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黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞自噬相关基因表达的影响
目的：考察黄连解毒汤含药血清对RAW264．7巨噬细胞自噬的影响，初步探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：采用大、中、小剂量黄连解毒汤水煎剂灌胃干预SD大鼠，制备含药血清；经MTT法观察含药血清对细胞增殖的影响后，选择各剂量浓度为20％的含药血清干预体外培养的巨噬细胞，采用荧光定量PCR方法检测自噬相关基因Beclin1和mTOR的mRNA表达水平；Western blot检测Beclin1、p－mTOR蛋白的表达变化。结果：与正常对照组血清相比，黄连解毒汤含药血清干预后诱导了Beclin1 mRNA及蛋白的表达，抑制了mTOR mRNA及p－mTOR蛋白的表达。结论：黄连解毒汤含药血清可诱导RAW264．7巨噬细胞自噬相关基因Beclin1的表达、抑制mTOR的表达，这可能是该方抗动脉粥样硬化作用的重要机制之一。
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mTOR 在 HER-2阴性乳腺癌中的表达及意义
目的：观察 mTOR 蛋白在 Her-2阴性乳腺癌中的表达，探讨其与 Her-2阴性乳腺癌发生发展相关性，为Her-2阴性乳腺癌寻找新的治疗靶点。方法采用免疫组织化学技术检测65例 Her-2阴性乳腺癌、癌旁组织及正常乳腺组织中 mTOR 的表达情况。结果 Her-2阴性乳腺癌组织中 mTOR 蛋白表达明显高于癌旁组织及正常乳腺组织，差异有统计学意义（P ＜0．05）。mTOR 阳性表达在腋窝淋巴结阳性组明显高于淋巴结阴性组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论mTOR 可能与 Her-2阴性乳腺癌发生与发展相关，与腋窝淋巴结转移相关，可作为 Her-2阴性乳腺癌的预后指标及新的治疗靶点。
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mTOR、LC3蛋白表达与Ⅰ期非小细胞肺癌相关性的研究
目的 检测mTOR和LC3在Ⅰ期非小细胞肺癌组织中的表达量,探究二者与患者长期生存率的关系.方法 将组织标本分为Ⅰ期非小细胞肺癌组和癌旁组织对照组,分别应用免疫组化法检测检测mTOR和LC3在两组组织中的表达量,分析比较5年存活率与mTOR和LC3蛋白表达量的关系.结果 肺癌组中mTOR蛋白表达量显著高于癌旁组织对照组,差异具有统计学意义(=23.94,P<0.05).肺癌组中LC3蛋白表达量明显低于癌旁组织对照组,差异具有统计学意义(=17.76,P<0.05).Ⅰ 期非小细胞肺癌患者中mTOR蛋白阳性者5年存活率为45.16%(14/31),mTOR蛋白阴性者5年存活率为92.86%(13/14),mTOR蛋白阴性者5年存活率高于阳性者,二者差异有统计学意义(P<0.05).Ⅰ期非小细胞肺癌患者中LC3蛋白阳性者5年存活率为66.67%(26/39),LC3蛋白阴性者5年存活率为16.67%(1/6),LC33蛋白阳性者五年存活率高于阴性者,但二者差异没有统计学意义(P>0.05).结论 mTOR在Ⅰ期非小细胞肺癌中表达上调LC3表达下调,而LC3蛋白阳性者mTOR蛋白可能是Ⅰ期非小细胞肺癌预后的危险因素,而LC3蛋白可能是保护因素
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姜黄素通过抑制PI3K/Akt/mTOR促进SiHa细胞自噬
目的 研究姜黄素素诱导人宫颈癌细胞自噬的机制及对细胞功能的影响.方法 采用10,20,和30 μmol/L姜黄素处理宫颈癌SiHa细胞12 h,随后采用Western-blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt和mTOR的磷酸化水平.同时采用自噬抑制剂3-MA处理细胞,采用MTT法观察处理前后SiHa细胞活性变化情况;ELISA检测IFN-γ的分泌水平,Western blot检测凋亡相关基因p53,p21和p27表达变化.结果 姜黄素能以剂量依赖性方式抑制Akt和mTOR磷酸化.同时,姜黄素也能抑制SiHa细胞增殖并诱导其分泌IFN-γ.当同时给予3-MA处理后,可明显逆转姜黄素对SiHa生长增殖的抑制作用,同时也能消除姜黄素诱导其分泌IFN-γ.此外,姜黄素也能上调细胞内p53,p21和p27的表达,抑制自噬后,p53,p21和p27表达明显减少.结论 姜黄素可通过抑制PI3K/Akt/mTOR活性诱导SiHa细胞自噬,终抑制其增殖并诱导其分泌IFN-γ及表达p53,p21和p27.
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TSA对甲状腺鳞癌细胞株Akt、p21、mTOR基因表达的影响
目的 观察曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株Akt、mTOR和p21基因表达的影响,探讨TSA抗甲状腺癌的作用机制.方法 体外培养SW579细胞,用CCK-8法检测TSA对SW579的生长抑制作用,计算半数抑制浓度.实验分为对照组、TSA组、Wortmannin组、Wortmannin+TSA组、Rapamycin组,用RT-PCR方法检测SW579细胞Akt、p21及mTOR的mRNA表达,分析各处理组Akt、p21及mTOR基因表达变化.结果 CCK-8结果显示,TSA可明显抑制SW579的增殖,并呈剂量依赖性,半数抑制浓度约为147 nmoL/L.RT-PCR检测结果表明,与对照组相比,TSA组、Wortmannin组和Wortmannin+TSA组Akt、mTOR mRNA表达水平明显降低,TSA组p21表达显著上调,Wortmannin组p21表达明显降低,各组mTOR表达均明显降低.结论 TSA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,其机制可能与TSA降低SW579细胞Akt、mTOR基因的表达,进而再上调p21的表达有关.
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缺氧活化AMPK/mTOR通路对脑血管内皮细胞增殖及代谢的影响
目的 研究缺氧活化脑血管内皮细胞中AMPK及下游mTOR通路对脑血管内皮细胞增殖和代谢的调控作用.方法 分别用正常氧对照组、低氧(15％、10％、5％、1％)处理脑血管内皮细胞.用CCK8方法检测脑血管内皮细胞增殖情况;流式细胞术检测脑血管内皮细胞活性氧(ROS)含量和细胞凋亡率;Western印迹检测细胞AMPK、mTOR的磷酸化水平及敲低AMPK和抑制mTOR后AMPK、mTOR的磷酸化水平.结果 缺氧可抑制脑血管内皮细胞的增殖和代谢,并促进脑血管内皮细胞的凋亡;缺氧可上调脑血管内皮细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR的磷酸化水平;敲低AMPK后,mTOR的磷酸化水平升高,而抑制mTOR通路对AMPK的磷酸化水平无显著影响.结论 缺氧可通过激活AMPK通路,进而抑制mTOR通路的活化,从而抑制脑血管内皮细胞的增殖和代谢,并促进脑血管内皮细胞凋亡.mTOR蛋白为AMPK通路下游的靶蛋白.
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RhoC和mTOR蛋白影响肝癌细胞转移的研究进展
RhoC和mTOR蛋白在肝癌细胞转移过程中介导细胞外基质降解、肿瘤细胞迁移、黏附、增殖及新生血管生成等各环节的变化.本文对RhoC和mTOR蛋白在肝癌细胞转移各环节中的作用及其在促进肝癌细胞转移方面的协同作用作一综述.
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透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR信号通路的影响
目的:研究透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞H3k/Akt/mTOR蛋白表达的影响,探讨透骨草提取物对SKOV-3细胞作用的分子机制.方法:免疫组化法检测透骨草提取物对SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白表达的影响.结果:37.8 μg/mL透骨草提取物作用于SKOV-3细胞24h后,SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白表达明显低于与对照组(P＜0.05),表明透骨草提取物可下调SK-OV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白的表达.结论:透骨草提取物可能通过PI3k/Akt/mTOR途径抑制SK-OV-3细胞增殖.
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瘦素系统对Th17细胞分化和功能的影响
Th17细胞在介导炎性反应、自身免疫性疾病、移植排斥和肿瘤等的发生发展中发挥着重要的作用.瘦素是一类脂肪源性细胞因子,具有多种免疫调控作用.瘦素可以通过上调RORγt的表达和转录,促进初始CD4+T细胞向Th17细胞分化,但不影响该细胞的增殖.雷帕霉素哺乳动物靶位(mTOR)可以调控初始CD4+T细胞的分化方向,mTORC1和mTORC2分别调节不同Th亚群的生成.研究瘦素系统与Th17细胞的关系和调控机制,将有助于通过靶向瘦素系统和AKT-mTOR信号通路来调控病理环境中的Th17细胞的免疫应答,可以为疾病的治疗提供新思路和新策略.
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AMPK-mTOR-ULK1/2信号通路与自噬
自噬(autophagy)又称Ⅱ型细胞死亡,是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程.研究发现,自噬与多种疾病的发生发展密切相关,包括阿尔兹海默症、心肌病、肿瘤.AMPK-mTOR-ULK1/2信号通路对自噬具有重要的调控作用,对该通路的深入研究将有助于更好地理解细胞自噬过程,并为自噬相关疾病的治疗提供新的靶点.该文总结了AMPK-mTOR-ULK1/2信号通路中各分子的作用及其对自噬的调控机制及相关研究进展.
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生酮饮食对难治性癫痫患儿滤泡辅助性免疫细胞的影响
目的:探讨难治性癫痫患儿应用生酮饮食对其滤泡辅助性T细胞及B细胞的影响.方法:将32例难治性癫痫患儿设为实验组,选取正常同龄对照20例,流式细胞术检查生酮饮食治疗前后Tfh细胞及B细胞比例,ELISA检测IL-21血清中浓度,RT-PCR检测Blimp-1、Bcl-6、mTOR基因表达情况.结果:生酮治疗后Tfh细胞数量明显下降,Tfh细胞抑制因子Blimp-1表达降低,转录相关因子Bcl-6表达也降低,血清中IL-21浓度及mRNA表达均显著减低,CD27+IgD-B细胞、CD27+IgD-BCD38bigb与治疗后相比显著下降.治疗后Tfh细胞及各阶段B细胞与mTOR表达存在正相关关系.结论:KD治疗通过mTOR降低了Tfh细胞与B细胞比例或是抑制了Tfh细胞与B细胞的功能,这可能是导致接受KD治疗过程中少数患儿出现低丙种球蛋白血症原因.
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Rheb过表达在前体脂肪细胞株3T3-L1分化中的作用
目的:利用前体脂肪细胞株3T3-L1细胞观察mTOR (mammalian target of rapamycin)信号通路中上游调控因子Rheb(Ras homolog enriched in brain)对其分化的影响.方法:利用高表达Rheb的基因重组质粒转染前体脂肪细胞株,3T3-L1.通过蛋白质免疫印迹实验鉴定质粒成功转染细胞后,诱导该细胞脂肪分化.予以分化第8天的3T3-L1细胞油红染色,并检测细胞内甘油三酯的含量.另外,我们用Western blot方法检测脂肪细胞特异性转录因子PPAR-γ(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ)和C/EBP-α(CCAAT-enhancer-binding protein-α)的表达情况来研究Rheb在脂肪细胞分化过程中的作用.结果:我们成功构建了高表达Rheb的3T3-L1细胞株,发现高表达Rheb后可以促进脂滴的生成,油红O染色有显著区别,与对照组相比Rheb高表达组的三酰甘油含量明显升高(P＜0.05);C/EBP-α和PPAR-γ等脂肪细胞特异性的转录因子蛋白表达量与对照组相比也均有升高(P＜0.05).结论:Rheb基因作为mTOR通路上游调控因子,可以促进脂肪细胞的分化.
关键词： Rheb mTOR 3T3-L1前脂肪细胞分化 -
mTOR/4E-BP1参与诺考达唑诱导的Dami细胞多倍体化调控
目的:多倍性是物种形成的重要机制,决定一些重要器官细胞产生的数量和功能,而且与某些病理过程(如恶性肿瘤)的发生有密切关系.我们通过建立相对同步化的多倍体细胞模型,已经证实mTOR/S6K1参与多倍体细胞周期的调控.本课题主要研究mTOR下游的另一个重要信号分子4E-BP1是否也参与细胞的倍体化调控.方法:诺考达唑诱导Dami细胞建立相对同步化的多倍体细胞模型,Western-blot分析多倍体细胞模型中mTOR/4E-BP1通路信号分子表达和磷酸化修饰位点的变化,流式细胞仪双荧光分析4E-BP1不同结构域磷酸化位点修饰与细胞周期各时相的关系.结果:诺考达唑诱导的Dami细胞可作为相对同步化的多倍体细胞周期模型,在二倍体和多倍体细胞周期中,mTOR表达增加及第2448位丝氨酸位点磷酸化发生在G1期进入S期,4E-BP1的第37,46位苏氨酸和第65位丝氨酸位点磷酸化发生在G2/M期.结论:mTOR/4E-BP1通路参与多倍体细胞周期的调控.
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雷帕霉素对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响
目的:探讨雷帕霉素(Rapamycin)对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响.方法:采用胶原酶灌注方法分离和培养小鼠原代肝细胞,采用100 μM油酸诱导肝细胞内脂肪的合成.采用0、10、20、50μM的雷帕霉素处理肝细胞12hr后,利用中性脂肪染料Bodipy 493/503对肝细胞内的脂滴进行染色,荧光显微镜下观察细胞脂滴形态和数量.定量试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)的含量利用Western blot检测不同浓度雷帕霉素处理的小鼠原代肝细胞脂滴表面蛋白ADRP的表达水平.结果:成功分离和培养了小鼠原代肝细胞,使用油酸处理能够明显增加原代肝细胞内脂滴的数量.随着体外雷帕霉素处理浓度的增加,荧光显微镜下观察发现原代肝细胞内脂滴的数量呈现明显的下降趋势,甘油三酯的含量也呈见明确的下降趋势,在20 μM浓度下就表现出显著性差异.Western blot结果显示雷帕霉素能够在抑制肝细胞内脂肪储积的同时降低脂滴表面蛋白ADRP的表达水平,并且随着雷帕霉素处理浓度的增加,其对ADRP表达的抑制越明显.结论:雷帕霉素能够抑制肝细胞内中性脂肪的储积,同时降低脂滴表面蛋白ADRP的表达水平.也间接说明了mTOR信号通路能够影响肝细胞内脂肪的储积,也为脂肪肝的防治提供了一个新的实验基础.
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雷帕霉素对内皮细胞迁移和血管内皮生长因子表达的影响
目的:研究不同浓度的雷帕霉素对体外培养的人血管内皮细胞(VE)迁移及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:用含l0％胎牛血清的细胞培养基(DMEM)培养正常VE细胞,用10nM,50nM,100nM和200nM的雷帕霉素孵育VE细胞24 h,Western bloting测定雷帕霉素对VE中mTOR和VEGF表达的影响,Transwell迁移模型观察不同浓度的雷帕霉素对内皮细胞迁移影响.结果:①雷帕霉素可显著抑制VE的迁移,除了在l00nM之外,基本呈浓度依赖性的.100nM雷帕霉素对VE迁移的抑制作用显著减弱(P＜0.0l).②雷帕霉素对mTOR和VEGF165的表达呈浓度依赖性的抑制；而VEGF121的表达则是先升高后降低,在100nM雷帕霉素时表达高,远远高于该浓度雷帕霉素时VEGF165的表达,可以解释100riM雷帕霉素时VE迁移抑制显著减轻的现象.结论:雷帕霉素抑制了VEGF 165的表达,并且其对VE迁移抑制的效应主要由VEGF 165表达减少所介导.VEGF121的表达在一定雷帕霉素浓度范围内可显著上调,从而显著改善了雷帕霉素诱导的VEGF 165表达减少所致的内皮细胞迁移抑制.
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mTOR信号通路诱导的自噬在心肌细胞缺氧损伤中的作用研究
目的:探讨自噬在心肌细胞缺氧损伤中的作用及分子机制.方法:体外分离培养乳鼠心肌细胞,体外建立缺氧/去血清(H/SD)模型以模拟在体的缺血环境.分别给予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3MA,5 rmM)和mTOR抑制剂雷帕霉素(1.0 μg/L)调节心肌细胞自噬水平.分别采用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western blot方法检测心肌细胞蛋白表达水平.结果:H/SD损伤可以显著诱导心肌细胞自噬水平(P＜0.05),并且细胞自噬水平可以被3-MA及雷帕霉素调节.同时,H/SD可以显著增加心肌细胞凋亡(P＜0.05),而给予3-MA抑制自噬水平可以减少细胞凋亡(P＜0.05).相反,雷帕霉素增加自噬同样可以加重缺氧导致的心肌细胞凋亡(P＜0.05).H/SD损伤过程中,心肌细胞mTOR信号通路被激活,而自噬抑制剂3-MA可以显著提高缺氧条件下心肌细胞中p-mTOR(Ser2448)的表达水平(P＜0.05),并增加mTOR下游分子p-p70S6k(P＜0.05)和p-S6(P＜0.05)的表达.结论:mTOR信号通路诱导的细胞自噬可能参与了缺氧损伤诱导的心肌细胞凋亡.
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雷帕霉素对低氧下HL-60细胞的低氧调控信号分子表达的影响
目的:通过小分子化合物氯化钴( CoC12)模拟的低氧环境,分析低氧下及其雷帕霉素(RPM)作用下人急性髓细胞白血病细胞HL-60的低氧调控信号分子表达的变化；方法:常规方法复苏、传代、培养HL-60细胞,培养细胞进入对数生长期后用于实验.低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组分别用含200μmol/L CoC12、200μmol/L CoCl2/20nmol/L RPM、20nmol/L RPM的1640培养基处理生长状态良好的细胞,对照组细胞用1640培养基培养,各组置培养箱以37℃、5％ CO2培养,并于处理后24h、48h、72h收集细胞用于检测；采用实时荧光定量PCR方法检测低氧诱导因子(HIF-1α)、内皮细胞生长因子(VEGF)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及GAPDH在转录水平的表达；结果:①.与各时段对照组相比,低氧模拟组HIF-1α表达随时间逐渐增加,72h明显上调；与常氧雷帕霉素处理组各时段比较,低氧雷帕霉素处理组HIF-1α表达早期(24h)相对下调,后期相对上调；②.与对照组比较,各处理组mTOR表达均下调,低氧雷帕霉素处理组在早期(24h)下调显著；与常氧雷帕霉素处理组比较,低氧雷帕霉素处理组mTOR各时段的表达均相对下调；③与对照组各时段相比,低氧模拟组VEGF的表达在早期显著上调,但后期呈下调；常氧雷帕霉素处理组各时段VEGF的表达下调,与其比较,低氧雷帕霉素处理组各时段均呈相对下调.结论:常氧和低氧下RPM作用HL-60细胞后VEGF、mTOR的mRNA均表达下调,RPM可在低氧环境下增强了这种下调表达作用.
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缺氧信号转导通路的研究进展
人体组织和细胞在环境氧浓度改变的条件下,通过氧感受器和信号转导通路特异地调节某些基因或蛋白的表达来适应低氧.同时在缺氧情况下,缺氧反应导致多种细胞信号通路的激活参与调节呼吸、代谢、细胞生存等.在哺乳动物体内,HIFs是主要的低氧应激转录因子,其α亚基受到多种因素的影响,如PHDs、FIH1、线粒体、CHIP,本文将在常氧和缺氧状态下,对HIF稳定性调节机制及缺氧所介导相关信号转导通路进行综述.
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mTOR信号通路与自噬在肿瘤中的研究进展
自噬是以细胞内自噬体形成为特征,通过溶酶体吸收降解自身受损细胞器和大分子的一种自我消化过程,是细胞维持稳态的重要机制.自噬广泛参与多种重要的细胞功能,既能在代谢应激状态下保护受损细胞,又可能因为过度激活导致细胞发生Ⅱ型程序性死亡,从而引发多种疾病,尤其对肿瘤的发生和发展更是发挥着“双刃剑”的作用.自噬通过多种分子信号机制调控肿瘤进程,包括mTOR依赖性和mTOR非依赖性途径.mTOR作为生长因子、能量和营养状态的感受器,可通过调节下游自噬复合物的形成,直接调控细胞自噬.阐明mTOR与细胞自噬的相互作用机制将有助于从分子水平上对各肿瘤病变进行分析和治疗.因此,本文就自噬与PI3K/Akt/mTOR通路在肿瘤中的研究进展作一综述.
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mTOR介导的骨骼肌蛋白质翻译调控
胰岛素、氨基酸和力量运动刺激信号转导的共同终点是蛋白激酶mTOR.mTOR及其下游靶标在调控蛋白质合成过程中起着中枢作用.研究mTOR的上游和下游事件将有助于进一步了解骨骼肌内蛋白质合成及肥大的机制.更进一步详细研究不同组合(营养和力量运动)引起的骨骼肌内mTOR信号通路的变化特征有着更重要的实际意义.
