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归芪益元膏对重离子辐射旁效应损伤大鼠Bax、Bcl-2及外周血象的影响
目的:探讨归芪益元膏对重离子辐射旁效应损伤大鼠Bax、Bcl-2及外周血象的影响.方法:Wistar雄性大鼠随机分为3组,正常对照组、辐射组和中药组.中药组预先给予归芪益元膏灌胃2周(3.28g·kg-1·d-1)后辐射组和中药组大鼠右肺予2Gy12C6+离子束单次照射,正常对照组不予照射.照射后24h处死各组大鼠,Western Blot及Q-PCR检测大鼠肺肾组织中Bax、Bcl-2蛋白及mRNA表达,检测外周血象.结果:与正常对照组比较,辐射组大鼠肺肾组织中Bax蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05),Bel-2蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05),白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白含量均下降(P＜0.05).与辐射组比较,中药组大鼠肺、肾组织中Bax蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05),Bcl-2蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05),白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白含量均升高(P＜0.05).结论:归芪益元膏可以减轻重离子辐射旁效应诱导的肺、肾细胞凋亡,保护外周血象,从而发挥其对重离子辐射旁效应损伤的防护作用.
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酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺老年失眠大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响
目的:研究酸枣仁汤对老年失眠大鼠心肌细胞凋亡及相关因子bcl-2、bax表达的影响及其可能的相关机制.方法:利用“多平台水环境法”建立老年大鼠睡眠剥夺模型,将实验大鼠随机分为4组,环境对照组、慢性睡眠剥夺模型组、舒乐安定组以及酸枣仁汤组.用免疫组织化学方法观察睡眠剥夺21d后各组大鼠心肌细胞凋亡情况以及bcl-2、bax基因表达的变化.结果:与环境对照组相比较,老年失眠模型组心肌细胞凋亡明显增多,bcl-2,bax活性明显增高(P＜0.05),与慢性睡眠剥夺模型组比较,酸枣仁汤组心肌细胞凋亡bcl-2的表达显著增高,bax表达及bax/bcl-2比值显著下降.结论:睡眠剥夺可引起心肌细胞凋亡,酸枣仁汤改善睡眠的机制可能与调控bcl-2、Bax表达有关.
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消癥散对人肝癌细胞凋亡的影响
目的:观察消癥散对人肝癌HepG-2细胞凋亡的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法:MTT比色法检测消癥散对人肝癌HepG-2细胞的生长抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态学的改变;RT-PCR法检测消癥散对人肝癌HepG-2细胞p53和Bcl-2 mRNA表达的影响.结果:消瘕散对人肝癌细胞HepG-2的生长活性有抑制作用,并可调节人肝癌HepG-2细胞中p53和Bcl-2 mRNA的表达水平.结论:消癥散能促进人肝癌HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2和升高p53相关.
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苦参碱调节Bax和Bcl-2蛋白表达诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制
目的:探讨Bax和Bcl-2蛋白在苦参碱诱导A549细胞凋亡中的作用.方法:MTT法检测苦参碱对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况.结果:不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关.苦参碱随时间进行性降低Bcl-2蛋白的表达,相应地稳步提高Bax蛋白的表达,同时促进Bax从胞浆内向线粒体移位,紧接着降解Caspase-3蛋白.结论:苦参碱通过调节细胞内Bax和Bcl-2蛋白的表达经线粒体信号转导途径诱导A549细胞的凋亡.
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电针对脑缺血再灌注损伤小鼠海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响
目的:观察电针对脑缺血再灌注损伤小鼠海马神经元凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响.方法:复制脑缺血再灌注小鼠模型,电针肾俞、膈俞和百会穴,对照组灌胃喜得镇,分别于治疗第1天和第7天后,以流式细胞术(FCM)法检测小鼠海马细胞凋亡率、Bcl-2、Bax表达.结果:术后第1天,模型小鼠海马细胞凋亡率明显增高,术后第7天较术后第1天增高(P＜0.01).说明海马细胞由于反复脑缺血再灌注而出现凋亡.模型组术后第1天,海马Bcl-2表达明显下降;术后第7天,则明显增高,并高于术后第1天(P＜0.01).模型组术后第1天和第7天海马Bax表达均增高(P＜0.01).电针在两个时点均可上调海马Bcl-2表达,下调Bax表达,降低凋亡率(P＜0.01).结论:电针具有抑制细胞凋亡、保护神经元的作用.
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毛冬青总皂苷提高血瘀大鼠脑缺血耐受的作用机制
目的:研究毛冬青总皂苷提高血瘀大鼠脑缺血耐受模型的作用机制,为中药毛冬青的新用提供实验依据.方法:采用大鼠连续注射地塞米松复制血瘀模型.给予相应的药物,连续灌服7d,于第7天给药后lh,阻断双侧颈总动脉血流10min,恢复灌注72h后,颈内动脉线栓法致左大脑中动脉栓塞2h,再灌注24h.复制大鼠脑缺血耐受模型.取血测全血黏度;断头取左脑,测定ATP酶、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力,HE染色观察海马区组织病理变化,免疫组化法观察Bcl-2、Bax阳性的表达情况.结果:缺血耐受组及缺血再灌注损伤组大鼠全血黏度明显升高、ATPase及T-SOD活力显著下降(P＜0.0l)、Bax阳性表达显著增加(P＜0.01),大鼠血瘀合并脑缺血耐受模型复制成功.与缺血再灌注损伤组比较,缺血耐受组动物全血流变值升高,T-SOD及ATPase活力增强,动物脑组织的病理损伤程度明显减轻.与缺血耐受组比较,各剂量毛冬青总皂苷能显著或明显改善血瘀大鼠的全血黏度,增强ATPase、T-SOD活力及Bcl-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性表达,对脑神经细胞的损伤有明显的保护作用.结论:毛冬青总皂苷能从改善血液循环、改善能量代谢、诱导内源性抗氧化物活性增强、增强抗凋亡效应、减轻神经细胞损伤等方面实现提高脑缺血耐受的作用.
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掌叶半夏提取物的有效部位对CaSki的促凋亡作用机制研究
目的:前期的研究已证实中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的宫颈癌细胞株CaSki和HeLa有促凋亡作用,通过本次研究进一步明确PE对CaSki的促凋亡作用机制.方法:采用RT-PCR方法检测0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2和Bax mRNA表达的变化.采用Western Blot检测0.15g/L PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果:0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而Bax mRNA和蛋白的表达均明显上升.结论:PE对CaSki宫颈癌细胞株促凋亡作用之一是抑制Bcl-2基因的表达、促进Bax基因的表达.这为进一步研究PE的抗宫颈癌作用机制以及新药的研制开发奠定了一定的实验基础.
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参附注射液对实验性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡干预作用的研究
目的:研究参附注射液对心力衰竭大鼠心肌凋亡和凋亡相关蛋白的影响.方法:45只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,采用左冠状动脉结扎法建立心力衰竭模型.对照组和模型组给予0.9％氯化钠溶液、参附组给予腹腔注射参附注射液(6.2mL·kg1 ·d-1,4周).采用TUNEL和免疫组化检测心肌凋亡和相关蛋白.结果:共有38只大鼠存活.对照组(n=14)未见心肌凋亡,模型组(n=13)凋亡数量增加,而参附组(n=11)凋亡数量明显减少,与模型组比较差异具有显著性(P＜0.01).与对照组相比,模型组Bax、Bcl-2、Fas和FasL蛋白表达增加(P＜0.05)；与模型组相比,治疗组Bax、Fas和FasL蛋白表达显著下降(P＜0.01).结论:参附注射液能够抑制实验性心力衰竭大鼠心肌凋亡,其作用机制与下调促凋亡基因Bax、Fas和FasL表达的作用相关.
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消癥散对荷H22肝癌小鼠抑瘤作用的实验研究
目的:观察消癥散对荷H22肝癌实体瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用和对腹水瘤小鼠生存期的延长作用,探讨消癥散抗肿瘤的作用机制.方法:①制作小鼠H22肝癌实体瘤模型,分为模型组,消癥散低、中、高剂量组,5-Fu组,5-Fu+消癥散中剂量组.治疗10d后,计算抑瘤率,检测血清白介素-2(IL-2)含量,观察肿瘤组织病理切片,免疫组化法观察细胞凋亡相关基因-2(Bel-2)表达水平.②制作小鼠H22肝癌腹水瘤模型,分组同上,记录各组小鼠生存天数,计算生命延长率.结果:消癥散能够抑制肿瘤的生长,并呈现一定的剂量相关性;消癥散各剂量组肿瘤组织镜下病理示肿瘤细胞出现核同缩、片状坏死、出血及周边炎症细胞浸润等;消癥散能增强荷瘤小鼠IL-2活性,各剂量降低Bel-2表达水平;消瘢散与抗癌西药5-FU配合使用能够延长腹水瘤小鼠的生存期.结论:消癥散具有抑制肿瘤生长,增强机体的抗肿瘤能力,诱导肿瘤细胞凋亡,降低肿瘤的持续增殖能力等作用.消癥散与抗癌西药合用能够延长腹水瘤小鼠的生存期.
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缺血再灌注损伤人心脏微血管内皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax的表达及黄芪多糖干预研究
目的:研究Bcl-2、Bax基因在缺血再灌注损伤人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)凋亡通路中的作用,及黄芪多糖的干预作用.方法:培养原代HCMEC,通过缺氧再复氧刺激细胞损伤,并用黄芪多糖进行干预.采用Western blot、PCR等方法检测Bcl-2、Bax.结果:与正常组比较,损伤组Bax表达增强,Bcl-2表达减弱,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).与损伤组比较,中、高浓度组Bcl-2表达上调(P＜0.05),Bcl-2/Bax值升高(P＜0.05),各浓度组Bax均降低(P＜0.05).结论:Bcl-2、Bax在介导缺血再灌注损伤HCMEC凋亡通路中起重要作用,黄芪多糖通过上调Bcl-2的表达、抑制Bax的升高以及提高Bcl-2/Bax的比值,对缺血再灌注损伤HCMEC凋亡具有一定的保护作用.
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化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax基因表达的影响
目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响,探讨其神经保护作用机制.方法:采用改良的Zea-Longa线栓法通过阻断大鼠右侧大脑中动脉制造局部梗死性脑缺血再灌注损伤模型.运用TUNEL法标记凋亡细胞统计阳性细胞数并计算凋亡率,应用RT-PCR法检测各组大鼠缺血侧脑组织中Bcl-2及Bax mRNA的表达水平.结果:与假手术组比较,模型组及各用药组细胞凋亡率、Bax表达均明显上升(P＜0.05),Bcl-2明显降低(P＜0.05);与模型组比较,中药各组及阿司匹林组细胞凋亡率下降(P＜0.05),Bcl-2基因表达升高,Bax基因表达降低(P＜0.05);在调高Bcl-2基因表达方面,中药3组效果不如阿司匹林组(P＜0.05),中药3组疗效与浓度呈正相关;在下调Bax基因表达方面,阿司匹林组及中药中、高剂量组3组表达无显著性差异,中药低剂量组Bax基因表达较其余治疗3组明显较高(P＜0.05).结论:化浊解毒活血通络法可以通过上调细胞凋亡基因Bcl-2、下调Bax表达从而降低细胞凋亡率,发挥其脑保护作用.
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肾阳虚对大鼠小肠黏膜吸收细胞凋亡及凋亡相关基因的影响
目的:探讨小肠黏膜吸收细胞异常凋亡对肾阳虚模型大鼠吸收功能的影响.方法:建立肾阳虚模型大鼠的基础上分组及给药,采用流式细胞术、电镜及免疫组化法检测小肠黏膜吸收细胞的凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:肾阳虚模型大鼠小肠黏膜吸收细胞的凋亡率较假手术组显著升高(P＜0.01),出现凋亡细胞的特征性表现,Bcl-2、Bax蛋白的表达较假手术组显著升高(P＜0.01),但Bcl-2蛋白的增加幅度远不如Bax蛋白的增加.参附汤组大鼠各项指标均明显好转.结论:小肠黏膜吸收细胞的过度凋亡是肾阳虚影响吸收功能的主要机制之一,参附汤可改善此病理改变.
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参附注射液对阿霉素大鼠心肌损伤Bcl-2、 Caspase-3表达的影响
目的:探讨参附注射液对阿霉素所致大鼠心肌细胞损伤的防治作用.方法:将大鼠随机分为正常对照组、模型组和参附注射液低、中、高剂量组(1、2和4mL·kg-1·d-1),每组14只.模型组于实验开始后第2、4天腹腔注射阿霉素1mg/kg,第6、8天腹腔注射阿霉素2mg/kg,第10、12天腹腔注射阿霉素3mg/kg,第14、16天腹腔注射阿霉素4m g/kg,累计用药剂量达20mg/kg;参附组于造模后1周,按低、中、高剂量组分别腹腔注射参附注射液1、2、4mL/kg,每日1次,共2周.采集心室肌组织,应用光镜观察心肌病理形态学变化;AnnexinV/PI双染色法检测心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心肌细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达.结果:模型组和参附注射液高剂量组心肌细胞早期凋亡率分别是(30.15±1.26)％,(12.74± 1.03)％;Bcl-2蛋白表达分别是(0.40±0.04),(1.33±0.01);Caspase-3蛋白表达分别为(1.37±0.06),(0.81±0.03).与模型组比较,参附各剂量组心肌细胞的凋亡率明显减少,Bcl-2蛋白表达显著增加,Caspase-3蛋白表达显著减少(P＜0.01).结论:参附注射液对阿霉素引起的心肌损害有保护作用,并提示其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达相关.
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马尾松树皮提取物体外诱导肺腺癌GLC-82细胞凋亡的机制
目的:探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniara bark extract,PMBE)在体外抑制肺腺癌GLC-82细胞生长的机制.方法:通过CCK-8法分析了PMBE对GLC-82细胞的生长活力影响;AO/EB染色、透射电镜和流式细胞术检测了PMBE诱导的肺腺癌细胞GLC-82的凋亡;Western blot检测PMBE处理GLC-82细胞后caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bid蛋白表达水平的变化.结果:PMBE在体外抑制肺腺癌GLC-82细胞的生长具有时间和剂量依赖性;通过荧光显微镜、透射电镜和流式细胞术证实PMBE诱导了GLC-82细胞的凋亡;细胞周期分析结果说明PMBE可以显著减少S期的GLC-82细胞;免疫杂交发现PMBE可以诱导caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的激活,并下调Bcl-2和Bid蛋白的表达.结论:PMBE可能通过激活caspase-8从而激活Bid蛋白,进一步激活caspase-9来诱导肺腺癌GLC-82细胞的凋亡.
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降糖通络汤对DPN大鼠NGF mRNA表达的影响及对雪旺细胞抗氧化、抗凋亡作用机制研究
目的:观察降糖通络汤对实验性糖尿病大鼠周围神经病变(DPN)治疗作用,并通过促进NGF、抗氧化、抗凋亡的环节对其作用机制予以研究.方法:采用静脉注射链脲佐菌素60mg/kg制备DPN模型,按血糖随机分为模型对照组、降糖通络汤36、18、9g生药/kg组、盐酸二甲双胍+甲钴胺分散片对照组(细胞实验为金芪降糖片),给药8周,1次/d.观察给药后2、8周空腹血糖及光热辐射痛阈变化,免疫组织化学测定坐骨神经的神经生长因子(NGF)蛋白表达、RT-PCR法测定NGF mRNA表达.IF测定高糖培养SC细胞中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达、RT-PCR法测定高糖培养雪旺细胞还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p22-phox亚基表达.RT-PCR法测定细胞Casepase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA表达,TUNEL法测定雪旺细胞凋亡.结果:降糖通络汤36、18g生药/kg组可明显降低空腹血糖(P＜0.01),缩短对热光源刺激的躲避潜伏期(P＜0.01).促进坐骨神经NGF mRNA表达(P＜0.01),抑制细胞核iNOS、NADPH p22-phox mRNA表达(P＜0.01)、抑制Casepase-3 mRNA表达(P＜0.01)、促进Bcl-2 mRNA表达(P＜0.01),抑制凋亡率.结论:降糖通络汤通过促进NGF、抑制氧化应激、控制凋亡发挥对周围神经病变的治疗作用.
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扶正祛邪含药血清对白血病HL60/VCR细胞Bcl-2表达水平的影响
目的:观察扶正祛邪中药复方含药血清对长春新碱诱导的急性早幼粒白血病耐药细胞株H L60/VCR0细胞耐药基因Bcl-2表达水平的影响.方法:采用流式细胞术检测法,选择HL60/VCR细胞为靶细胞,观察不同浓度扶正祛邪含药血清对其耐药基因Bcl-2表达的影响.结果:扶正祛邪含药血清对HL60/VCR细胞内凋亡抑制基因Bcl-2的表达有明显抑制作用,其中含药血清高、中、低剂量组荧光强度依次为401.67±0.86、453.69±0.40、516.66±0.40.结论:扶正祛邪复方中药抗白血病多药耐药的作用可能与下调Bcl-2的表达有关.
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杭白菊黄酮对高糖诱导的血管内皮细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响
目的:研究高糖诱导下,杭白菊黄酮对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达Bax、Bcl-2的影响.方法:将HUVEC分为空白对照组、正常血糖组、高糖刺激组和杭白菊高、中、低剂量组,作用24和48h后,观察各组细胞形态变化,采用MTT法检测细胞生长状况,RT-PCR法检测内皮细胞Bax、Bcl-2的表达.结果:高糖诱导下,杭白菊黄酮可下调Bax的表达,上调Bcl-2的表达,而杭白菊黄酮呈剂量依赖性抑制Bax表达,增强Bcl-2表达.结论:杭自菊黄酮可通过下调高糖诱导的血管内皮细胞Bax表达,上调Bcl-2表达,抑制血管内皮细胞凋亡,在一定程度上有助于防治糖尿病血管病变,为临床应用杭白菊防治糖尿病患者血管并发症提供理论参考.
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盐酸小檗碱抑制实验性大鼠胃癌前病变细胞Bcl-2表达作用的研究
传统中药黄连的主要有效成分小檗碱具有利胆、抗炎、抗肿瘤的作用,近年来的研究表明[1]盐酸小檗碱能够诱导人胃癌细胞凋亡,笔者的研究也证实了这一点(另文发表).本研究以实验性大鼠胃癌前病变为模型,免疫组化与RT-PCR技术相结合,从蛋白及mRNA表达两个水平,探讨盐酸小檗碱对Bcl-2基因表达水平的影响.
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杨梅醇对人肝癌HepG2细胞Caspase-9、Bcl-2、p21和Bax表达水平的影响
目的:检测杨梅醇体外对人肝癌HepG2细胞肿瘤相关基因表达的影响.方法:采用qRT-PCR和Westemblot分别检测杨梅醇处理前后HepG2细胞肿瘤相关基因在mRNA和蛋白质水平的表达变化.结果:杨梅醇降低了Caspase-9和Bcl-2基因和蛋白的表达水平,同时提高了p21基因和蛋白以及Bax蛋白的表达水平.结论:杨梅醇通过下调Caspase-9和Bcl-2基因表达,同时上调p21和Bax基因表达而发挥抑制HepG2细胞增殖的作用.
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金丹活性部位对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的:探讨金丹活性部位对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:将金丹活性部位对MIRI大鼠进行干预,应用免疫组化法检测大鼠心肌Bax、Bcl-2表达的变化.结果:与模型组相比,水洗脱组,60％醇洗脱组和预处理组Bax灰度值均有明显升高;Bcl-2灰度值均明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:金丹60％乙醇洗脱组与水洗脱组均能明显上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax的蛋白表达,说明其可能通过抑制细胞凋亡而发挥保护MIRI的作用.
