛋氨酸亚砜的含量
目的 建立测定复方氨基酸注射液中蛋氨酸亚砜含量的方法 .方法 采用邻苯二甲醛(O-phthaladehyde,OPA)柱前衍生 HPLC.色谱柱为 Agilent ZORBAX Eclipse AAAC18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm),检测波长为338 nm,流动相 A为0.04mol·L-1磷酸二氢钠溶液(调节pH至7.8),流动相B为乙腈-甲醇-水(45: 45: 10),梯度洗脱,流速为2.0 mL·min-1,柱温为40 ℃,供试品溶液与OPA衍生剂及硼酸盐缓冲液按设定程序自动混匀后进样.结果 蛋氨酸亚砜的质量浓度线性范围为0.000 5～0.050 0 mg·mL-1(r=0.999 9);定量限为0.250 5 μg·mL-1,检测限为0.083 5 μg·mL-1:精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3.0％;平均回收率为99.1％(RSD=1.33％,n=9).结论 该方法 操作简便,可用于复方氨基酸注射液中蛋氨酸亚砜的含量测定.
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异硫氰酸苯酯柱前衍生RP-HPLC测定大鼠脑组织中9种氨基酸类神经递质含量
目的 建立一种脑组织中氨基酸类神经递质的测定方法.方法 醋酸钠-乙腈-水为流动相,反相高效液相色谱洗脱,异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生和紫外检测器检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑、小脑和下丘脑6个脑区中9种氨基酸类神经递质(谷氨酸、门冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸、谷氨酰胺、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸)的含量.结果 9种氨基酸在50 min内洗脱完全,分离效果良好;浓度在5～400μmol·L-1内线性关系良好,且相关系数＞0.99,平均回收率≥80％.结论 本方法简便、准确、灵敏度高、重复性好,适用于一般实验室脑组织中氨基酸类神经递质的测定.
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柱前衍生HPLC法测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量
目的:建立一种测定大鼠肾组织中羟脯氨酸(Hyp)含量的柱前衍生HPLC法.方法:将大鼠肾组织以6 mol · L-1盐酸于110℃水解24 h,加入9-芴甲氧基羰酰氯(FMOC)衍生后,进行HPLC分析.HPLC分析条件为:Phenomenex C18色谱柱(4.60 mm× 150 mm,5(m)；流动相:醋酸钠缓冲液( pH3.78)-甲醇-乙腈(梯度洗脱)；流速:1.0 ml·min-l；柱温:40C；检测波长:265 nm.结果:羟脯氨酸在浓度范围为15.30～612.00 mg·L-1内线性良好(r =0.9999)；回收率为97.4％～103.9％.结论:该方法简单、准确、灵敏,可用于测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量.
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高效液相色谱法检测小肠上皮细胞多胺含量
目的 建立检测小肠上皮细胞(IEC-6)多胺含量的方法,为病理生理及药理研究中检测该细胞多胺含量提供参考.方法 采用苯甲酰氯柱前衍生反相高效液相色谱法,以多胺(腐胺、精脒和精胺)含量为指标,苯甲酰氯为衍生化试剂,采用ODS-C18柱,考察和优化衍生化条件以及色谱条件.结果 当衍生温度为50℃,衍生时间为8 h时,各指标成分的峰面积均较大;在柱温为25℃、流动相为甲醇∶水(55:45)、流速1.0 ml·min-1、检测波长234 nm的条件下,各指标成分峰分离良好.线性范围:腐胺0.054～1.35 nmol,精脒0.046～1.15 nmol,精胺0.080～2.00 nmol,r2≥0.9995;高、中、低浓度的日内精密度:腐胺RSD 1.5%～3.2%,精脒RSD 1.2%～4.5%,精胺RSD 1.3%～4.1%;日间精密度:腐胺RSD 1.2%～2.7%,精脒RSD 1.0%～3.5%,精胺RSD 0.8%～3.9%;高、中、低浓度的回收率:腐胺85%～110%,精脒88%～110%,精胺90%～108%.结论 建立的苯甲酰氯柱前衍生高效液相色谱法适用于小肠上皮细胞中多胺含量的测定.
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HPLC测定异基因造血干细胞移植患者白消安的血药浓度
目的:建立测定异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者体内白消安血药浓度的柱前衍生HPLC法.方法:衍生化处理加入内标1,5-戊二醇二甲磺酸酯的血浆样品后,以甲醇-水(75:25)作为流动相,流速为1.0mL/min,采用NovaPak C18(3.9mm×150mm,4μm)色谱柱分离,在波长为280nm下检测.结果:白消安血药浓度的线性范围为0.1～10μmol/L,以加权小二乘法计算的回归方程是Y=-0.006+0.163X(n=7,r=0.9998);提取回收率,平均(87.67±2.64)％;日内、日间精密度均低于15.0％.结论:该实验成功建立了一种灵敏、准确的白消安血药浓度测定方法,为临床实施白消安的个体化用药提供依据.
