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关节腔内注射不同浓度木瓜蛋白酶建立小鼠膝骨关节炎模型的研究
目的：探讨关节腔内注射不同浓度木瓜蛋白酶建立小鼠膝骨关节炎模型的可行性。方法健康10周龄雄性昆明小鼠80只，体重（45±3） g，随机分为2％木瓜蛋白酶组、4％木瓜蛋白酶组、8％木瓜蛋白酶组和对照组。实验第1、3、5天分组行右膝关节腔内注射2％、4％、8％（ w／v）木瓜蛋白酶和0．3mol／LL－半胱氨酸的混合溶液0．25 mL／kg或等量生理盐水。记录小鼠一般情况及右膝关节宽度。所有小鼠首次注射1周后处死，取关节行常规HE染色及甲苯胺蓝染色，镜下观察并评分。结果造模组右膝关节出现肿胀、功能障碍；右膝关节软骨染色变浅、软骨层变薄、基质分解破坏等病理学改变，其严重程度与木瓜蛋白酶浓度呈正相关；对照组无上述改变。结论膝关节腔内注射2％、4％、8％（ w／v）木瓜蛋白酶和0．3mol／L L－半胱氨酸的混合溶液0．25 mL／kg可建立小鼠不同严重程度的膝骨关节炎，周期短、成功率高。
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功能性L-Cys-CdS纳米粒子共振光散射法测定脱氧核糖核酸
目的报道了功能性L-Cys-CdS纳米荧光探针的合成,纳米粒子水溶性好,稳定,且具有较好的荧光特性.方法以该纳米粒子为荧光探针,探讨了DNA对其的荧光猝灭作用.结果表明在Tris-HCL溶液中DNA对CdS的RLS有很好的猝灭,小牛胸腺DNA及鱼精DNA的线性范围及检测限分别为0.01-1.0μg·mL-1,8 ng·mL-1;0.04-1.5μg·mL-1,10ng·mL-1.结论该方法简便、快速、灵敏,用于测定合成样品取得了满意的结果.
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饮料中锑的氢化物发生-原子荧光测定法
目的 探讨饮料中锑的氢化物发生.原子荧光测定法.方法 以L-半胱氨酸为预还原剂,应用氢化物发生-原子荧光光谱法测定锑含量.结果 在该方法的佳条件(1%HCl,2%KBH4,2%L-半胱氨酸)下,40 mg/L的Fe3+、Pb2+、50mg/L的Cu2+、Mn2+、Zn3+、Sn2+、Se4+、Hg+、As3+、Bi3+以及10 mg/L的Cr6+、Cd2+对锑测定均无干扰.在0～60.0μg/L范围内,该方法所得线性回归方程为:γ=65.1x+13.2,相关系数(r)为0.999 9,检出限为0.35μg/L,平均回收率为89.50%～103.75%,RSD分别为1.51%和1.22%.与国家标准法比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 该方法具有试剂用量少,污染小,检出限低,灵敏度高,重现性好,线性范围宽及干扰少等特点,适用于饮料中锑含量的检测.
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尿中锑测定的原子荧光光谱法
目的 建立氢化物发生-原子荧光光谱法测定尿中锑的方法.方法 以硝酸镍为消化辅助剂,以盐酸溶液为载液,过氧化氢-硝酸-硝酸镍溶液为消化体系,L-半胱氨酸溶液、硼氢化钾-氢氧化钾溶液为还原体系,应用原子荧光光谱仪对尿中锑进行测定.结果 该方法在样品中加入2 ml 12.5 9/L硝酸镍溶液,避免了样品高温消化时锑的损失.在0～20 μg/L范围内,回归方程为y=168.80x-87.52,r=0.999 5,低检出浓度为0.06μg/L,批内精密度相对标准偏差为2.59％～4.18％,批间精密度相对标准偏差为3.56％～5.89％,准确度加标回收率为101.25％～ 103.38％.结论 该方法引入硝酸镍后消除了温度对样品处理的影响,简便,快速,干扰少,灵敏度高,有较高的实用价值,值得推广.
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工作场所空气中锑及其化合物的L-半胱氨酸-原子荧光光谱测定法
目的 建立原子荧光光谱法测定工作场所空气中锑及其化合物的方法.方法 按照<车间空气中有毒物质监测研究规范>的要求进行实验.结果 在L-半胱氨酸存在下,方法灵敏度提高,方法检出限降低到0.40μg/L,相对标准偏差为2.0%～4.5%,回收率为93.3%～101.7%.结论 方法快速,灵敏,重现性好.各项指标均达到<车间空气中有毒物质监测研究规范>的要求,适用于工作场所空气中锑及其化合物的检测.
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工作场所空气中锡的L-半胱氨酸-原子荧光测定法
目的 利用氢化物发生-原子荧光光谱法,在L-半胱氨酸存在的情况下,测定工作场所空气中的锡.方法 样品经盐酸消解,用2%盐酸溶液做载流,原子荧光分光光度计进行测定.结果 方法的测定范围为5.0～200.0 μg/L,相对标准偏差为2.15%～3.40%,回收率为92.5%～103.5%,检出限为0.71 μg/L.结论 由于L-半胱氨酸的存在,改善了氢化物发生条件,增敏光谱测定信号,降低了溶液的酸度,金属离子的干扰显著地得到了抑制,适用于工作场所空气中锡的测定.
关键词： 空气 锡 工作场所 L-半胱氨酸 氢化物-原子荧光光谱法 -
旋光度法测定L-半胱氨酸含量
目前有22种氨基酸可由发酵法制得,而胱氨酸和L-半胱氨酸不能用发酵法生产,而L-半胱氨酸可由胱氨酸还原而来.其化学反应式为:
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氢化物-原子荧光光谱法连续测定饮料中的砷、锡、锑
[目的]建立饮料中砷(As)、锡(Sn)、锑(Sb)的氢化物-原子荧光连续测定方法.[方法]以L-半胱氨酸为预还原剂,一次消解样品,应用氢化物发生-原子荧光光谱法连续测定砷、锡、锑.[结果]在该方法的佳条件(1%HCl,2.0%KBH4,2.0%L-半胱氨酸)下,40mL/L Fe3+、Pb2+,50mg/L Cu2+、Mn2+、Zn2+、Se4+、Hg+、Bi3+,10mg/L Cr6+、Cd2+对测定均无干扰.其回收率分别为:91.3%～97.0%、92.5%～106.1%、90.0%～106.2%;检出限分别为0.35、0.35、0.31μg/L.[结论]采用该方法分析饮料中的砷、锡、锑具有试剂用量少,污染小,检出限低,线性范围宽及干扰少等特点,适用于饮料中砷、锡、锑含量的检测.
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用于纳米递药系统荧光标记的3种CdTe量子点荧光特性的比较
合成了以L-半胱氨酸(L-Cys)、β-巯基乙醇(β-ME)和巯基乙酸(TGA)修饰的3种CdTe量子点,并比较三者的荧光强度、半峰宽-峰高比、粒径和不同pH值缓冲液中荧光强度的稳定性,分析了三者用于纳米递药系统荧光标记的适宜性.结果表明,L-Cys修饰的量子点荧光强度高,但在pH值小于8.0时会发生急剧淬灭;β-ME修饰的量子点虽然在pH4～8范围内不会发生淬灭,但荧光强度低、荧光峰宽;TGA修饰的量子点具有适宜的荧光强度和峰宽,且在pH4～8范围内不会发生淬灭.因此TGA修饰的CdTe量子点适宜用于纳米递药系统的荧光标记.
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微生物转化DL-ATC生产L-半胱氨酸菌种筛选及产酶条件研究
以DL 2氨基△2噻唑啉-4-羧酸(DL-2-amino-△2-thiazoline-4-carboxylic acid,DL-ATC)作为分离平板中的唯一氮源,从土样中筛选可将DL-ATC生物转化为L-半胱氨酸的微生物菌株,得到5株转化菌株GJx5、GJx7、TJ4、TJ6和TJ7,其中GJx7菌株的转化能力较高.当DL-ATC浓度为1%时,经微生物转化2 h,反应液中L-半胱氨酸含量可达68.3μg/ml.该菌株传代性能稳定,连续传8代后相对转化活力为95.4%.以GJx7菌株为试验菌株的产酶条件试验表明,较适培养基初始pH值为7.0,摇瓶装量为250 ml锥形瓶装50 ml培养基,产酶较佳的碳源和氮源分别为麦芽糖和酵母膏.在较佳产酶条件下,当DL-ATC浓度为1%时,转化液中L-半胱氨酸含量可达320.2μg/ml,较优化前提高4.7倍.
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半胱氨酸脱硫酶的生化特性及其脱硫作用机制
半胱氨酸脱硫酶是一类依赖磷酸吡哆醛的酶,为同质二聚体,能催化L-半胱氨酸脱硫生成L-丙氨酸和硫.NifS首先在棕色固氮菌中发现,并被认为在固氮酶铁硫簇的形成中起重要作用.NifS同系物也存在于许多非固氮的原核及真核生物中,它们在分子质量、分光光度特性、底物选择性、氨基酸序列和生物学功能等方面非常相似.根据氨基酸序列的相似性,将NifS同系物分成二组,Ⅰ组包括NifS和IscS等,Ⅱ组包括CSD和CsdB等.半胱氨酸脱硫酶均具有保守的赖氨酸和半胱氨酸残基,前者与PLP形成Schiff碱,后者参与半胱氨酸过硫化物中间物形成.半胱氨酸脱硫酶的作用机理涉及半胱氨酸残基亲核攻击底物L-半胱氨酸上的巯基,形成与酶结合的半胱氨酸过硫化物中间物,该过硫化物中间物作为供硫体,参与生物素、硫胺素、钼碟呤以及铁硫簇、硫代核苷等含硫分子的生物合成.
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以L-半胱氨酸和吲哚酶法合成L-色氨酸
用色氨酸酶基因工程菌WW-4催化L-半胱氨酸和吲哚合成L-色氨酸.80ml反应液(L-半胱氨酸0.75g,吲哚0.75g)37℃反应48h,可积累L-色氨酸1.18g.L-半胱氨酸转化率为93.2%,吲哚转化率为90.1%.产品总回收率达70%,所得晶体在熔点、旋光性和红外吸收光谱等方面与标准品完全一致.
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高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸含量
目的 建立高效液相色谱法检测酶促反应液中L-半胱氨酸含量.方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法测定.色谱柱:Waters Symmetry C18(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相A:醋酸钠缓冲溶液-乙腈(40:3),流动相B:乙腈-水(4:1);梯度洗脱,流速1.0 mL/min;柱温38 ℃;检测波长254 nm.结果 线性范围为0.01～0.1 mg/mL,r=0.999 5(n=6);平均回收率为100.03%,RSD为0.21%(n=6).结论 此法简便易行,重现性好.
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功能性硫化锌纳米荧光探针与DNA的相互作用
目的:研究L-半胱氨酸包裹的ZnS纳米荧光探针与核酸的相互作用及其机理,建立DNA的定量分析方法.方法:通过考察溶液pH值、缓冲液用量及粒子浓度等影响因素,在佳试验条件下,利用在pH值近中性时DNA对纳米荧光探针具有猝灭作用的特性,采用荧光光谱法进行研究.结果:当DNA浓度为20～600 μg/L时,荧光强度与DNA的浓度呈良好的线性关系,检测限为0.032 μg/L.结论:该方法简单,快速,灵敏度高.DNA与L-半胱氨酸-ZnS纳米粒子存在静电作用.
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柱前衍生HPLC法测定依达拉奉注射液中L-半胱氨酸含量
目的 建立柱前衍生化HPLC法测定依达拉奉注射液中L-半胱氨酸盐酸盐含量的方法.方法 以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1mol·L-1醋酸钠溶液(用冰醋液调节pH至6.5)(45∶55),流速为1.0mL·min-1,检测波长254nm.结果 L-半胱氨酸盐酸盐衍生物浓度在0.4～4.0μg·mL-1范围内与其峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率100.5%,RSD为1.4%(n=9).结论 本方法快速准确.
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L-半胱氨酸的生产方法及应用进展
L-半胱氨酸是一种具有生理功能的氨基酸,是组成蛋白质的20多种氨基酸中唯一具有还原性基团巯基(-SH)的氨基酸.目前已在医药、食品添加剂和化妆品中广泛应用.L-半胱氨酸的合成主要有毛发水解后还原法、酶法合成法、化学合成法和发酵法以及通过构建基因工程菌来生产等,其中微生物方法生产L-半胱氨酸较化学方法具有相当的优越性,生产步骤简化,底物转化率高,可降低污染,因此微生物酶法生产L-半胱氨酸具有重要的研究意义.
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一种改进的匹多莫德制备方法
以L-半胱氨酸和L-焦谷氨酸为起始原料,经两步合成匹多莫德.在传统的合成方法的基础上进行了一定的改进,在第二步的酯化反应中直接用盐酸乙醇作为酯化溶剂,所得L-噻唑烷基-4-羧酸乙酯盐酸盐不经提纯在乙酸乙酯溶液中直接用碳酸钾中和.整个工艺操作简单,对设备无苛刻要求,收率及产品纯度高,适合工业化生产.
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L-半胱氨酸在金电极上的电化学行为
目的研究L-半胱氨酸在金电极上的电化学行为,为测定L-半胱氨酸的物理化学参数及定性、定量分析提供依据.方法在磷酸盐缓冲体系中以循环伏安法对L-半胱氨酸进行电化学表征,探讨其在金电极上的电化学反应机理,以及介质浓度、pH值等各种因素对峰电流的影响.结果在pH值小于7时,除在0.96V处有一氧化峰外,在-0.75V左右发现一新的还原峰,氧化峰和还原峰峰电流的大小与本体溶液中半胱氨酸的浓度成正比,且峰电流与扫速的平方根成正比.结论0.96V处的氧化峰和-0.75V处的还原峰具有一定的相关性,L-半胱氨酸在金电极上的吸附及其电化学行为是受扩散控制的.
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L-半胱氨酸-原子荧光法测定食品中的硒
目的:利用氢化物发生-原子荧光光谱法,在L-半胱氨酸存在下,测定食品中的硒.方法:样品经酸加热消化后,用2%盐酸溶液做载流,原子荧光分光光度计进行测定.结果:方法的测定范围为10.0μg/L～50.0μg/L,相对标准偏差为0.70%～1.90%,回收率为93.0%～101.0%,检出限为0.051μg/L.结论:由于L-半胱氨酸的存在,改善了氢化物发生条件,增敏光谱测定信号,降低了溶液的酸度,金属离子的干扰显著地得到了抑制,适用于食品中硒的测定.
关键词： 硒 食品 L-半胱氨酸 氢化物-原子荧光光谱法 -
电感耦合等离子体质谱法加L-半胱氨酸及金测定汞
目的 建立电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定样品中汞的方法.方法 样品经微波消解处理,加入L-半胱氨酸(0.1％)和金(200 μg/L),使其形成金汞齐和较稳定的络合物,减少容器对其吸附作用及记忆效应,用电感耦合等离子体质谱仪进行测定.结果 通过对各类标准物质及样品的检测,线性方程为y =2.568×10-3x +3.34×10-4,相关系数(r)为0.999 9.食品样品按0.5g取样量计算方法的检出限为1 1μg/kg.以精密度考察方法重现性,相对标准偏差(RSD)均＜5.0％,加标回收考察方法准确性,加标回收率为97.5％ ～ 102.5％.方法的各指标结果均令人满意.结论 本方法操作简便快捷,线性范围宽,灵敏度高,准确可靠,很好的解决了汞的吸附问题和记忆效应,用无碰撞池的电感耦合等离子体质谱仪测汞,能得到满意的结果.
关键词： 电感耦合等离子体质谱法 L-半胱氨酸 金 汞
