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mTOR和PTEN基因在大肠癌组织中的表达及临床意义
目的 观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和10号染色体同源丢失性磷酸酶基因和张力蛋白基因(PTEN)与大肠癌(CRC)的关系以及与CRC临床病理特征的相关性,为CRC的早期诊断和预后判断提供参考依据.方法 外科手术中获取CRC组织及癌旁组织各72例,采用逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)检测CRC组织及癌旁组织中mTOR和PTEN基因的RNA水平表达变化.结果 CRC组织中mTOR基因的表达明显高于癌旁组织,PTEN基因的表达明显低于癌旁组织,其差异均有统计学意义(P＜0.05);CRC组织中mTOR、PTEN基因的RNA表达与性别、年龄、肿瘤部位差异无统计学意义(P＞0.05),与不同肿瘤分化程度、有无淋巴结转移以及Dukes分期差异有统计学意义(P＜0.05).相关性分析显示,mTOR和PTEN在CRC中的表达呈负相关(P＜0.05).结论 抑制mTOR基因的表达或者是增强PTEN基因的表达极有可能成为预防和或治疗CRC的有效方法之一.
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下调PGI/AMF基因协同人参皂苷Rh2对白血病KG1α细胞作用的体外研究
目的 通过干扰RNA的方法下调人磷酸葡萄糖异构酶/自分泌因子(PGI/AMF)基因的表达,研究人PGI/AMF基因协同人参皂苷Rh2对白血病KG1α细胞的影响.方法 将对数生长期KG1α细胞及转染细胞分成对照组和用药组,对照组常规培养,药物组细胞培养体系中分别加入30、45、60、75、90 μmol/L的人参皂苷Rh2,各组分别培养24、48、72 h后,CCK-8检测人参皂苷Rh2对白血病KG1α及转染株细胞增殖的影响;台盼蓝检测人PGI基因对KG1α细胞增殖的影响;Antibody Array检测人参皂苷Rh2对Akt通路蛋白的影响;Western blotting检测下调PGI/AMF与人参皂苷Rh2在mTOR、Raptor、Rag蛋白表达变化方面的相关性.结果 人参皂苷Rh2抑制KG1α的增殖;下调PGI/AMF使KG1α对人参皂苷Rh2更加敏感;下调PGI基因抑制细胞增殖;Antibody Array结果显示人参皂苷Rh2通过下调P38、mTOR、Akt、AMPKα、PARP、Bad的表达影响KG1α增殖;Western blotting结果显示下调PGI基因通过抑制mTOR、Rag、Raptor表达与人参皂苷Rh2产生协同作用调节人白血病细胞增殖.结论 下调PGI基因协同人参皂苷Rh2抑制KG1α细胞的增殖.
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雷帕霉素对慢性髓性白血病细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 探讨雷帕霉素对慢性髓性白血病(CML)细胞增殖的抑制作用及可能机制.方法 用不同浓度雷帕霉素处理CML细胞系K562细胞,用MTT法检测雷帕霉素对K562细胞的增殖抑制率；Western blot法及RT-PCR法检测不同浓度雷帕霉素作用后的K562细胞中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白及mRNA表达水平,Western blot法检测CML慢性期患者骨髓原代细胞中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白及磷酸化水平,并以健康人骨髓细胞为对照；数据采用x2检验、Fisher确切概率计算、单因素方差分析(ANOVA)方法进行分析.结果 CML慢性期患者骨髓中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白磷酸化水平与正常对照相比明显增高(70.6％对30.0％,76.5％对40.0％,73.5％对20.0％,P值均＜0.05)；20 nmol/L及更高浓度雷帕霉素对K562细胞增殖有明显抑制作用；雷帕霉素作用可降低K562细胞中mTOR磷酸化水平,及4E-BP1、p70S6K蛋白及mRNA表达水平(P值均＜0.05).结论 mTOR途径在CML的发病中发挥重要作用,其靶向抑制剂雷帕霉素可通过阻断mTOR途径抑制K562细胞增殖.
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慢病毒介导的RNA干扰下调TSC2表达对白血病U937细胞系的影响及作用机制
目的 研究下调TSC2基因表达对白血病U937细胞系的生物学作用及其对mTOR通路活性的影响.方法 选择TSC2高表达的U937细胞系,通过慢病毒介导的RNA干扰技术下调TSC2基因表达;采用CCK-8比色法、细胞集落形成实验和流式细胞术检测其对细胞增殖、分化和凋亡的影响;采用Western blot法和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测TSC2表达下调对mTOR通路蛋白表达及活性的影响.结果 TSC2基因表达降低能够促进U937细胞的增殖和集落形成(P<0.05);能够使U937细胞G1期[(52.53±3.75)%对(75.10±4.33)%,t=6.829,P=0.002]比例明显降低,G2/M期[(22.43±1.00)%对(15.47±1.20)%,t=-5.581,P=0.019]、S期[(25.03±4.34)%对(14.33±0.91)%,t=-5.413,P=0.013]比例升高;对细胞分化和细胞凋亡没有明显影响(P>0.05).TSC2基因表达下调后,mTOR活性升高,磷酸化的4EBP1和S6K1蛋白活性升高,而AKT蛋白活性没有明显变化;与细胞增殖相关的基因cyclin D1、c-myc表达升高,PTEN基因表达升高,P27KIP基因和凋亡相关基因BCL-XL的表达没有明显的改变.结论 TSC2基因表达下调可以通过调节mTOR通路活性促进白血病细胞的增殖.
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间变性大细胞淋巴瘤中AKT、mTOR途径活化的研究
目的 研究间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)患者中间变性淋巴瘤激酶(ALK)及磷酸化AKT(p-AKT)、mTOR(p-mTOR)、4E-BPI(p-4E-BPI)和p70S6K(p-p70S6K)的表达特点、临床意义及相互关系.方法 应用免疫组织化学EnVision法检测ALK蛋白及p-AKT、p-mTOR、p-4E-BP1、p-p70S6K蛋白的表达.结果 81例ALCL患者中有51例(63.0%)表达ALK蛋白,30例(37.0%)不表达,ALK阳性患者预后优于阴性患者(P<0.05).71例患者中54例(76.1%)表达p-AKT,p-AKT的表达与ALK表达相关(P<0.05);57例(80.3%)表达p-mTOR,p-mTOR的表达与ALK、p-AKT表达相关(P<0.05);64例(90.1%)表达p-4E-BP1,66例(93.0%)表达p-p70S6K,p-4E-BP1及p-p70S6K的表达与p-mTOR表达相关(P<0.05),与ALK、磷酸化p-AKT表达无关(P>0.05).p-AKT、P-mTOR、p-4E-BP1及p-p70S6K的表达与预后无关(P>0.05).COX比例风险回归分析表明ALK的表达、体质性症状对患者生存影响有统计学意义(P<0.05),其中,ALK的表达对生存的影响大.结论 p-AKT、P-mTOR、p-4E-BP1和p-p70S6K在ALCL患者中均有表达,但在ALK阳性患者中表达率显著高于阴性患者.p-AKT、P-mTOR表达与ALK表达相关,提示在ALK阳性ALCL患者中存在AKT/mTOR通路的激活,但无明显的预后意义.
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mTOR的反馈激活机制及其抑制剂的抗肿瘤应用
mTOR是处于调节细胞代谢、生长、增殖等整个过程中心环节的重要激酶.干扰或抑制mTOR会引起细胞尤其是癌细胞的生长停滞继而死亡.因而也被公认为是癌症治疗当中的一个潜在靶标.一系列的mTOR抑制剂Rapamycin及类似物已经形成并在临床抗肿瘤中有所应用,但其展示的效应非常有限.随着研究的深入,发现mTOR信号通路存在反馈激活机制:即抑制mTOR能反馈性激活多个与细胞生长增殖相关的信号通路.并且认为是这些反馈激活机制削弱了mTOR抑制荆的效能.也是其临床效应未达预期的原因.本文就目前国内外研究较深入的mTOR-AKT,mTOR-ERK,mTOR-elF4E反馈信号通路做详细概述.并阐述目前采取的防止这一反馈机制形成的Rapamycin类似物与特定通路抑制剂的联合用药策略,使mTOR抑制剂在临床抗肿瘤中能充分发挥其效能.
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非小细胞肺癌大分割放疗敏感性与PI3K/AKT/mTOR信号通路研究进展*
常规分割放疗在中晚期非小细胞肺癌治疗中疗效有限，大分割放疗地位越来越重要，但仍有相当部分肿瘤细胞具有放射线抗拒，其分子机制未明。PI3K/AKT/mTOR信号通路与非小细胞肺癌常规分割放疗抗拒有关，但与大分割放疗抗拒关系尚未明确。调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的基因表达及蛋白磷酸化水平有望增加NSCLC肿瘤细胞对大分割放疗的敏感性，并可能达到逆转放疗抗拒的效果；在PI3K/AKT/mTOR信号通路的诸多基因中，有望从临床样本中筛选获得预测NSCLC大分割放疗疗效的分子标记。
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IQGAP1通过mTOR信号通路促进肝癌细胞增殖
目的:研究IQGAP1(IQ domain GTPase-activating proteins,IQGAP1)对肝癌细胞株增殖及mTOR信号转导通路的影响,阐述其诱导细胞增殖的机制.方法:Western blot检测IQGAP1在肝癌细胞株HepG2、Huh-7中的表达.选择高表达IQGAP1的细胞株,针对IQGAP1基因的mRNA序列合成siRNA,采用脂质体转染法将其转入HepG2细胞;采用MTT法分析细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞周期变化;免疫印迹法观测IQGAP1、mTOR和p-mTOR蛋白表达的变化.结果:IQGAP1在HepG2和Huh-7细胞中均表达,且在HepG2细胞中表达高于Huh-7细胞.IQGAP1 siRNA转染HepG2细胞后,抑制细胞的增殖;DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例上升,合成期(S期)细胞比例下降;mTOR表达变化不明显,而p-mTOR的表达下降.结论:IQGAP1促进肝癌细胞的增殖,其机制可能是通过mTOR相关信号通路实现的.
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mTOR抑制剂放疗增敏的研究进展
放疗是肿瘤的重要治疗手段之一，仍有部分患者在接受放疗后存在复发或抗拒。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mamma-lian target of rapamycin，mTOR）是PI3K/AKT信号通路的主要效应分子，分为mTORC1和mTORC2，对细胞生长及增殖、细胞周期进展及蛋白翻译等均有重要调节作用。mTOR异常表达与肿瘤发生及治疗反应密切相关。肿瘤的放疗敏感性与“4R”效应有关。mTOR抑制剂可通过影响细胞周期进展、DNA损伤修复及抗血管形成等多种途径发挥放疗增敏作用。初期研究证实依维莫司具有放疗增敏作用并且毒性可耐受。应用mTOR抑制剂后不同细胞及个体反应不同，可能与基因表达状态有关，需进一步研究证实。
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mTOR信号通路在冠心病中的作用及中医药干预研究进展
冠心病居十大死因之首,其防治是医学界面临的棘手问题.诸多研究表明,心肌能量代谢是诱发或加重心肌缺血的重要因素.因此,研究心肌能量代谢途径并对其进行调节,或通过药物改善心肌代谢状况,对于维护心脏功能具有重要意义.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)细胞营养和生长的中心调控因子,可改善能量状态,调控其下游信号通路,调节细胞新陈代谢及细胞周期进程和细胞生长.文章综述了mTOR信号通路在冠心病发生、发展过程中的作用以及中药在其中发挥的调控作用.
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Ras协同mTOR/SREBP1-c上调miR-182-96-183在肝癌中表达
目的:探讨Ras癌基因诱导的miR-182-96-183高表达机制.方法:采取H-ras12V转基因小鼠肝癌及癌旁组织,miRNA高通量测序检测miR-182-96-183基因表达水平.Westernblot检测调控miR-182-96-183表达的相关信号通路活化状态及其上游转录因子蛋白表达水平.结果:miRNA高通量测序结果表明:与PT相比,T中miR-182-96-183 mRNA表达显著升高(P<0.01).Westernblot检测结果表明:与PT相比,T中ERK、mTOR活化水平显著升高,SREBP-1c蛋白水平显著升高.结论:Ras癌基因可能通过活化mTOR通路激活SREBP-1c上调miR-182-96-183的表达水平.
关键词： 肝癌 miR-182-96-183 RAS mTOR SREBP-1c -
mTOR、HIF-1a和IL-17在子宫内膜癌中表达情况的研究现状
子宫内膜癌为女性生殖道三大恶性肿瘤之一,近年来随着肥胖、糖尿病、老龄化增加以及倡导良性子宫疾病尽量保留子宫等影响,其发病率明显增高.其发病机制,一般认为与子宫内膜长期受雌激素作用而缺少孕激素抑制有关,然而子宫内膜癌患者平均发病年龄为60岁,大多数为低雌激素的绝经后妇女,说明存在其他的机制.据文献,mTOR、HIF-1a和IL-17参与子宫内膜癌的发生和发展,在其演进中扮演着重要角色.mTOR信号影晌Th17细胞的分化,Th17细胞高水平分泌IL-17,而这种影响与HIF-1a的上调有关,推断mTOR、HIF-1a及IL-17在子宫内膜癌中的表达应具有相关性.联合检测mTOR、HIF-1a及IL-17在子宫内膜癌中的表达,其敏感度及准确率可能高于单个细胞因子或任何两种细胞因子检测组合,为今后临床对子宫内膜癌的病情评估、治疗及预后判断提供新的、更有效的检测指标.
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去甲二氢愈创木酸对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响
目的 探讨不同浓度去甲二氢愈创木酸(NGDA)对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响及其机制.方法 应用MTT法测定0,5,10,20,30 μmol/L NGDA培养后成骨细胞MC3T3-E1增殖情况,利用流式细胞技术检测O,5,10,20μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1细胞周期,用Western blotting法检测0,10,20,30,60μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1成骨细胞mTOR通路蛋白表达情况.结果 NGDA浓度从5μmol/L开始有促进成骨细胞MC3T3-E1增殖的作用,20 μmol/L时MC3T3-E1增殖活性强,而30 μmol/L时MC3T3-E1增殖活性明显低于20 μmol/L时(P＜0.05).0,5,10,20μmol/L浓度的NGDA刺激下,成骨细胞MC3T3-E1进入S期的比例分别为28.9％,38.3％,44.2％,58.2％.NDGA浓度在20μmol/L时mTOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平明显高于0μmol/L时(P＜0.05),但30 μmol/L时mTOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平开始明显下降.结论 低浓度NDGA可明显促进成骨细胞MC3T3-E1增殖,诱导细胞周期进入S期,且呈剂量依赖关系,这一作用可能是通过对mTOR信号通路的激活来完成的.
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下丘脑mTOR信号通路的能量平衡调节效应
肥胖严重影响着发达国家人们的生活质量,而随着我国生活水平的提高,肥胖问题也逐渐凸现,正在成为健康的主要杀手之一.肥胖导致的其他疾病如糖尿病、心脑血管病等的发生也在增加,因此肥胖成为了一个世界难题.肥胖的发生机理尚未完全阐明,普遍认为肥胖形成过程中,遗传因素(肥胖敏感基因)和环境因素(如饮食、锻炼、社会因素和某些药物等)都发挥了重要的作用.
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创伤后应激障碍大鼠杏仁核神经元Akt和mTOR磷酸化降低
目的：探讨创伤后应激障碍(PTSD)大鼠杏仁核Akt和mTOR蛋白表达的变化。方法：随机将40只雄性Wistar大鼠分为对照组和模型组，采用改良的单一连续应激方法(SPS & S)建立PTSD大鼠模型，分别采用免疫组织化学染色和Western blot法检测杏仁核p-Akt和p-mTOR蛋白的表达。结果：模型组大鼠杏仁核p-Akt、p-mTOR的相对表达水平显著低于对照组，组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论：PTSD大鼠杏仁核Akt和mTOR磷酸化水平降低，可能与PTSD时杏仁核神经元的凋亡增加有关。
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mTOR对iNKT细胞发育和分化的影响
iNKT细胞是近发现的一类具有重要免疫功能的特殊T细胞亚群.其发育分化受多种因素的影响,新研究发现mTOR在iNKT细胞的发育分化中起关键作用.mTORC1控制着iNKT细胞阶段1、2、3的发育转变,且与PLZF互相调节影响iNKT细胞的发育分化,mTORC2在iNKT细胞由阶段1到2转变过程中起重要作用.促进mTORC1与mTORC2活化的主要有RasGRP1、PDK1和RheB.旨在阐明mTOR对iNKT细胞发育分化的影响.
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mTOR与脑胶质瘤研究进展
脑胶质瘤恶性程度高，易复发。临床和基础研究证实，多种信号传导通路与脑胶质瘤的恶性进展相关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路是调控细胞生长与增殖的一个关键通路，近年来，有关mTOR信号通道对脑胶质瘤发生机制的研究日益增多。在脑胶质瘤的治疗中，以mTOR为靶点的抗肿瘤靶向治疗可以通过控制mTOR的表达来抑制肿瘤生长，具有重要的临床意义。本文对mTOR和脑胶质瘤的研究进展进行综述。
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电针对阿尔茨海默病大鼠mTOR信号通路相关蛋白表达的影响
目的 探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织mTOR信号通路相关蛋白表达的影响.方法 将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组,采用Morris水迷宫检测空间学习和记忆能力的变化.HE染色观察各组海马CA1区组织形态变化;Western blot检测p-mTOR、p-p70S60K和p-4E-BP1的水平.结果 电针治疗可明显改善AD大鼠学习和记忆力,减轻海马CA1区组织形态的变化,并可降低海马组织p-mTOR和p-p70S60K的表达,而对p-4E-BP1的表达无明显影响.结论 电针治疗可能通过调控mTOR信号通路及下游蛋白p70S6K的表达,对抗Aβ诱导的神经元损伤,提高AD大鼠学习记忆功能.
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雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中自噬作用的影响?
目的：：通过观察雷公藤甲素对氨基核苷嘌呤霉素( puromycin amino nucleotide,PAN)损伤足细胞的mTOR通路及自噬水平的影响,探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对mTOR-自噬通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法：体外培养的小鼠足细胞系(MPC5)为研究对象,PAN分别不同时间(0 h、1 h、3 h、4 h、6 h、24 h)刺激小鼠足细胞,检测p-mTOR、Beclin1、synaptopodin表达含量的变化,成功构建PAN致足细胞损伤模型。后将足细胞随机分为以下4组：(1)对照组( Con组)；(2)PAN组(PAN组,PNA 50μg/ml)；(3)雷帕霉素(rapamycin,Rap)组(Rap组,PNA 50μg/ml+RAP 200 ng/ml)；(4) PAN+TP组( TP组,PNA 50μg/ml+TP 10 ng/ml)。各组培养时间均为4 h；采用western blot检测足细胞p-mTOR、p-Akt、p-ULK1、LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达量。结果：PAN处理不同的时间梯度,与Con组相比,PAN处理4 h后,诱导p-mTOR的表达、减少Beclin1、synaptopodin表达(P<0.05),成功建立PAN作用致体外足细胞损伤模型。与PAN组比较,雷公藤甲素可使p-mTOR、p-ULK1及p-Akt的表达明显上调(P<0.05),而LC3、Beclin1及Synaptopodin的表达明显下降(P<0.05)。结论：实验表明足细胞损伤可能与足细胞内自噬水平的变化有关,PAN刺激可能呈时间依赖性通过mTOR通路降低足细胞自噬水平,诱导足细胞损伤；雷公藤甲素可能通过作用mTOR通路调节足细胞自噬水平,从而对足细胞起保护作用。
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mTOR信号通路与肿瘤靶向治疗研究进展
mTOR接受上游信号激活后通过调控其下游的靶分子4E-BP1和p70S6K而发挥作用,该信号通路在调节细胞生长、细胞周期进程及蛋白质合成等过程中发挥重要作用.该通路的异常也与恶性肿瘤的活化及形成密切相关.目前,针对该通路的靶向抑制剂已应用于临床,因此对mTOR信号通路的深入研究对恶性肿瘤的靶向治疗中具有重要的意义.
