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雷帕霉素对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响
目的:探讨雷帕霉素(Rapamycin)对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响.方法:采用胶原酶灌注方法分离和培养小鼠原代肝细胞,采用100 μM油酸诱导肝细胞内脂肪的合成.采用0、10、20、50μM的雷帕霉素处理肝细胞12hr后,利用中性脂肪染料Bodipy 493/503对肝细胞内的脂滴进行染色,荧光显微镜下观察细胞脂滴形态和数量.定量试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)的含量利用Western blot检测不同浓度雷帕霉素处理的小鼠原代肝细胞脂滴表面蛋白ADRP的表达水平.结果:成功分离和培养了小鼠原代肝细胞,使用油酸处理能够明显增加原代肝细胞内脂滴的数量.随着体外雷帕霉素处理浓度的增加,荧光显微镜下观察发现原代肝细胞内脂滴的数量呈现明显的下降趋势,甘油三酯的含量也呈见明确的下降趋势,在20 μM浓度下就表现出显著性差异.Western blot结果显示雷帕霉素能够在抑制肝细胞内脂肪储积的同时降低脂滴表面蛋白ADRP的表达水平,并且随着雷帕霉素处理浓度的增加,其对ADRP表达的抑制越明显.结论:雷帕霉素能够抑制肝细胞内中性脂肪的储积,同时降低脂滴表面蛋白ADRP的表达水平.也间接说明了mTOR信号通路能够影响肝细胞内脂肪的储积,也为脂肪肝的防治提供了一个新的实验基础.
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细胞内脂滴及其相关Rab蛋白的研究进展
脂滴作为细胞内储存中性脂的主要部位，普遍存在于各类物种的各种细胞中。脂滴以中性脂肪为核心，表面覆盖单层磷脂结构，并镶嵌多种蛋白质。近年来的蛋白组学研究表明，脂滴相关蛋白通过静电或化学结合等方式定位在脂滴的表面，并可能参与调控脂代谢、膜转运以及信号转导等多个生理过程，进而揭示了脂滴在细胞内并不是一个简单的能量储存器，而是一个活跃的多功能细胞器。然而，Rab家族蛋白作为脂滴蛋白的一种，在介导脂滴与其它细胞器之间的信息交流可能发挥重要作用，目前，对其作用的具体机制仍未完全清楚。本文就近年来对脂滴的生物学研究及其相关的Rab蛋白研究作一综述。
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白藜芦醇对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响
目的:探讨不同浓度白藜芦醇(Res)对小鼠原代肝细胞脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达水平的影响.方法:采用胶原酶灌注方法,分离培养小鼠原代肝细胞；利用200 μmol/L油酸(0A)刺激小鼠原代肝细胞12 h后,加入0、20、50、100 μmol/L白藜芦醇,培养12 h后,采用Bodipy 493/503染色,荧光显微镜观察肝细胞内脂滴的形态和数量；采用Folch法抽提细胞内脂类,采用定量试剂盒测定甘油三酯(TG)的含量；采用Western blot法分析脂滴表面蛋白perilipin、adipophilin、TIP-47的表达水平.结果:与空白对照相比,采用20、50、100μmol/L白藜芦醇处理后均能够降低原代肝细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,但以50 μmol/L浓度效果为显著.Western blot结果显示,白藜芦醇能够降低原代肝细胞中perilipin、adipophilin和TIP-47的表达水平,其中以perilipin下降为明显.结论:白藜芦醇能够抑制肝细胞内中性脂肪的储积,以50 μlmol/L浓度效果为显著.可能通过调节细胞内脂滴表面蛋白的表达水平,从而影响脂滴的储积.
