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百日咳丝状血凝素酶联免疫检测法的建立
目的 建立百日咳组分疫苗丝状血凝素(FHA)抗原含量监控的ELISA检测法.方法 制备的多克隆抗血清,经辛酸硫酸铵法纯化抗体,用过碘酸钠氧化法辣根过氧化物酶标记,以棋盘滴定法确定佳包被抗体及酶标抗体的浓度配伍,建立了双抗体夹心ELISA检测法.结果 对双抗体夹心ELISA法的特异性、佳线性范围、检测限度、精密度、准确度、测定限量、适用性的一系列验证试验表明,该方法与百日咳组分疫苗中PT和Prn无明显交叉反应,特异性较好.在0至20 ng/mL测量区间有佳线性,相关系数大于0.99;经实验内12次及不同试验间3次测定16、8、4 ng/mL中的FHA含量,变异系数在0.2％～11.4％间,回收率在96.9％ ～ 114.5％间,精密度及准确度验证均符合常规质控要求,因此测定限量为4 ng/mL.结论 该方法能有效检测出百日咳杆菌培养上清中的FHA含量,可用于百日咳组分疫苗生产过程的中间品质量控制.
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抗牛血清IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定
用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用含山羊血清的培养基培养细胞,上清用间接ELISA法筛选.获得4株能稳定分泌抗牛血清IgG的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为1G5、2A8、3F5、4C5.其中2A8为IgG2a,其余3株为IgG1；腹水单抗的ELISA滴度均超过10-5;除3F5株单抗与山羊血清有交叉反应外,1G5、2A8、4C5株与人、马、猪、羊、兔、豚鼠等血清均不发生交叉反应；4株单抗与制备病毒性疫苗的基质液呈阴性反应；4株单抗识别分子量为160kD的牛血清lgG的两个不同抗原表位；4株单抗相对亲和力大小依次为4C5 ＞2A8 ＞1G5 ＞3F5,相对敏感度依次为2A8 ＞4C5 ＞3F5 ＞1G5;4株杂交瘤细胞株的染色体计数均大于90条,连续培养三个月以及冷冻保存半年后复苏,细胞生长良好.使用这些单抗建立的双抗体夹心法检测生物制品中的残留牛血清IgG.
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金霉素单克隆抗体的制备及检测方法的建立
采用羰基二咪唑法,将半抗原金霉素(AM)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备金霉素免疫抗原AM-BSA和检测抗原AM-OVA,通过紫外光谱扫描检测偶联产物.采用细胞杂交瘤技术,制备抗金霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了金霉素竞争ELISA检测方法,其灵敏度达到50ng/ml,且呈现良好的线性关系(r=0.9812),并且与其他抗生素无交叉反应.
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抗汉坦病毒等三种单克隆抗体细胞株的建立及分析应用
以纯化的病毒抗原加完全福氏佐剂,免疫BALB/c小鼠,再利用杂交瘤技术建立针对汉坦病毒、狂犬病毒及乙型脑炎病毒的单克隆抗体(McAb)细胞株,制备并提纯标记McAb,应用于各种实验和检测工作.结果获得了6株分泌抗汉坦病毒McAb杂交瘤细胞株、6株分泌抗狂犬病毒McAb杂交瘤细胞株、2株分泌抗乙型脑炎病毒McAb杂交瘤细胞株,共14株,并对它们的特性进行了分析.各McAb效价不尽相同,有的高达10-7,有的则不足10-3.各McAb亚型以IgG型为主,少数为IgM型;轻链以κ型为主,个别为λ型或阴性.McAb与纯化的病毒抗原有明显的特异性吸附(P＜0.01).有的McAb有相同的作用位点,有的McAb则没有,但与其它McAb有交叉反应.通过对McAb进行提纯和标记,建立了双抗体夹心ELISA法,用于病毒抗原的检测.实验表明获得的McAb有较好的生物学特性,可与相应的病毒抗原特异性结合,用于免疫学检测及其它多种用途.
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牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定
用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8.鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;Western Blotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3＞2A5＞3G6＞4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定.
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百日咳毒素单克隆抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立
目的 制备百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA用于检测PT的含量.方法 采用杂交瘤技术制备PT的单抗,并对其进行鉴定；优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证；应用建立的方法检测武汉生物制品研究所有限责任公司(简称武汉公司)73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT含量.结果 获得4株稳定的抗PT杂交瘤细胞株,抗体亚型均为IgG2a,抗体腹水ELISA效价达1∶106以上,均能与PT发生特异反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉和破伤风类毒素未发生交叉反应；建立的双抗体夹心ELISA的线性检测范围在2.50～80.00 ng/mL之间,酶标板内和板间变异系数均小于10％；PT的高、中、低浓度的回收率分别为97.41％、106.60％和89.98％；73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT质量浓度在50.00 ～ 150.00 ng/mL之间波动,说明中间产物的批间一致性及稳定性趋势良好.结论 已成功制备了抗PT的单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测PT的双抗体夹心ELISA,可用于无细胞百日咳疫苗生产中PT的定量检测.
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深圳市南山区健康人群百日咳抗体水平及疫苗免疫成功率监测
目的：了解深圳市南山区健康人群百日咳免疫现状及疫苗免疫成功率。方法健康人群抗体水平监测按照＜1岁、1岁～、2岁～、3岁～、4岁～、5岁～、10岁～、15岁～、≥20岁共9个年龄组，每个年龄组随机抽取50～60人共508人进行观察，采用 ELISA 检测其百日咳抗体水平，免疫成功率监测选定监测对象为50人，同一对象于基础免疫前和完成基础免疫后1个月进行抗体水平检测。结果健康人群百日咳抗体阳性率为44．3％，抗体几何平均浓度（GMC）为21．69 U ／mL。免疫成功率的免疫前抗体检测结果为：阴性94．0％、临界4．0％、阳性2．0％，抗体GMC 为3．39 U ／mL；免疫后抗体检测结果：阴性38．0％、临界16．0％、阳性46．0％，抗体 GMC 为20．75 U ／mL。结论深圳市南山区健康人群百日咳抗体阳性率和免疫成功率均不高，提示要提高百日咳疫苗的免疫成功率和接种率，必要时进行加强免疫。
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庆大霉素单克隆抗体的制备及试剂盒的配制
目的 建立庆大霉素直接竞争酶联免疫吸附分析方法.方法 应用戊二醛法制备庆大霉素完全抗原,通过杂交瘤技术筛选分泌特异性庆大霉素抗体的杂交瘤细胞株,并建立庆大霉素竞争酶联免疫吸附分析检测方法.结果 获得3株能稳定分泌庆大霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了庆大霉素竞争酶联免疫吸附分析检测方法,该方法操作简单具有良好的线性、特异性和精密度；庆大霉素质量浓度在1.5625～50.0000 ng/mL范围内,呈现良好的线性,r2=0.9913,50％抑制浓度为(iC50)为7.37 ng/mL,检测限(LOD)为1.54 ng/mL,该试剂盒与链霉素等8种药物无交叉反应.结论 获得3株能稳定分泌庆大霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,研制的庆大霉素竞争ELISA检测试剂盒具有良好的线性、特异性和精密度.
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体外扩增法检测尿道炎患者尿液中沙眼衣原体DNA的研究
目的:采用聚合酶链反应技术(PCR)从尿道炎患者尿液中检测沙眼衣原体感染,并与细胞培养法及ELISA法相比较,以期建立灵敏特异、无创伤性沙眼衣原体DNA诊断技术.方法:收集患者就诊时初段尿,提取尿液沉渣DNA,PCR法检测沙眼衣原体核酸;尿道拭子标本作细胞分离培养(CC);取患者血清作ELISA检测抗体.结果:采用PCR从尿道炎患者尿液样本中检测到沙眼衣原体DNA,134份尿液样本,32份阳性,阳性率为23.9 %;尿道拭子标本,细胞培养阳性率为22.4 %(30/134);ELISA法检测血清阳性率为17.9 %(24/134).以细胞培养法结果为金标准,PCR的敏感度和特异度分别为100 %和98.0 %;ELISA法则为73.3 %和98.0 %.三种方法相比较,PCR法和CC法无显著性差异(P>0.05),两者与ELISA法均存在显著性差异(P<0.05).结论:以尿液为样本,采用PCR法检测尿道炎患者沙眼衣原体DNA是一种灵敏特异、无创伤性检测手段,值得推广使用.
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干扰素治疗轮状病毒肠炎168例临床疗效观察
轮状病毒(Rotavirus.RV)是引起婴幼儿腹泻的主要病原之一[1].我科于1998年10月-1999年2月应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测腹泻患儿粪便中的轮状病毒抗原(RV-Ag),阳性者进行跟踪检测,为了研究-干扰素治疗轮状病毒肠炎的效果,随机将轮状病毒肠炎患儿168例分组对照观察,现将结果报告如下:
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金标法快速检测HBsAg漏检原因分析
目的:观察金标法快速检测HBsAg产生漏检的原因.方法:将HBsAg金标法快速检测阴性的血液标本用ELISA法再次检测.结果:4 959份乙肝金标快检合格的血液,经HBsAg-ELISA法检测有22份确定为HBsAg阳性,漏检率为0.44%.将22份HBsAg阳性样本再次用乙肝金标试剂检测,其中有4份仍为阳性.结论:通过对金标法快速检测HBsAg产生漏检的原因分析,方法学的限制和人为因素是产生漏检的主要原因,经过试剂的选择和严格的人员培训可有效降低漏检.
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3种泌尿生殖道沙眼衣原体抗原检测方法的对比分析
目的 通过采用生殖道沙眼衣原体培养、胶体金法和酶联免疫吸附试验3种方法检测泌尿生殖道沙眼衣原体,探讨3种检测方法的特异性和敏感性以及在临床诊断中的价值.方法 在相同条件下使用3种方法对性病门诊就诊的285例宫颈或尿道分泌物标本进行检测.结果 285例标本经生殖道沙眼衣原体培养、胶体金法和酶联免疫吸附试验检测,阳性率分别22.81％、14.39％和22.11％;敏感性分别为100％、53.85％和92.31％,3种检测方法的敏感性比较差异有统计学意义(P＜0.05);特异性分别为100％、93.99％和97.33％,3种检测方法的特异性比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 沙眼衣原体实验室检测酶联免疫吸附试验方法较胶体金试验方法具有更高的敏感性,临床中检测沙眼衣原体应尽可能选择酶联免疫吸附试验方法.
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固原市健康人群麻疹抗体水平监测结果分析
目的 了解固原市健康人群麻疹抗体水平情况,为消除麻疹提供科学依据.方法 依据<固原市2010年健康人群麻疹等疫苗针对传染病血清学调查方案>中规定的方法,对固原市原州区、西吉县、隆德县、泾源县、彭阳县采集不同年龄段人群血清,应用酶联免疫吸附试验检测麻疹IgG抗体.结果 抗体总阳性率为96.0%,1~19岁年龄组麻疹IgG抗体阳性率100%,20岁以上年龄组麻疹IgG抗体阳性率81.7%~98.3%,其中＞35岁低,为81.7%;各年龄组人群麻疹抗体阳性率差异有统计学意义(χ2=18.96,P＜0.05).结论 提高常规免疫接种率、加强查漏补种工作、适时开展强化免疫,是控制和消灭麻疹的重要措施.
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10339例体检者丙型肝炎病毒检测结果分析
目的 了解普通人群丙型肝炎病毒( HCV) 的感染状况. 方法应用酶联免疫吸附试验对10339例体检人员血清进行HCV抗体检测.结果 抗-HCV阳性187例,阳性率为1.81 % .其中男、女性阳性率分别为3.05 %和1.17 % ; 2006-2009年丙肝抗体检测阳性率分别为1.85% 、2.02% 、1.68% 、1.79% .结论 我区普通人群HCV感染率低于全国平均水平,但全球丙肝感染情况已日趋严重,为防止疾病扩散,早发现、早治疗,将丙肝抗体检测纳入常规健康体检项目中具有十分重要的临床意义.
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银川某医院就诊人群血清乙肝病毒标志表达模式的探讨
目的探讨银川地区人群乙肝病毒(HBV)血清标志表达模式.方法采用ELASI法对日常工作中的3941份血清标本进行检测.为了表述方便,设定检测项目第1-5项的排列次序:(1)乙肝病毒表面抗原(HBsAg);(2)乙肝病毒表面抗体(HBsAb);(3)乙肝病毒e抗原(HBeAg);(4)乙肝病毒e抗体(HBeAb);(5)乙肝病毒核心抗体(HBcAb),并以出现阳性的序号为该模式代码.结果共17种模式,乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性组有8种模式,占33.88%;乙肝病毒表面抗体(HBsAb)阳性组有6种模式,占60.53%;乙肝病毒e抗原(HBeAg)阳性组有4种模式,占14.64%;乙肝病毒e抗体(HBeAb)阳性组有7种模式,占19.92%;乙肝病毒核心抗体(HBcAb)阳性组有10种模式,占65.48%.结论该样本人群乙肝病毒血清标志表达模式为17种.揭示了HBsAb、HBsAg和HBcAb组阳性占有较高的比例.
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健康人接种乙肝疫苗后血清及唾液抗-HBs结果分析
采用ELISA法，以MK352型酶标仪检测434例健康人接种乙肝疫苗后血清与唾液阳性率的结果，并对其进行统计学处理。结果 434例健康人接种乙肝疫苗后血清组与唾液组有非常显著性差异(P＜0.01)。提示，健康人接种乙肝疫苗后，血清出现抗-HBs的阳性率远大于唾液，因此，不宜用唾液取代血清。
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新疆天山北坡人群弓形虫病血清流行病学调查
目的 了解新疆天山北坡人群不同职业、不同族别的人群弓形虫病的感染情况,2003年结合"全国人体重要寄生虫病现况调查",抽取新疆天山北坡的昌吉市、奎屯垦区农场为调查目的 地.方法 按照"全国人体重要寄生虫病现况调查"实施方案的要求进行,试剂由国家"寄调办"提供,为珠海经济特区海泰生物制药有限公司生产的弓形虫IgG抗体酶免检测试剂,严格按照说明书要求进行检测.结果 检测1 387份血清,阳性83份,阳性率5.98%.感染率在性别分布,男性4.86%(25/514),女性感染率7.34%(58/790);感染率在职业分布上,农民7.06%(50/708);半农半牧5.77%(9/156);工人5.63%(13/231);学生3.03%(6/198);行政干部及其他5.32%(5/94);感染率在民族分布上,汉族5.01%(55/1 097);回族11.70%(20/171);维吾尔族10.71%(6/56);哈族1.85%(1/54);其他民族11.11%(1/9).感染率在年龄分布上,20岁以下年龄感染率3.65%(11/301),50～59岁感染率9.09%(15/165);有献血史感染率13.19%(12/91),无献血史感染率为5.87%(71/1210);养犬户感染率为5.99%(24/401);养猫户感染率为6.80%(7/103),未养户5.62%(53/943);有吃不洁食物(落地)史者感染率为8.93(10/112),无者为6.13%(73/1191).结论 弓形虫病属于机会性感染,当机体抵抗力下降时,容易被感染;具有不良卫生习惯者、家里养猫者都有比较高的感染率,因为他们的行为更加具有高危险性.
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结核抗体测定的临床诊断应用价值
目的抗结核抗体检测方法与其他检查方法比较,探讨抗体检测对结核病诊断的价值.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对380份血清(包括肺内、外)其中有结核组、非结核组进行结核抗体测定.结果两组之间有显著差异性(P<0.005),灵敏度为82.3%,特异度为96.2%.结论结核抗体测定有较高特异性和灵敏度,对结核病的诊断和与非结核病的鉴别诊断具有重要参考价值.通过结核抗体的检测,可为临床诊断和规律治疗提供更有价值的依据.
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胶体金免疫层析法与双单克隆抗体夹心ELISA检测鼠疫F1抗原的比较
目的 比较胶体金免疫层析法(GICA)和双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验(DMcAbS-ELISA)检测鼠疫F1抗原的敏感性和特异性.方法 用GICA试纸条和DMcAbS-ELISA平行检测308份强毒鼠疫耶尔森菌感染鼠脏器标本和327份对照鼠标本,用RIHA微量法同时检测作为参照.结果 327份对照鼠鼠疫细菌学检验及GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA的F1抗原检测均为阴性,GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA在108cfu/mL水平上未发现与近缘假结核耶尔森菌有交叉反应;308只感染鼠样本细菌培养阳性284只,24只样本未分离到鼠疫菌;F1抗原检测GICA阳性287份,DMcAbS-ELISA阳性280份,RIHA阳性276份,GICA阳性检出率高93.19%,与DMcAbS-ELISA和RIHA比较,差异均有统计学意义(χ2=5.14,9.09;P=0.016,0.001);GICA与DMcAbS-ELISA符合率97.73%(Kappa=0.845);GICA和DMcAbS-ELISA与RIHA符合率分别是96.43%和98.70%(Kappa=0.774,0.926);284份细菌堵养阳性鼠标本F1抗原检测GICA阳性率是98.59%,高于DMcAbS-ELISA和RIHA,差异有统计学意义(x2=4.17,5.14;P=0.03l,0.016);24份细菌培养阴性实验鼠标本F1抗原检测:GICA检出7份阳性,阳性率29.17%,DMcAbS-ELISA检出6份阳性,阳性率25%,RIHA检出3份阳性,阳性率12.5%,GICA高于DMcAbS-ELISA和RIHA,但差异无统计学意义(x2=2.25,0;P=0.125,1.000).结论 GICA检测鼠疫F1抗原敏感特异,快速简便,优于DMcAbS-ELISA和RIHA,是鼠疫快速诊断中有应用价值的检测技术.
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145例患儿血清中人类微小病毒B19-VP2-IgM的检测
目的: 探讨人类微小病毒B19(Human Parvovirus B19)在患儿中的感染情况.方法: 用ELISA法对145例患儿(大部分来自血液组)和48例健康儿童(来自儿保体检门诊,对照组)的血清标本进行了B19-VP2-IgM 检测.结果: B19-VP2-IgM 阳性检出率ITP和AA高,分别为44.4%(12/27)和40%(10/25),与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05),其它病组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论:儿童对B19有较高的感染率,尤其ITP和AA患儿与B19感染关系更为密切.
