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参蛇偏瘫胶囊联合依达拉奉治疗急性脑梗死的临床研究
目的 探讨参蛇偏瘫胶囊联合依达拉奉注射液治疗急性脑梗死的临床疗效.方法 选取2017年2月—2017年11月在赤峰学院附属医院治疗的急性脑梗死患者106例,根据用药的差别分为对照组(53例)和治疗组(53例).对照组静脉滴注依达拉奉注射液,30 mg加入100 mL生理盐水,2次/d;治疗组在对照组基础上口服参蛇偏瘫胶囊,1.6 g/次,3次/d.两组均治疗2周.观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者NIHSS、ADL和SF-36评分及血流流变学指标和血清学指标.结果 治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为81.13％和96.23％,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组NIHSS评分显著降低,ADL和SF-36评分显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05),且治疗后治疗组NIHSS、ADL和SF-36评分明显优于对照组(P<0.05).治疗后,两组红细胞压积(HCT)、全血黏度(WBV)、纤维蛋白原(FIB)和血浆黏度(PV)均显著降低(P<0.05),且治疗组上述血流流变学指标水平明显低于对照组(P<0.05).治疗后,两组血清酪蛋白磷酸肽(CPP)、血红素加氧酶1(HO1)、胱抑素C(CysC)水平均显著下降,转化生长因子 β1(TGF-β1)水平显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05),且治疗后治疗组上述血清学指标水平明显优于对照组(P<0.05).结论 参蛇偏瘫胶囊联合依达拉奉治疗急性脑梗死可有效改善机体血液流变学指标,降低机体炎症反应、促进神经功能恢复,有利于提高患者日常活动能力和改善生活质量.
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急性肾损伤的生物标志物——血红素加氧酶
急性肾损伤(AKI)是临床常见疾病,特别是危重病人,其发病率和死亡率均较高.AKI的病理生理过程复杂,涉及多种途径,包括炎症、细胞的自噬、细胞周期的变化和氧化应激等.近的证据表明对肾脏的单一严重损伤可导致慢性肾脏病的发生,因此,必须及时有效的治疗AKI.有证据表明血红素加氧酶1(HO-1)在动物AKI模型中的保护效应.HO-1调节氧化应激、细胞自噬和炎症,并通过直接和间接机制调节细胞周期的进程.
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脑出血患者颅内血肿中血红素加氧酶1和非结合胆红素的含量变化及其与迟发性脑水肿的关系研究
目的 研究脑出血患者颅内血肿中的血红素加氧酶1(HO-1)和非结合胆红素(UCB)的含量变化,探讨脑出血后迟发性脑水肿的病理机制.方法 选择脑出血行颅内血肿微创清除术患者30例(脑出血组),同时选择健康体检者20例(对照组);用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和钒酸盐氧化法检测对照组和脑出血组第1天、第3天和第6天颅内血肿中的HO-1和UCB含量,并应用多田公式计算术后第6天血肿周围脑水肿的体积.结果 脑出血组第1天颅内血肿中HO-1的含量(13.96±4.83)μg/L和UCB的含量(11.34±2.96)μmol/L均较对照组(3.53±2.07)μg/L、(7.13±2.74)μmol/L明显增高(P＜0.01);并且脑出血组第3天HO-1、UCB(25.60±7.13)μg/L、(28.45±7.69)μmol/L均达到高峰,第6天(18.77±5.39),μg/L,(20.18±4.75)μmol/L有所下降,与第1天比较差异均有统计学意义(P＜0.01).并且第6天HO-1和UCB的含量与脑水肿的体积均呈正相关(r值分另q为0.453、0.525,均P＜0.05).结论 HO-1和UCB可能在脑出血后迟发性脑水肿的形成中起着重要作用.
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HO-1对肺气肿大鼠模型肺组织MCP-1和TGF-β1表达的影响
目的 观察血红素加氧酶1(HO-1)对肺气肿大鼠模型肺组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 Wistar雄性大雄18只,随机分为正常未暴露组(C)、烟雾暴露组(SM)、氯化血红素(Hemin)+烟雾暴露组(H),每组6只.利用烟雾暴露方法建立大鼠肺气肿模型,采用HE染色观察肺组织病理形态学变化,细胞学计数和分类BALF,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF、血清中MCP-1的浓度,免疫组织化学法测定肺组织内的HO-1、TGF-β1表达情况.结果 与SM组比较,H组病理改变轻,BALF中白细胞总数、巨噬细胞(AM)、中性粒细胞数下降,肺组织HO-1的表达明显升高,肺组织TGF-β1的表达及BALF中MCP-1的浓度明显下降.结论 MCP-1和TGF-β1与COPD的发病密切相关,HO-1的早期干预可抑制AM、中性粒细胞、MCP-1、TGF-β1表达,从而减轻了肺组织及气道炎症.
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菩人丹对糖尿病大鼠视网膜HO-1表达的作用
目的:探讨菩人丹(PRD)对糖尿病大鼠视网膜血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响.方法:36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和PRD治疗组,每组12只.糖尿病模型组、PRD治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射的方法建立2型糖尿病大鼠模型,模型成功建立后,PRD治疗组大鼠给予PRD(1.8g/kg/d)灌胃3个月.分别采用Westem blot法和RT-PCR法检测大鼠视网膜HO-1蛋白和mRNA的表达.结果:模型组大鼠视网膜HO-1蛋白和mRNA的表达明显高于正常对照组大鼠(P＜0.01),PRD治疗组大鼠视网膜HO-1蛋白和mRNA的表达明显高于模型组大鼠(P＜0.01).结论:PRD可通过上调HO-1的表达减轻糖尿病时视网膜氧化应激损伤,发挥对糖尿病视网膜病变的保护作用.
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Hemin诱导大鼠肝脏HO-1表达对非酒精性脂肪性肝炎的保护作用
目的 观察氯化血红素(hemin)对大鼠肝脏血红素加氧酶1(HO-1)表达的诱导作用,并探讨HO-1对大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的保护作用. 方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组8只.对照组给予正常饮食,模型组及干预组均给予高脂饮食,共8周.之后对照组继续正常饮食喂养,模型组高脂饮食喂养,干预组给予高脂饮食及每日hemin 15 mg/kg腹腔注射,共10 d.第10天处死大鼠,观察肝脏组织形态学,检测各组血清丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,Western blot检测各组肝脏组织HO-1的表达. 结果 模型组MDA、AST、ALT较对照组显著升高(P＜0.01),干预组MDA、AST、ALT较模型组显著降低(P＜0.01)；模型组GSH较对照组显著降低(P＜0.01),干预组GSH较模型组显著升高(P＜0.01)；hemin干预组肝细胞肿胀、炎细胞浸润等形态学改变较模型组明显改善.Western blot结果显示:hemin干预组HO-1的表达明显高于模型组与对照组. 结论 Hemin能够诱导大鼠肝脏组织HO-1表达的增加.通过增加HO-1的表达能够减轻大鼠肝脏氧化应激损伤,改善肝脏组织学及肝功能情况,对高脂饮食引起的NASH起到保护作用.
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黄芩苷对大鼠重症急性胰腺炎肾损伤保护作用的研究
目的:探讨黄芩苷对大鼠重症急性胰腺炎相关性肾损伤的保护作用及其机制.方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、重症急性胰腺炎相关性肾损伤组(M组)和黄芩苷治疗组(T组),各20只.用4％牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射方法建立大鼠重症急性胰腺炎模型.造模成功后,T组经尾静脉持续(2 mL/h)注入5％黄芩苷0.2 mL/100 g,而SO组和M组予等量生理盐水.采用自动生化仪检测血清淀粉酶(AMY)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)水平,Western blotting法检测肾组织核因子相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1,HO-1)蛋白表达.结果:与SO组比较,M组的血清AMY、BUN、Cr的表达均明显升高,肾组织Nrf2、SOD、HO-1蛋白表达均的显著升高.与M组比较,T组的血清AMY、BUN、Cr的表达均明显下降,肾组织Nrf2、SOD、HO-1蛋白表达均明显降低.结论:黄芩苷对重症急性胰腺相关性肾损伤有良好保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2,上调SOD、HO-1蛋白的表达有关.
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血红素加氧酶1在间充质干细胞上调哮喘患者外周血调节性T细胞中的作用
背景:上调CD4+CD25+CD127low/-调节性T 细胞是目前治疗哮喘的新靶点.骨髓间充质干细胞在体外可上调正常人外周血的调节性T 细胞,但机制尚未明确.目的:观察血红素加氧酶1 对间充质干细胞上调哮喘患者外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T 细胞的影响.方法:分别加入0,15,30,45,60 μmol/L 氯化高铁血红素和0,5,10,15,20 μmol/L 锌-原卟啉对骨髓间充质干细胞进行预处理,荧光定量PCR检测各组间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA 的表达量.密度梯度离心法分离哮喘急性发作期患者和健康对照者的外周血单个核细胞,分别与经氯化高铁血红素预处理、经锌-原卟啉预处理、不经预处理的间充质干细胞共孵育,加入植物血凝素反应72 h,流式细胞仪检测各组CD4+CD25+CD127low/-调节性T 细胞占CD4+T 细胞的比例.结果与结论:人骨髓间充质干细胞中有血红素加氧酶1 表达,其表达在体外可被诱导和抑制.间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA 的表达量随氯化高铁血红素浓度增加而增加(P < 0.05),随锌-原卟啉浓度增加而减少(P < 0.05),具有剂量依赖性.间充质干细胞在体外可提高哮喘患者和健康对照者CD4+CD25+CD127low/-调节性T 细胞的水平(P < 0.01),诱导间充质干细胞中血红素加氧酶1 的表达可使共孵育后CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞水平提高(P < 0.01),抑制间充质干细胞中血红素加氧酶1 的表达可使共孵育后CD4+CD25+CD127low/-调节性T 细胞的水平降低(P < 0.01),但仍高于对照组(P <0.01).提示骨髓间充质干细胞部分通过血红素加氧酶1 上调哮喘患者外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T 细胞.
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姜黄素调控大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
背景:姜黄素能明显降低破骨细胞的骨重吸收,诱导破骨细胞凋亡,抑制破骨细胞形成.目的:观察不同浓度姜黄素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.方法:采用贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代后采用成骨培养基进行成骨诱导,在诱导前3 d于诱导培养基中分别加入0(对照),10,15 μmol/L姜黄素.结果与结论:接种培养7 d,倒置显微镜下可见分散的骨髓间充质干细胞小集落,集落细胞呈放射状生长.随培养时间延长,细胞集落增大,细胞形态为长梭形.加入成骨培养基7 d后细胞形态逐渐由长梭形变为多角形,随成骨诱导时间延长形态变化更加明显.加入不同浓度姜黄素后骨髓间充质干细胞增殖无变化.姜黄素呈剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性及Runx-2、血红素单加氧酶1的表达.提示姜黄素能有效促进大鼠骨髓间充质干细胞早期成骨分化,其机制可能与提高干细胞血红素单加氧酶1的表达有关.
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血红素氧合酶系统对一氧化碳中毒后体外培养少突胶质细胞 Nogo-A的影响
背景：鉴于Nogo-A蛋白及其受体NgR分别表达于中枢神经系统的少突胶质细胞与神经元，而一氧化碳中毒迟发性脑病患者颅脑影像学上白质脱髓鞘突出，推测Nogo-A蛋白及NgR系统参与急性一氧化碳中毒脑损害，可能与一氧化碳中毒迟发性脑病关系密切。内源性一氧化碳(CO)是机体重要的气体信使分子之一，主要是由血红素氧合酶代谢产生的，其对Nogo-A体系的影响目前亦未见报道。目的：采用外源性CO处理体外培养少突胶质细胞，并用锌原卟啉9抑制血红素氧合酶系统活性，观察少突胶质细胞Nogo-A在mRNA及蛋白质水平的表达情况。方法：将体外培养的少突胶质细胞分为对照组、CO组和锌原卟啉9组。CO组和锌原卟啉9组细胞置于含体积分数1%CO的密封室内培养。锌原卟啉9组细胞在CO处理前，预先在培养液中加入10μmol/L锌原卟啉9。首先比较培养6，24和48 h时细胞中Nogo-A mRNA和蛋白的表达水平，检测表达水平高时CO组和锌原卟啉9组细胞中Nogo-A mRNA和蛋白表达水平的差异。结果与结论：CO组细胞中Nogo-A mRNA和蛋白的表达水平均高于对照组，且都在培养24 h时表达水平高。培养24 h时锌原卟啉9组细胞中Nogo-A mRNA和蛋白表达水平均高于CO组。提示排除在体情况中一氧化碳中毒所致的缺氧的影响，单纯外源性CO可诱导体外培养少突胶质细胞Nogo-A mRNA及蛋白表达水平增加；血红素氧合酶系统可抑制Nogo-A mRNA及蛋白的表达水平。
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人血红素加氧酶1过表达大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力
背景:骨髓间充质干细胞移植后在宿主恶劣的缺血缺氧微环境中生存率过低,限制了其治疗急性心肌梗死的疗效.目的:探讨人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力.方法:人血红素加氧酶1重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,Western blot法确定人血红素加氧酶1蛋白表达的佳时间;以缺氧无血清条件模拟体内缺血缺氧微环境培养人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞,采用CCK-8试剂盒和锥虫蓝染色法检测缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞存活率,流式细胞术检测缺血缺氧培养24 h的细胞凋亡情况.结果与结论:①在转染后第4天人血红素加氧酶1蛋白表达量多;②锥虫蓝染色法和CCK-8法检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞生存率均高于对照组(P＜0.05);③流式细胞术检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养24 h的生存率高于对照组(P＜0.05);④结果表明,人血红素加氧酶1修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力明显增强.
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丹参水溶性提取物上调血红素加氧酶1表达对H9C2心肌细胞的保护
背景:心肌缺血再灌注损伤的发病与氧化应激损伤有关.既往研究显示丹参具有改善急性梗死心肌细胞凋亡的作用.目的:探讨血红素加氧酶1介导丹参水溶性提取物对H9C2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用.方法:以H9C2心肌细胞为研究对象,实验分为4组,分别为对照组、模型组、钴原卟啉组和丹参组;用300μmol/L H2O2处理心肌细胞24 h建立心肌细胞氧化损伤模型;在建立心肌细胞氧化损伤模型后,用丹参水溶性提取物和钴原卟啉干预氧化损伤的心肌细胞.对照组不做任何处理.结果与结论:与对照组相比,模型组细胞上清液中肌酸激酶和乳酸脱氢酶含量升高,细胞裂解液中丙二醛含量升高,超氧化物歧化酶含量下降,细胞中血红素加氧酶1和核转录因子E2相关因子2表达增加;与模型组相比,丹参组和钴原卟啉组上清液中肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛的含量降低,超氧化物歧化酶含量上升,细胞中血红素加氧酶1和核转录因子E2相关因子2表达明显升高.提示丹参水溶性提取物能够通过激活血红素加氧酶1蛋白的表达,对心肌细胞氧化应激损伤起保护作用.
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远期缺血预适应激活热休克蛋白27、促红细胞生成素、血红素加氧酶1对肾脏缺血再灌注损伤的影响
背景:缺血再灌注损伤是临床导致急性肾衰竭等其他疾病的重要原因,其机制为多因素、多途径的复杂的病理过程.目的:观察肾脏进行预处理后激活热休克蛋白、促红细胞生成素和血红素加氧酶1对肾脏缺血再灌注损伤的影响.方法:雄性C57BL/6小鼠90只随机分成3组.缺血再灌注组为右肾切除,左肾缺血25 min再灌注24 h;预适应组为双侧肾脏缺血20 min再灌注8 d后再进行缺血再灌注.假手术组开腹游离肾蒂.结果与结论:血清肌酐和尿素氮检测预适应组和假手术组明显低于缺血再灌注组(P < 0.01);MPO染色发现缺血再灌注组大量中性粒细胞浸润(P < 0.01);PAS染色发现预适应组肾组织病理情况轻于缺血再灌注组(P < 0.05);TUNEL染色分析结果表明预适应组和假手术组细胞凋亡数明显少于缺血再灌注组(P < 0.01);预适应组热休克蛋白27 mRNA表达明显高于缺血再灌注和假手术组(P < 0.05),热休克蛋白27 mRNA于第8天时强,促红细胞生成素、血红素加氧酶1 mRNA在24~ 48 h达到峰值A,然后逐渐下降,第8天后达到峰值B,B>A,并且高于假手术组(P < 0.01).提示远期缺血预适应激活热休克蛋白27、促红细胞生成素、血红素加氧酶1,能减少炎症因子浸润、促进肾小管细胞修复和抑制细胞凋亡从而参与肾脏内源性保护机制.
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血红素加氧酶1分子克隆及表达载体的构建
背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血-再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点.目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体.设计、时间及地点:实验于2008-03/06在苏州大学生物技术研究所完成.材料:成年雄件SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMDl8-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存.方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录一聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMDl8.T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证.测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal-Ⅰ和BamH-Ⅰ同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4 DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体.主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2.EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体.结果;①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致.②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中.结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体.
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活血化瘀法对高血压脑出血患者血清GFAP、S100β蛋白、血红素加氧酶1及非结合胆红素影响研究
目的:探究活血化瘀法对高血压脑出血患者血清GFAP、S100β蛋白、血红素加氧酶1及非结合胆红素影响.方法:收集我院高血压脑出血患者117例,按照就诊先后顺序分为对照组和治疗组,对照组58例实施吸氧、降颅内压、维持水电解质平衡以及抗生素等常规对症治疗,治疗组59例在此基础上应用活血化瘀法方案,即静脉点滴丹参注射液,治疗结束后对比分析两组患者临床疗效、血清GFAP、S100β蛋白、血红素加氧酶1及非结合胆红素水平.结果:治疗后,与对照组相比,治疗组患者的总有效率较高(P＜0.05),血清降钙素原水平较低(P＜0.05),治疗组患者的不良反应发生率较低(P＜0.05);血清GFAP水平较低(P＜0.05),血清S100 β蛋白水平较低(P＜0.05);血红素加氧酶1水平较低(P＜0.05);非结合胆红素水平较低(P＜0.05).结论:活血化瘀法通过降低高血压脑出血患者血清GFAP、S100β蛋白、血红素加氧酶1及非结合胆红素水平,改善脑部微环境,抑制神经功能损伤,缓解脑损伤,预防疾病复发,临床疗效显著,适宜推广应用.
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苦瓜总皂苷对2型糖尿病大鼠心脏组织中MMP-9和HO-1表达影响
目的:探讨苦瓜总皂苷对2型糖尿病大鼠心肌组织中血红素加氧酶1(Heme Oxygenase1,HO-1)和基质金属蛋白酶-9(Matrix MetalloProtein-9,MMP-9)表达的影响.方法:将60只健康雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组以及苦瓜总皂苷治疗组,模型组和苦瓜总皂苷治疗组给予高脂饮食4周,腹腔一次性注射STZ 30 mg建立2型糖尿病大鼠模型,造模成功后,治疗组给予苦瓜总皂苷(20 mg/kg)灌胃治疗,其它两组给予生理盐水灌胃,分别于治疗4周和8周后处死大鼠各半,检测血糖、心功能以及心肌组织HO-1和MMP-9的表达.结果:与正常对照组相比,模型组血糖,心功能CK、CK-MB、LDH和HBDH明显升高(P＜0.05),治疗4周后均明显降低(P＜0.05),治疗8周后进一步降低.心肌组织HO-1和MMP-9免疫组化、Western以及RT-PCR可见,与正常组相比糖尿病组HO-1表达明显下降(P＜0.05),MMP-9明显升高(P＜0.05);治疗后HO-1表达明显增加(P＜0.05),MMP-9表达明显减少(P＜0.05).结论:苦瓜总皂苷对大鼠心肌组织中MMP-9和HO-1有明显的调控作用.
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HO-1在大鼠异位心脏移植急性排斥期的表达研究
目的:观察血红素加氧酶1(HO-1)mRNA在大鼠异位心脏移植急性排斥期中的表达及意义.方法:建立大鼠腹部心脏异位移植模型,分对照组及环孢菌素(CSA)组,每组32只.分别灌胃给予生理盐水及CsA干预,每组8只用于观察移植心存活时间,术后1,3,5,7 d各6只动态切取标本,常规组织切片监测排斥反应,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,RT-PCR检测移植心肌组织HO-1 mRNA的表达.结果:CSA组移植心存活时间(15.4±5.1)d长于对照组(7.6±1.5)d,P＜0.01;CSA组各采样时段的心肌凋亡指数明显低于对照组,而HO-1表达强度均强于对照组.结论:移植心脏中HO-1表达水平的高低与心脏移植免疫排斥反应的轻重存在一定的相关性,CSA干预增强HO-1表达,减轻免疫排斥反应及降低凋亡指数.提示HO-1在心脏移植术后应激及急性免疫排斥反应抑制中起着重要的作用.
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Alzheimer病患者外周血HO-1基因表达水平的改变
目的建立荧光定量PCR方法检测Alzheimer病(AD)患者外周血中血红素加氧酶1(HO-1)基因的表达水平,并探讨其表达水平的改变与AD发病的关系.方法在HO-1的基因高保守区设计并合成特异性引物和荧光标记探针.将PCR扩增目的片段用AT克隆的方法克隆入T载体,重组质粒经筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的制备和样品检测,并用该方法检测30例AD患者和23例正常老年人对照组外周血HO-1基因mRNA水平.结果应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系.AD组HO-1基因平均表达水平(7.04×105±5.96×105)copies/μg RNA高于对照组(1.62×105±3.31×105)copies/μg RNA(P＜0.001).结论建立了荧光定量PCR方法用于检测AD患者外周血HO-1基因的表达水平,具有较好的检测灵敏度和重复性.HO-1在AD患者外周血中的表达有所增加.
关键词： 荧光定量PCR Alzheimer病 血红素加氧酶1 基因表达 -
血红素加氧酶1在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠肝脏组织和胎鼠脑组织中的表达及其意义
目的:建立肝内妊娠期胆汁淤积症(ICP)大鼠模型,检测血红素加氧酶1(HO-1)在ICP孕鼠肝脏组织及胎鼠脑组织中的表达,探讨ICP的发病机制.方法:40只孕鼠随机分为实验组和对照组,每组20只.从孕15 d起,实验组孕鼠每天后肢内侧皮下注射孕酮和雌二醇,对照组孕鼠注射精制植物油.至孕21 d断头取血检测生化指标；取出母鼠肝脏及胎鼠脑组织,HE染色观察其病理组织学变化；免疫组织化学和图像分析法检测脑海马CA1区HO-1表达水平.结果:与对照组比较,实验组孕鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氮酸氨基转移酶(ALT)和总胆汁酸(TBA)水平均明显升高(P＜0.01).病理组织学表现,实验组孕鼠部分肝细胞有颗粒变性和空泡变性,肝小叶结构正常；胎鼠脑组织疏松,空泡样变性明显,部分细胞溶解,甚至消失.对照组孕鼠肝脏和胎鼠脑组织无明显病理改变.免疫组织化学及图像分析结果,与对照组比较,实验组胎鼠脑组织HO-1免疫着色强度减弱,HO-1表达水平明显下降(P＜0.05).结论:ICP胎鼠脑组织中HO-1表达下降,可能与ICP胎儿窘迫的不良结局有关.
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抑制HO－1表达对GLU和AGEs刺激下THP－1细胞氧化应激的影响研究
目的：探讨抑制血红素加氧酶1（HO－1）表达对高糖（GLU）和糖基化终产物（AGEs）刺激下人单核细胞株（THP－1）氧化应激的影响。方法将THP－1细胞分为三组培养，包括对照组、GLU ＋AGEs 组（含15 mmol／L的GLU和100 g／mL的AGEs的培养液）、 ZnPP（锌原卟啉）＋GLU＋AGEs组（先予20 mol／L ZnPP预处理30 min后再以15 mmol／L的GLU和100 g／mL的AGEs刺激），检测各组肿瘤坏死因子α（ TNF－α）、丙二醛（MDA）和细胞活性氧（ ROS）水平以及HO－1 mRNA和蛋白表达。结果 GLU＋AGEs组ROS、MDA和TNF－α水平分别为（101．28±8．67） MFI、（3．17±0．58） nmol／mL和（40．28±10．67） pg／mL，明显高于对照组（P＜0．05）；ZnPP＋GLU＋AGEs组ROS、MDA和TNF－α水平分别为（122．47±9．11）MFI、（3．84±0．78）nmol／mL和（132．27±11．09） pg／mL，明显高于GLU ＋AGEs 组和对照组（P ＜0．05）；GLU＋AGEs组和ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1 mRNA表达量明显高于对照组（P＜0．05），其中ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1 mRNA表达量低于GLU＋AGEs组（P＜0．05）；GLU＋AGEs组和ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1蛋白表达量明显高于对照组（ P＜0．05），其中ZnPP ＋GLU＋AGEs组 HO－1蛋白表达量低于GLU＋AGEs组（ P＜0．05）。结论高糖和AGEs可引起THP－1细胞氧化损伤和HO－1表达增高，而抑制HO－1表达可进一步加剧高糖和AGEs引起的细胞氧化损伤。
