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乙酰肝素酶蛋白表达与肝癌侵袭转移关系的研究
乙酰肝素酶（heparanase，HPSE）是一种葡糖苷酸内切酶，能特异性降解硫酸肝素多糖的硫酸肝素侧链，破坏细胞外基质和基底膜，乙酰肝素酶与肿瘤血管形成、侵袭转移密切相关。我们采用免疫组织化学法检测 HPSE 蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达，探讨 HPSE 蛋白与肝癌临床病理特征的关系。
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乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A-549细胞侵袭力的抑制作用
目的 探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE )反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人肺癌A-549细胞侵袭力的抑制作用.方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE ASODN,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染人肺癌A-549细胞进行培养,采用流式细胞分析技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺癌A-549细胞HPSE蛋白及其mRNA表达的变化;以Matrigel细胞侵袭试验对HPSE AS-ODN对肺癌A-549细胞侵袭的抑制进行检测.结果 ASODN各组与正常对照组和脂质体组比较及ASODN各组间比较HPSE mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭力均受到明显抑制 (P<0.01);ASODN在终浓度为100、200、400 nmol/L时对肺癌A-549细胞侵袭力的抑制率分别为55.6%、82.3%和91.2%.结论 HPSE ASODN通过下调HPSE mRNA和蛋白的表达可显著抑制肺癌A-549细胞的侵袭力,并呈剂量依赖性.
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慢病毒携带的短发夹RNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶基因表达的沉默作用
目的 通过构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,探讨慢病毒携带的shRNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶(HPA)基因表达的沉默作用.方法 采用RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,将构建5对shRNA重组慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western印迹检测HPA-shRNA对MDA-MB-231细胞HPA蛋白表达水平的影响;用CCK-8的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞的生长抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌细胞的杀伤作用,运用transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.进一步,运用流式分析的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞周期的影响.建立小鼠转移瘤模型,检测HPA-shRNA在体内对乳腺癌细胞的生长抑制作用.结果 成功构建HPA-shRNA重组慢病毒载体.在体外,实验组HPA-shRNA1组、HPA-shRNA3组、HPA-shRNA4组有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达,HPA蛋白表达明显降低(P<0.05).HPA-shRNA1对乳腺癌细胞的生长具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能够增加乳腺癌细胞对5-Fu的敏感性.此外,HPA-shRNA1能够诱导乳腺癌细胞在S期发生细胞周期阻滞.在体内,HPA-shRNA1组HPA基因mRNA相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05),HPA-shRNA1能够沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表达.在体内HPA-shRNA1同样能够抑制乳腺癌细胞生长.结论 HPA-shRNA重组慢病毒载体可有效抑制乳腺癌HPA基因的表达,进而发挥良好的抗肿瘤作用.
关键词： 乙酰肝素酶 乳腺癌 慢病毒载体 短发夹RNA MDA-MB-231细胞 -
HPSE、MMP-9和E-cad联合表达对中老年非小细胞肺癌侵袭、转移及其预后的影响
目的 研究中老年非小细胞肺癌(NSCLC)中HPSE、MMP-9、E-cad mRNA和蛋白的表达,探讨其与肿瘤侵袭性、淋巴结转移及预后的关系.方法 应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测NSCLC组织中HPSE、MMP-9、E-cad mRNA和蛋白表达.同时,对随访资料进行生存分析,绘制生存率曲线,探讨三者对NSCLC患者预后的影响.另外,通过细胞黏附能力实验测定硫酸多糖对NSCLC A549细胞黏附能力的影响.结果 HPSE、MMP-9 mRNA和微血管密度(MVD)值在不同肺组织中的表达有显著性差异(均P＜0.05).HPSE、MMP-9、E-cad的表达在不同年龄、性别、组织学类型及分化程度间无显著性差异(均P＞0.05),而在淋巴结转移与否组间有显著性差异(P＜0.05).患者术后生存期与HPSE、MMP-9及E-cad的表达强度显著相关(均P＜0.05).生存率曲线显示HPSE和MMP-9蛋白高表达者生存时间均短于低/无表达者,E-cad蛋白则与之相反(P=0.027,0.018,0.030,n=65).HPSE和MMP-9的表达与MVD值均呈正相关(r=0.48;r=0.54).细胞黏附能力实验显示实验组NSCLC A549细胞黏附率明显比对照组低.结论 HPSE、MMP-9、E-cad表达可作为预测中老年NSCLC侵袭、淋巴结转移和预后的良好指标;三者共同促进了NSCLC微血管形成和肿瘤细胞转移;HPSE抑制剂硫酸多糖能够有效抑制NSCLC A549细胞的黏附能力.
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乙酰肝素酶靶向治疗心肌梗死的前景
乙酰肝素酶( HPSE)是一种内切性β-D-葡萄糖醛酸糖苷酶,是哺乳动物细胞中唯一可以切割细胞表面的硫酸乙酰肝素侧链的酶,参加细胞外重塑.HPSE涉及多种生理过程如胚胎植入,组织修复和炎症过程;病理致病过程主要包括肿瘤的进展和肾脏疾病. HPSE在多种恶性肿瘤病理发展过程中呈现高表达、高活性状态,有可能成为一个抗肿瘤治疗的新靶点[1] .本文探讨 HPSE 在心肌缺血再灌注(I/R)损伤发病中的作用,及可能的分子机制,为今后心肌梗死的监测、治疗及预后评估开辟新方向,具有重要的基础及临床意义.
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老年脑出血患者血清乙酰肝素酶和血管内皮生长因子水平变化及其与出血量和出血部位的关系
目的 探讨老年脑出血患者血清乙酰肝素酶(HPA)和血管内皮生长因子(VEGF)水平变化情况及其与出血量和出血部位的关系.方法 选择老年脑出血患者50例作为脑出血组和健康体检老年人50例作为对照组,计算脑出血患者的脑出血量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组血清HPA和VEGF水平.结果 脑出血组脑出血1 d、脑出血1 w、脑出血2 w血清HPA和VEGF水平均显著高于对照组(P<0.05),脑出血组脑出血1 w、脑出血2 w血清HPA和VEGF水平均显著高于脑出血1 d(P<0.05),脑出血组脑出血2 w血清HPA和VEGF水平均显著高于脑出血1 w(P<0.05).脑出血量≤15 ml组患者各时点血清HPA和VEGF水平均显著低于脑出血>15 ml组(P<0.05).丘脑出血组患者各时点血清HPA和VEGF水平和壳核出血组比较差异均无统计学意义(P>0.05).脑出血患者各时点血清HPA和VEGF水平均呈正相关(P<0.05).结论 老年脑出血患者血清HPA和VEGF水平升高,随脑出血时间的延长,血清HPA和VEGF水平呈升高趋势,血清HPA和VEGF水平和脑出血量有关,和脑出血部位无相关性,血清HPA和VEGF水平呈正相关.
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乙酰肝素酶在肾癌中的表达及其生物学意义
目的:通过检测乙酰肝素酶(Heparanase,Hpa)在肾癌中的表达,探讨其生物学意义.方法:采用免疫组化PV6000法检测54例肾癌和20例正常肾脏组织中Hpa蛋白的表达,分析Hpa与肾癌临床病理特征的关系.结果:Hpa在肾癌组织中的表达较正常肾脏组织明显增高(P＜0.05).Hpa的表达水平与肾癌的临床分期、肿瘤大小呈正相关(P＜0.05),而与肿瘤的组织学分级无相关性(P＞0.05).有转移的肾癌患者中Hpa的阳性表达率高于无转移者(P＜0.05).Hpa的表达与患者年龄、性别、病理学类型无相关性(P＞0.05).结论:Hpa与肾癌的发病及浸润转移等不良预后相关,并有可能成为判断肾癌预后的指标和靶向治疗的靶点.
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复方苦参注射液对人肺腺癌A549细胞株增殖、乙酰肝素酶表达及侵袭能力的影响
目的：通过体外研究探讨复方苦参注射液对人肺腺癌A549细胞株增殖、乙酰肝素酶（heparanase，Hpa）表达的影响及机制。方法：WST－1法检测不同浓度复方苦参注射液对A549的增殖抑制作用；S－P法测定各组干预48 h后细胞内Hpa的表达；Matrigel体外侵袭试验检测各组细胞侵袭能力。结果：①0.1～0.5 mg／ml浓度的复方苦参注射液作用人肺腺癌A549细胞达48 h开始对细胞增殖有抑制作用，且呈浓度、时间依赖性；相同浓度时干预48 h对细胞的增殖抑制作用优于72 h。②复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞48 h后，药物在0.1～0.5 mg／ml浓度区间内对A549细胞核内Hpa表达有抑制作用。③复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞48 h后，0.2～0.5 mg／ml浓度区间内对A549细胞侵袭基底膜均有抑制作用。结论：本研究结果显示复方苦参注射液能通过抑制肺腺癌A549细胞表达Hpa、抑制A549细胞侵袭基底膜而发挥抗肺腺癌作用。
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乙酰肝素酶大亚基在毕赤酵母中的表达
目的 构建乙酰肝素酶(HPA)大亚基片段真核表达质粒,并在毕赤酵母中表达重组蛋白.方法 根据GenBank中登录的HPA大亚基基因序列设计引物,PCR方法扩增肝素酶基因,构建毕赤酵母真核表达质粒pPICZαA-HPA.电击穿孔法转化感受态毕赤酵母SDM1168,斑点免疫印迹法筛选重组菌株,PCR法鉴定阳性克隆.甲醇诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定表达产物.结果 构建的重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;斑点免疫印迹法筛选出的9个单菌落经PCR扩增,均可见1 161 bp的目的基因条带;表达产物经Western blot分析,具有良好的反应原性,表达量约为μg/L.结论 已成功构建了HPA大亚基片段真核表达质粒pPICZαA-HPA,并在毕赤酵母SDM1168中分泌表达了HPA大亚基.
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乙酰肝素酶重组慢病毒转基因和siRNA干扰质粒的构建及鉴定
目的:构建乙酰肝素酶重组慢病毒转基因和siRNA干扰质粒,为探讨HPSE在在肿瘤浸润转移过程中的分子机理奠定基础.方法:乙酰肝素酶cDNA全长扩增和佳siRNA干扰片段筛选分别采用PCR和Real-time PCR方法,慢病毒系统载体分别使用pWPI和siRNA pSico系统,采用限制性內切酶快速连接方法联接目的基因和佳佳siRNA干扰片段,表达载体鉴定均采用核苷酸序列测定,HPSE重组慢病毒表达质粒和siRNA片段细胞转染采用脂质体转染法.结果:成功扩增乙酰肝素酶全长并连接入pWPI载体构建成重组表达载体HPSE-pWPI,重组质粒测序结果显与HPSE基因的同源性达99%.转染2937后有HPSE基因的表达.筛选出佳siRNA干扰片段为HPSE-1222并成功插入pSico栽体,构建成重组表达载体HPSE-siRNA pSico,重组载体测序显示与构建的shRNA结构序列完全一致.结论:成功采用慢病毒载体系统构建了乙酰肝素酶重组慢病毒转基因和siRNA干扰质粒,为探讨HPSE在在肿瘤浸润转移过程中的分子机理奠定基础.
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乙酰肝素酶促进骨肉瘤细胞增殖和侵袭的体外研究
目的:探讨通过基因转染正向调节HPSE-1,体外对骨肉瘤细胞系恶性特质的影响.方法:转染HPSE-1基因至骨肉瘤细胞系MG-63,检测HPSE-1 mRNA和蛋白水平的表达,进一步应用MTT试验和Transwell侵袭试验观察稳定转染的细胞的增殖力和侵袭力的影响.结果:成功建立稳定转染HPSE-1基因的MG-63细胞系MG-63-HPSE,且该细胞系在mRNA和蛋白水平均发现HPSE-1表达增高,MTT和Transwell试验结果发现MG-63-HPSE细胞的增殖力和侵袭力均明显高于对照组.结论:基因转染后过表达HPSE-1的骨肉瘤细胞系体外表现出增强的增殖和侵袭活性.
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乙酰肝素酶siRNA对人膀胱癌T24细胞株侵袭能力的影响
目的:观察乙酰肝素酶(Heparanase,HPSE)小干扰R N A(small-interfering RNA,siRNA)对人膀胱癌细胞株侵袭力的影响.方法:体外化学合成一段乙酰肝素酶特异性小干扰RNA(siRNA)序列,以阳离子脂质体介导将不同浓度的siRNA转染至膀胱癌细胞系T24细胞中,应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后T24细胞中HPSE mRNA表达,采用transwell小室侵袭试验测定肿瘤细胞的体外侵袭力.结果:转染HPSE siRNA可以显著降低T24细胞中的HPSE mRNA表达,HPA siRNA处理细胞48小时,与对照组相比,各有效浓度的HPSE siRNA可显著抑制T24细胞的体外侵袭能力(P＜0.05).结论:以siRNA阻遏乙酰肝素酶在膀胱癌细胞中表达可以成功地抑制膀胱癌细胞侵袭能力,通过应用RNA干扰技术等方法抑制乙酰肝素酶活性可能可以应用于临床治疗膀胱癌.
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乙酰肝素酶对肿瘤转移调控机制研究进展
乙酰肝素酶是目前发现的哺乳动物细胞中唯一能切割细胞外基质中硫酸乙酰肝素蛋白多糖的一种葡萄糖醛酸内切酶,在肿瘤细胞浸润和转移中起重要作用.本文就乙酰肝素酶一般概况、功能和调控、与肿瘤转移的关系及其临床应用前景进行综述.
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乙酰肝素酶在卵巢癌中表达的临床意义
目的 探讨卵巢癌组织中乙酰肝素酶(Hpa)表达状况与肿瘤微血管密度(MVD)和卵巢癌临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化SABC法检测60例卵巢癌组织中Hpa表达及计数MVD.结果 Hpa表达和卵巢癌组织浸润深度,分期和淋巴结转移有关,Hpa阳性表达组MVD值(48.8±11.3),显著高于Hpa阴性表达组MVD值(41.5±11.9)(P＜0.05).结论 Hpa可促进肿瘤微血管生成加速肿瘤浸润和转移.
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宫颈癌组织中乙酰肝素酶表达的临床研究
目的 通过对宫颈癌组织中乙酰肝素酶(HPA)的检测,探讨HPA在宫颈癌发生、发展、转移潜力中的作用.方法 采用免疫组化染色检测56例宫颈癌组织中HPA的表达,并与13例正常宫颈组织和16例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织作为对照,分析HPA表达在宫颈癌中的作用.结果 56例宫颈癌患者中HPA表达阳性率高达76.8%,正常宫颈中HPA无表达,CIN组织中HPA表达阳性率为18.8%.宫颈癌的分化程度、临床分型浸润深度、淋巴结转移与宫颈癌组织中HPA表达相关(P值≤0.05);宫颈癌患者的年龄、病理类型与宫颈癌组织中HPA表达无相关性(P值＞0.05).结论 HPA表达在宫颈癌组织中明显增高,与宫颈癌的进展和转移潜力有关,可能参与宫颈癌的进展与转移并做为宫颈癌的发生及发展的一个新的判断指标.
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乙酰肝素酶(Hpa)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在子宫腺肌病中的表达及相关性研究
子宫腺肌病(adenomyosis, AM)是生育年龄妇女的多发病、常见病,近年来其发病率呈明显上升趋势.该病多发生于年龄在30~50岁的多产妇女.多个研究提示在育龄妇女中,AM的发病率约为10%~15%[1].在美国,AM是子宫切除的第三个常见的指征[2].AM是一种严重影响女性生殖健康的良性疾病,具有肿瘤的某些特征,如种植、浸润、复发等.因此,研究AM发生发展的机制,探求新的有效的治疗途径具有重要意义.
关键词： 子宫腺肌病 乙酰肝素酶 碱性成纤维细胞生长因子 免疫组织化学法 -
冬凌草甲素对肿瘤转移相关酶的影响
目的 探讨冬凌草甲素对肿瘤转移相关酶(乙酰肝素酶,MMP-2,MMP-9)的影响.方法 利用半定量RT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231细胞乙酰肝素酶基因的表达变化,用明胶酶谱检测冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞MMP-2、MMP-9活性的影响.结果 冬凌草甲素可下调乙酰肝素酶在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,并抑制基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性.结论 冬凌草甲素可通过下调乙酰肝素酶基因表达、抑制MMP-2和MMP-9活性,从而抑制肿瘤的侵袭转移.
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乙酰肝素酶、肝细胞生长因子和血管内皮生长因子在非小细胞肺癌组织中的表达及其相关性
目的:研究乙酰肝素酶(HPA)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与临床特征之间的关系;并分析三者表达的相关性.方法:采用免疫组织化学检测45例非小细胞肺癌组织及10例正常组织中HPA、HGF及VEGF的表达水平.结果:非小细胞肺癌组织中HPA、VEGF的表达与正常组织表达、TNM分期有关.HGF的表达与正常组织的表达有关.三者中任意两者间在非小细胞肺癌组织中的表达均呈正相关性.结论:HPA、HGF与VEGF参与了非小细胞肺癌的发生、发展、浸润与转移;在非小细胞肺癌的发展过程中,三者之间可能存在协同作用.
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乙酰肝素酶表达在食管鳞癌演发过程中的意义
目的:研究乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)在食管正常粘膜和各级不典型增生组织中的表达,并与癌组织中Hpa表达进行对比.探索Hpa在食管鳞癌早期诊断、早期治疗中的应用价值.方法:采取胃镜下标本,包括正常食管鳞状上皮、不典型增生组织和原位癌,用免疫组化染色和RT-PCR方法研究Hpa表达情况,并且与术后食管鳞癌组织对比.结果:免疫组化结果显示,正常组织阳性率0.0%(0/20),食管Ⅰ级不典型增生组织阳性率20.0%(2/10),Ⅱ级不典型增生组织阳性率18.2%(2/11),Ⅲ级不典型增生组织阳性率63.6%(7/11),原位癌组织阳性率60.0%(9/15),食管鳞癌组织Hpa阳性率63.6%(35/55).食管Ⅰ级不典型增生组织、Ⅱ级不典型增生组织Hpa阳性率与正常食管上皮无显著差异(P>0.05);食管鳞癌组织、原位癌组织和Ⅲ级不典型增生组织3组阳性率相互之间无显著差异(P>0.05);食管鳞癌组织、原位癌组织和Ⅲ级不典型增生组织Hpa阳性率均高于正常食管上皮(P<0.05).合并计算Ⅰ级和Ⅱ级不典型增生组织阳性率为19.0%(4/21),与Ⅲ级不典型增生组织63.6%(7/11)比较,有显著差异(P=0.017).RT-PCR结果显示,Hpa基因扩增产物为585 bp.正常组织Hpa基因阳性率5.0%(1/20),食管Ⅰ级不典型增生组织阳性率16.7%(1/6),Ⅱ级不典型增生组织阳性率33.3%(2/6),Ⅲ级不典型增生组织阳性率75.0%(6/8),食管鳞癌组织Hpa阳性率72.7%(40/55).食管Ⅰ级不典型增生组织、Ⅱ级不典型增生组织Hpa阳性率与正常食管上皮无显著差异(P>0.05);食管鳞癌组织和Ⅲ级不典型增生组织两组之间阳性率无显著差异(P>0.05);食管鳞癌组织、Ⅲ级不典型增生组织Hpa阳性率均高于正常食管上皮(P<0.05).合并计算Ⅰ级和Ⅱ级不典型增生组织阳性率为25.0%(3/12),与Ⅲ级不典型增生组织75.0%(6/8)比较,有显著差异(P=0.040).结论:Hpa明显上调发生于食管正常鳞状上皮向鳞癌演发过程中的Ⅲ级不典型增生阶段.
关键词： 癌前病变 食管肿瘤 乙酰肝素酶 逆转录聚合酶链式反应 免疫组织化学 -
乙酰肝素酶在溃疡性结肠炎肠黏膜中的表达及在致病机制中的作用
目的探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者肠黏膜中表达的改变,及其表达是否与不同临床分期和不同炎症程度相关.同时也讨论了HPSE表达在UC致病机制中的作用.方法正常对照组为13名健康成人,确诊的28例UC患者中25例根据病情分为活动期11例、缓解期14例,并对24例的病理组织学炎症进行分级,Ⅲ、Ⅳ级10例,Ⅰ、Ⅱ级14例.分别采用RT-PCR和Western印迹法对不同分组的HPSE表达水平进行检测.结果HPSE在正常对照组肠黏膜中无表达,在缓解期和病理分级Ⅰ、Ⅱ级的肠黏膜中均呈现低表达,而在活动期和病理分级Ⅲ、Ⅳ级的肠黏膜中表达显著升高.结论HPSE在UC肠黏膜中呈阳性表达,且其表达水平与病情轻重和炎症严重程度呈正相关,它可能在UC肠黏膜上皮重塑和疾病的发生和发展中起重要作用,而HPSE抑制剂则有可能用于UC的治疗.
