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基层适宜的沙眼衣原体检验技术
沙眼衣原体是一类在细胞内寄生的微生物,引起的泌尿生殖道感染已成为常见的性传播疾病.它可引起男性尿道炎、附睾炎,女性宫颈炎、盆腔炎、宫内感染等多种疾病,尤其是在与淋球菌等合并感染时可加重疾病的发展并引起其它并发症.孕妇生殖道感染沙眼衣原体可导致新生儿眼炎和肺炎,在孕前优生健康检查项目中进行淋球菌及沙眼衣原体检查,对预防新生儿疾病具有重要的现实意义.由于沙眼衣原体感染者中,有50%的男性和70%~80%的女性常表现为无临床症状,所以其实验室检查具有重要作用[1].沙眼衣原体实验室检查方法主要分3大类:①细胞培养法,检测过程类似病毒分离培养;②分子生物学方法,如PCR测DNA;③抗原检测方法,如免疫层析法测抗原.
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博卡病毒的检测方法概述
自2005年博卡病毒发现以来,先后在呼吸道和肠道标本中检出博卡病毒1~4型.博卡病毒1主要与呼吸道感染相关,博卡病毒2~4型主要与肠道感染相关.博卡病毒感染具有典型的咳嗽、喘息、肺炎和腹泻等临床症状,然而由于博卡病毒缺乏合适的宿主细胞而难以培养限制其致病机理等相关研究.立体上皮细胞培养平台、反向遗传学和病毒宏基因组学作为新一代技术有望成为研究博卡病毒致病机理和发现新病毒的有力工具.本文针对博卡病毒已有的电镜、细胞培养、PCR和免疫学检测方法进行综述,以期为博卡病毒的深入研究提供方法参考.
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SARS-CoV感染猴模型病毒学研究
建立SARS-CoV病毒分离培养方法,确定SARS-CoV病毒感染动物后在不同时间和不同组织病毒的复制和存活时间,并比较中国恒河猴和食蟹猴对病毒的敏感性,筛选出对SARS冠状病毒敏感的动物,完善SARS冠状病毒感染猴模型的病毒学指标.方法:SARS-CoV经鼻腔接种实验用猴,定期采集动物的鼻咽拭子、血浆和组织标本进行病毒分离培养,分离出来的病毒用免疫荧光方法和中和试验等方法进行测定.结果:SARS冠状病毒均可感染恒河猴和食蟹猴,在鼻咽拭子、血浆和组织中可以分离到病毒.结论恒河猴和食蟹猴均可作为SARS感染动物模型,而病毒分离培养可以作为感染模型的重要指标.
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3种流感病毒检测方法的比较
目的 对病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法3种检测流感病毒的方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据.方法 同时采用病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法对2014年10月~ 2015年3月牡丹江市流感监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子样本进行检测,比较检测结果.结果 实时荧光PCR法的流感病毒核酸检测阳性率为15.52%,其中169份为季节性H3N2流感病毒,73份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为6.29%,分离出63株季节性H3N2流感病毒,35株B型Yamagata株;鸡胚分离培养法检出率为0.64%.3种方法中,实时荧光PCR法的阳性率高,病毒分离培养法次之,鸡胚分离培养法阳性率低.结论 实时荧光PCR法比病毒分离培养法和鸡胚培养法灵敏快捷、特异性强、敏感度高,适用于流感病毒的快速检测.
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实时荧光PCR法和病毒分离培养法在手足口病病毒检测中的应用分析
目的 筛选快速准确的检测方法,为手足口病监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据.方法 采用病毒分离培养法和实时荧光PCR检测法对2014年牡丹江市手足口病监测哨点医院采集的手足口样病例标本进行检测,比较检测结果.结果 2014年采集的206份标本中,实时荧光PCR法检测肠道病毒EV 71型42例、Cox A16型9例、肠道病毒通用型37例,阴性118例.病毒分离培养法检测肠道病毒EV 71型4例、Cox A16型4例、肠道病毒通用型6例.实时荧光PCR法、病毒分离培养法检测阳性率分别为42.72%和6.80%;与实时荧光PCR法相比,病毒分离培养法灵敏度、特异度分别为15.91%、100.00%.结论 实时荧光PCR法比病毒分离培养法更灵敏快捷、特异性强、敏感度高等,适用于手足口病病原体的检测.
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抗人类免疫缺陷病毒阳性患者24例检测结果分析
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus HIV)感染可通过检测HIV特异性抗体、抗原核酸或病毒分离培养加以确定.常规使用的标准诊断项目是血清学抗体检测.HIV抗体检测包括筛查试验、复检试验和确认试验3个部分.我院属肿瘤专科医院,来我院就诊者多以卡波肉瘤、淋巴瘤、颈部肿物等为症状.2004年4月至2012年4月,我院HIV抗体初筛实验室共检测221 130例次,送山西省疾病预防控制中心(CDC)确认27例,其中经CDC确认为阳性的24例,现将检测结果分析报告如下.
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唾液中人类疱疹病毒7型的分离与培养
目的:了解人群中人类疱疹病毒7型(HHV-7)的感染情况, 并对HHV-7进行分离培养、鉴定.方法:以聚合酶链反应(PCR)检测唾液中的HHV-7,再以巢式PCR及酶切加以鉴别;分离其中2例标本中的病毒,以人脐带血单个核细胞(HCBMC)进行培养,再通过DNA序列测定来鉴定培养结果.结果:检测120例唾液标本有97例阳性,PCR阳性结果示186 bp处有一荧光带,经E CO RI酶切后成为126 bp和60 bp两条荧光带,巢式PCR结果示94 bp处有一荧光带,HCBMC可用于HH V-7的传代培养.唾液中分离的HHV-7与培养结果所测得的病毒序列一致,与Berneman分离测得的JI株结果相似.结论:人的唾液中HHV-7检出率高,HHV-7可在HCB MC中增殖.
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艾滋病检测应该注意的几个问题
HIV感染的诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分[1],通过检测HIV的特异性抗体、抗原、核酸或病毒分离培养,可确立HIV感染[2,3].世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法是血清学抗体检测[1],但是在艾滋病检测中有几个问题值得重视.
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我国鼠诺如病毒的分离培养及其基因组序列分析
目的 分离我国鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)(命名SH1603),并进行基因组序列测定和分析.方法 利用RAW264.7细胞分离MNV SH1603,参考国外已发表的MNV4(DQ223043)基因组序列设计引物,经重叠的反转录PCR扩增全基因组,利用生物信息学软件对全基因组序列进行分析.结果 MNV SH1603引起RAW264.7细胞病变,其基因组全长7 238个核苷酸,包括4个开放阅读框(open reading frames,ORF),预测的ORF1、ORF2、ORF3、ORF4编码蛋白大小分别为186 000、58 000、22 000和23 000,其中ORF1和ORF2之间有14个核苷酸重叠,ORF2和ORF3之间有1个核苷酸重叠,ORF4包含在ORF2中.NCBI Blast比对发现,SH1603基因组与MNV4同源性高(94%).衣壳蛋白区的进化分析发现,SH1603与MNV4(DQ223043)和Berlin0606(EF531291)亲缘关系近.衣壳蛋白区氨基酸比对发现,SH 1603与MNV4比较,有4个位点突变,分别为aa211S→A、aa358I→V、aa404E→L、aa534V→A.结论 已分离到1株MNV,与国外报道的MNV4具有高度的进化亲源关系,为我国进一步研究MNV流行和致病机制奠定了基础.
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哈尔滨市2008年手足口病病原学检测结果分析
目的 研究2008年哈尔滨市手足口病的病原学情况.方法 应用RT-PCR和病毒分离两种方法对疑似手足口病患者标本进行检测.结果 RT-PCR快速检测EV71阳性率为25.64%,CA16阳性率0.64%;病毒分离培养EV71阳性率为37.82%,CA16阳性率为2.56%.156份标本分离出阳性病毒株63份,其中EV71阳性59份(占总阳性数的93.65%),CA16阳性4份(占总阳性数的6.35%).结论 哈尔滨市2008年手足口病的流行株为肠道病毒EV71型.手足口病病毒分离培养法阳性率高于RT-PCR法.粪便(包括肛拭子)和咽拭子标本手足口病病毒分离阳性率较高.
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内蒙古自治区第一株甲型H1N1流行性感冒病毒的血凝素基因与神经氨酸酶基因的特性
2009年3月开始在墨西哥和美国等地暴发了由甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒引起的甲型H1N1流感,该疫情在短期内迅速蔓延至全球[1-4].甲型H1N1流感病毒属正黏病毒科甲型流感病毒属,基因组约为13.6 kb,由大小不等的8个独立片段组成[ 5].本研究对1例甲型H1N1流感患者咽拭子样本进行病毒核酸检测和病毒分离培养,并分析所得病毒的血凝素基因(HA)和神经氨酸酶基因(NA)的特性.
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细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究
目的:比较不同方法检测生殖器疱疹病毒感染的效率. 方法:采用病毒培养和PCR法检测疑为生殖器疱疹病毒感染者标本60例,并用PCR作病毒分型. 结果:根据病史及临床表现确诊的生殖器疱疹患者标本60例中,病毒培养法阳性36例,阳性率60%(36/60);PCR 检测单纯疱疹病毒(HSV)阳性45例,阳性率75% (45/60),和病毒培养相比,差异非常显著(χ2=26.76,P<0.01);PCR分型结果显示阳性标本均为单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2).水疱和脓疱标本的病毒培养和PCR检测阳性率均较高(80.0%~93.3%),糜烂、结痂、斑丘疹标本检测中PCR阳性率(20.0%~66.7%)高于病毒培养(0~33.3%). 结论:对疑为生殖器疱疹患者作病原学诊断,采集水疱、脓疱标本进行病毒分离或PCR检测较佳.
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一步法快速检测高致病性禽流感(H5N1)的方法建立
禽流感目前是世界范围内流行广的人兽共患病之一,给世界经济发展和人类健康带来巨大的危害.如何快速诊断是目前亟待解决的问题之一.目前我国普遍采用的禽流感检测方法是世界动物卫生组织推荐使用的鸡胚病毒分离法.这种方法虽然精确,但缺点也很明显--耗时过长,从提取样品到终出具结果,少需要21天时间.这种方法已不能适应我国口岸快速通关放行的需要,给出口企业带来种种不便,也不能满足我国加入世贸组织后国内消费者对禽肉安全性的需求.北京检验检疫局与深圳匹基公司合作,利用分子生物学手段,检测高致病性禽流感病毒核酸,无须做鸡胚病毒分离培养,可将检测时间从原来的21天缩短为4个小时.
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EV71感染重症患儿临床诊断和预警指标的研究
手足口病是全球性传染病,世界大部分地区均有此病流行的报道.EV71是1969年首次从美国加利福尼亚州患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中分离出来[1],自1974年首次报道以来, EV71已在世界范围内引起10余次暴发与流行.近年来,EV71频繁在亚洲流行,造成较高的病死率和致残率,严重危害儿童身体健康和生命安全,被誉为21世纪的"脊髓灰质炎"[2].EV71感染的实验室检测一般都是通过病毒分离培养,目前常用的是病毒核酸的分子检测方法,可以很容易的将EV71和其它肠道病毒分开.
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HIV抗体血清学筛查及结果分析
HIV感染的诊断是艾滋病预防控制的重要工作,发现传染源是控制艾滋病传播的有效方法.HIV感染的实验诊断包括病原学诊断和血清学检测,前者包括病毒分离培养,病毒抗原检测和病毒核酸检测,后者主要是检测人血清中的特异性抗体,其中抗体检测是目前诊断HIV感染常用的方法.1自2009年以来,我院就诊病人中应用HIV诊断试剂盒检测HIV抗体阳性者12例,经送南安市疾病预防控制中心艾滋病初筛实验室复检11例阳性,1例为假阳性.12例HIV抗体阳性者的实验结果均由福建省或泉州市疾病预防控制中心确认检测,后证实11例为HIV感染者.现将结果报道如下.
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狗肾细胞、人喉表皮癌细胞、横纹肌肉瘤细胞混合培养检测呼吸道病毒和肠道病毒
目的 培养狗肾细胞(MDCK)、人喉表皮癌细胞(HEP-2)、横纹肌肉瘤细胞(RD)混合细胞系(MHR),为检测呼吸道病毒和肠道病毒建立新方法.方法 将生长成片的MDCK、HEP-2、RD细胞按照1∶1∶1的比例混合,将甲型H1N1、H3N2、Victoria、Yamagata 4种亚型的流感病毒进行101~1010倍稀释,接种到MHR和MDCK中,在24 h、48 h、72 h、96 h、120h取培养物上清测血凝(HA)滴度;将肠道病毒CoxA16分别接种到MHR和RD、HEP-2细胞中.结果 甲型H1N1、H3N2、Victoria、Yamagata 4种亚型流感病毒在MDCK细胞的血凝滴度高于或等于混合细胞,能检测到的低浓度高于混合细胞,CoxA16病毒在3种细胞出现CPE的时间长短为RD< MHR< HEP-2.结论 MHR对流感病毒和肠道CoxA16病毒均较敏感,可用于流感病毒和肠道病毒的分离培养.
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狗肾细胞和Vero细胞对流感病毒敏感性研究
流感是第一个进行全球监测的传染病,流感病毒常用细胞培养的细胞系有Vero细胞和狗肾细胞(MDCK细胞),Vero细胞主要用来做流感疫苗的生产研究,MDCK细胞主要用于流感日常监测.本研究通过比较不同亚型流感病毒对MDCK和Vero细胞敏感性差异,为实验室进行流感病毒相关实验筛选敏感细胞提供依据.
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巢式聚合酶链反应与病毒分离培养对呼吸道合胞病毒检测的差异及其临床意义
目的 探讨巢式PCR (N-PCR)、病毒分离培养2种不同方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)的差异性及其临床意义.方法 收集2010年1月至2012年8月重庆医科大学附属儿童医院呼吸病房住院患儿鼻咽抽吸物(NPAs),同时采用N-PCR、病毒分离培养方法检测RSV.采集患儿临床资料进行统计学分析.结果 N-PCR、病毒分离培养方法同时检测RSV的标本共1143份,男:女=2.16:1.00;年龄1~165个月(中位数为7个月).临床主要诊断:支气管肺炎[478例(41.8%)],间质性肺炎[223例(19.5%)],毛细支气管炎[221例(19.3%)],支气管炎[71例(6.2%)],上呼吸道感染[21例(1.8%)].N-PCR检出RSV阳性共458份(总阳性率为40.1%,其中RSV-A 31.7%,RSV-B 7.7%,RSV-A及RSV-B同时检出的标本占0.7%),病毒分离培养方法检出RSV阳性标本204份(17.8%).分析N-PCR及病毒分离培养检测结果:2种方法检测均阳性(P+I+)标本165份,均阴性标本(P-I-)646份(一致性为70.1%),2种方法差异大部分在于N-PCR阳性、病毒分离培养阴性的(P+I-)标本,共293份,占总标本数25.6%.P+I-组较P-I-组患儿年龄小、住院时间长,RSV检出率冬季高、夏季低,发热患儿比例低,咳痰、喘息、呼吸困难、重症肺炎、呼吸衰竭患儿比例较高,差异均有统计学意义(P均<0.05),临床符合RSV感染的特征.P+I-组较P+I+组患儿入院前病程长(P =0.005),喘息患儿比例低(P =0.009).结论 N-PCR和病毒分离培养2种方法对RSV检出的差异性与患儿入院前病程有关.N-PCR检测RSV的敏感性及特异性良好.
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非典型呼吸道病原体检测方法研究进展
非典型呼吸道病原体感染的鉴别检测是临床诊疗非典型呼吸道感染疾患的重要依据,寻求快速、灵敏、准确的检测方法,具有重要的临床意义.本文就非典型呼吸道病原体检测方法及研究进展进行综述.
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艾滋病病毒检测方法研究
艾滋病病毒会对人体免疫系统造成较为严重的侵袭,使得人体出现较多的疾病。而艾滋病预防控制工作的重点就在于正确地诊断出HIV感染[1],只有确定了传染源,才能够对艾滋病传播进行更好的控制。而只有通过检测HIV的病毒分离培养、核酸、抗原、特异性抗体等之后,才能够确诊是否感染HIV [2],从目前来看,实验室检测HIV的主要方法依旧是血清学实验。本文就艾滋病病毒检测方法研究进展进行探讨。