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回阳生肌方不同拆方对巨噬细胞表型转化的调节作用
目的 观察回阳生肌方的拆方(益气温阳方、活血通络方)对巨噬细胞表型转化的影响.方法 人单核细胞株(THP-1)细胞用佛波醇酯类多克隆刺激剂(PMA)刺激成巨噬细胞后,加入脂多糖(LPS)、γ-干扰素(INF-γ)刺激48 h,转化为M1型巨噬细胞.洛伐他汀(40.50 mg/L)作为阳性对照药物;采用CCK-8方法观察益气温阳方、活血通络方对巨噬细胞活性的影响;以中性红法检测其对巨噬细胞吞噬功能的影响.M1型巨噬细胞加入洛伐他汀、益气温阳方、活血通络方24 h后, PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA、精氨酸酶1(Arg-1)mRNA的表达;CBA法检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-10(IL-10)和生长因子(VEGF)的含量;ELISA法检测上清液中转化生长因子β(TGF-β)的含量.结果 益气温阳方在浓度4、0.8、0.16 mg/L时、活血通络方在浓度32、6.4、1.28 mg/L时对巨噬细胞增殖无影响,但可促进巨噬细胞对中性红的吞噬,分别作为益气温阳方、活血通络方的高、中、低浓度.加入LPS、INF-γ后,M1型巨噬细胞标志物iNOS mRNA显著升高,而加入洛伐他汀、益气温阳方及活血通络方后显著降低(P<0.01);M2型巨噬细胞标志物Arg-1 mRNA表达相对于正常组显著降低,而洛伐他汀、益气温阳方和活血通络方都明显促进Arg-1 mRNA表达(P < 0.01),但益气温阳方、活血通络方与洛伐他汀相比,Arg-1 mRNA表达显著降低.以上药物作用M1型巨噬细胞细胞24 h后,TNF-α、IL-6、IL-1含量显著降低,VEGF、TGF-β含量显著升高,益气温阳方高浓度使IL-10含量显著升高(P<0.05).与洛伐他汀相比,活血通络方和益气温阳方高浓度组VEGF、TGF-β差异有统计学意义(P< 0.05).结论 益气温阳方和活血通络方均在一定程度上抑制M1型巨噬细胞标志物iNOS mRNA表达和诱导M2型巨噬细胞标志物Arg-1 mRNA的表达,并且可抑制M1型巨噬细胞因子的分泌,促进M2型巨噬细胞因子的分泌.
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抑制HO－1表达对GLU和AGEs刺激下THP－1细胞氧化应激的影响研究
目的：探讨抑制血红素加氧酶1（HO－1）表达对高糖（GLU）和糖基化终产物（AGEs）刺激下人单核细胞株（THP－1）氧化应激的影响。方法将THP－1细胞分为三组培养，包括对照组、GLU ＋AGEs 组（含15 mmol／L的GLU和100 g／mL的AGEs的培养液）、 ZnPP（锌原卟啉）＋GLU＋AGEs组（先予20 mol／L ZnPP预处理30 min后再以15 mmol／L的GLU和100 g／mL的AGEs刺激），检测各组肿瘤坏死因子α（ TNF－α）、丙二醛（MDA）和细胞活性氧（ ROS）水平以及HO－1 mRNA和蛋白表达。结果 GLU＋AGEs组ROS、MDA和TNF－α水平分别为（101．28±8．67） MFI、（3．17±0．58） nmol／mL和（40．28±10．67） pg／mL，明显高于对照组（P＜0．05）；ZnPP＋GLU＋AGEs组ROS、MDA和TNF－α水平分别为（122．47±9．11）MFI、（3．84±0．78）nmol／mL和（132．27±11．09） pg／mL，明显高于GLU ＋AGEs 组和对照组（P ＜0．05）；GLU＋AGEs组和ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1 mRNA表达量明显高于对照组（P＜0．05），其中ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1 mRNA表达量低于GLU＋AGEs组（P＜0．05）；GLU＋AGEs组和ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1蛋白表达量明显高于对照组（ P＜0．05），其中ZnPP ＋GLU＋AGEs组 HO－1蛋白表达量低于GLU＋AGEs组（ P＜0．05）。结论高糖和AGEs可引起THP－1细胞氧化损伤和HO－1表达增高，而抑制HO－1表达可进一步加剧高糖和AGEs引起的细胞氧化损伤。
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普罗布考对实验性大鼠急性痛风性关节炎的防治
目的 探讨普罗布考防治痛风性关节炎的可行性及机制.方法 于大鼠单侧踝关节腔内注射尿酸钠晶体建立急性痛风性关节炎模型,观察普罗布考干预后关节炎症、肿胀指数及关节液白细胞计数和白细胞介素1β的变化.用尿酸盐晶体刺激人单核细胞,普罗布考干预18 h后检测培养液中白细胞介素1β的浓度.结果 普罗布考各剂量组关节炎症肿胀指教下降幅度由低剂量向高剂量依次增加,与模型组比较,72 h时中高剂量组下降程度较明显(P<0.05),关节液白细胞计数和白细胞介素1β的含量均有不同程度的下降.普罗布考中高剂量组关节液白细胞计数较模型组下降明显(P<0.01,P<0.001),普罗布考高剂量组白细胞介素1β较模型组下降明显(P<0.05).普罗布考各剂量组对单核细胞分泌白细胞介素1β无抑制作用.结论 中高剂量的普罗布考可以有效的控制大鼠急性痛风性关节炎的发作,其疗效具有一定的剂量依赖性,但其不是通过直接抑制单核细胞摄取尿酸盐晶体分泌白细胞介素1β来起作用.
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KCa3．1在软脂酸诱导的单核细胞迁移中的作用及其调控机制
目的：观察中电导钙激活钾离子通道（intermediate－conductance Ca2＋－activated K ＋channel， KCa3．1）在软脂酸（palmitic acid， PA）诱导的单核细胞跨内皮迁移中的作用及其调控机制。方法：分离2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus， T2DM）患者外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells ， PBMCs）并培养人单核细胞株（THP－1 cells），以PA刺激，通过Western blotting、RT－PCR、ELISA及细胞迁移实验观察PA对PBMCs及THP－1细胞跨内皮迁移的影响及其与KCa3．1的关系、KCa3．1与MCP－1之间的关系并探讨其信号转导通路。结果：100μmol／L PA上调体重指数（body mass index， BMI）位于20～27．9 kg／m2的T2DM患者PBMCs KCa3．1的表达并促进其跨内皮迁移，对BMI≥28 kg／m2的T2DM患者PBMCs无影响；KCa3．1特异性阻滞剂TRAM－34、NF－κB阻滞剂PDTC（100μmol／L）和Bay11－7082（10μmol／L）抑制PA诱导的BMI位于20～27．9 kg／m2的T2DM患者PBMCs跨内皮迁移；TRAM－34和KCa3．1特异性siRNA显著减少PA（200μmol／L）诱导的THP－1细胞跨内皮迁移及THP－1细胞中MCP－1的分泌和表达，anti－TLR2／4（4 mg／L）、p38MAPK抑制剂SB203580（10μmol／L）及 SB202190（10μmol／L）、PDTC（100μmol／L）和Bay11－7082（10μmol／L）显著减少PA诱导的THP－1细胞中KCa 3．1和MCP－1的表达。结论：PA通过TLR2／4－p38MAPK－NF－κB通路上调KCa3．1促进MCP－1的表达，进而诱导单核细胞的跨内皮迁移。
