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3种不同脱钙液对牙齿标本切片免疫组化染色效果的研究
在口腔组织病理的研究中,常常需要通过切片对牙齿组织相关细胞进行观察和对比分析,由于牙釉质是体内硬度高的组织,如果不能很好地进行脱钙处理,就很难制得优良的切片并获得满意的染色结果.目前尚无公认的用于牙齿组织的理想方法,因此进行了两种配方的酸类脱钙液和EDTA螫合剂脱钙液的脱钙时间和染色效果的研究.
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浅谈苏木素的配置及使用
苏木素伊红染色在病理组织制片中占有很重要的位置,染色质量的优劣直接影响病理诊断的准确性.其中用于细胞核染色的苏木素染液是决定染色效果和切片质量为重要的因素之一.Harris苏木素是病理技术中经典、常用的染液,用于常规石蜡切片、冷冻切片、细胞学涂片等的HE染色制片.它具有现配现用,颜色鲜艳优点,深受大家喜爱.不足之处在于配制过程中过氧化程度不易控制,容易因过氧化而产生大量沉淀;使用过程中组织切片易被过氧化形成的颗粒沉淀和表层金属氧化薄膜所污染.这两个因素是影响染液染色效果和使用寿命的关键,所以,配制过程中的过氧化控制和使用过程中的防氧化控制至关重要.
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对经腹主动脉灌注固定兔睾丸的实验探讨
组织固定是组织染色的一个重要步骤,固定好,切片染色效果才可能好,实验的定性、定量结果才可能准确[1、2].组织固定有浸润固定和灌注固定两种方法,灌注固定又分全身灌注固定和局部灌注固定,有作者认为局部灌注固定效果比全身灌注固定好[3],兔睾丸组织的灌注固定采用的是全身灌注[4、5],尚未见采用经腹主动脉灌注固定睾丸的报道.本实验对睾丸组织进行了经腹主动脉的局部灌注固定,现将灌注方法报道如下,以与同行商榷.
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网织红细胞的显示及体会
1.试剂的配制:①煌焦油蓝1 克加无水酒精100ml,充分溶解后瓶口密封保存,若有沉淀使用前过滤.②需制备煌焦油蓝染色膜:取一干净平滑优质玻璃片,用滴管在玻片一端滴加2~3滴煌焦油蓝入平皿内以防灰尘污染,干后待用.③取新鲜耳垂血或手指血2~4滴滴在已经干燥的染料色膜上, 与血滴充分混合,可将两玻片轻轻移动两下,血液和染料的比例应恰到1:1,然后将染色的玻片放入平皿内或放在大玻璃缸内,缸内放湿沙布以防血液干固.④在室温内静止染色3 ~10min.⑤染色后将两张玻片分开,将血液按常规涂片方法涂成均匀的血片(2~4 张),在通风处干燥.⑥用中性树胶封片,若需保存用瑞氏染液进行复染.2.结果:网织红细胞呈蓝色网状物,不规则,颗粒状、丝状或丝网状结构,其它细胞染色结果和瑞氏染色相同.3.注意事项:①贮存煤焦油蓝染液的瓶子要严紧密封,用前过滤.②染色染料色膜随用随制.③染色的时间不能少于3min,染料沉淀会凝集,纤维素附着于细胞上,往往会认为是网织红细胞,应注意.我们所配染液保存半年染色效果仍很满意.
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血液涂片Wright染色法的改进
血涂片是医学生认识正常及病理血细胞的重要标本.因此,制作精良的血涂片必须:一是要有好的材料,包括染料等;二是要掌握血涂片的染色技术,现简述如下:1.取血按常规取无名指血一滴,放在洁净的载玻片上,立即盖上盖玻片,待血液散开后 ,推开盖玻片.放在灯泡玻板上凉干.2.染色先在干血涂片两端用玻璃蜡笔划线,然后放在染片架上,并滴Wright染液 ,加盖染色3min,之后加等量的pH6.4磷酸缓冲液染色5min.3.打气在加入磷酸缓冲液后要不断的吹气.染色结果,用蒸馏水将血涂片上的染料冲洗干净.凉干,用香柏油封片.4.结果红细胞呈粉红或橙黄色,中性粒细胞核深紫色,胞质颗粒浅红色.嗜酸性粒细胞核呈紫色八字形,胞质颗粒大呈红色.嗜碱性粒细胞核模糊,有大小不等的紫色颗粒.淋巴细胞核呈深紫色,胞质天蓝色.单核细胞核呈紫蓝色肾形,胞质灰蓝色.血小板为紫红色.5.讨论本法的改进在于加强打气,推血涂片时,应在风扇下使血涂片快速吹干,血细胞不致变形.开始滴加Wright染液染色时不要打气而要加盖,在加入等量硫酸缓冲液时 ,要立即在血涂片上不停地打气,直至染色结束才不打气,否则血涂片会有很多沉淀,影响染色效果.打气不但有助染色,还可以用来检查染色效果,染色后期用气球在血涂片上打气 ,出现一个没有染液的空圆点,从这个空圆点上可以看到血涂片上染色的深浅,色浅可再滴染液重染,色深则立即用蒸馏水洗干净血涂片.
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显示肝、肾上腺脂类油红O方法探讨
油红O为脂溶性,它是目前被认为优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴.配制染料的溶剂是染色成败的关键,在此介绍一种油红O染色的改进.油红O原配方是由异丙醇,我们改用酒精配制效果同样满意.①取材:小狗肝脏、肾上腺固定于10%中性甲醛溶液内1~2d.②蒸馏水洗冰冻切片1 0~20μm入蒸馏水.③用70~80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗.④入油红O 染色15~25min.油红O配方:油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.结果:①位于肝细胞内的脂肪滴或散在于结缔组织中的脂肪滴均呈现红色,肝细胞核蓝色,脂类在肝细胞中是较常见的包涵物一种为脂滴,另一种为髓磷脂.②肾上腺皮质富含脂类,脂滴非常清晰,呈鲜红色,球状带含量少、不规则,束状带细胞脂滴含量丰富,网状带脂滴较少.体会:油红O染色效果好,颜色鲜红,染色快,用酒精替代异丙醇效果同样满意.
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10%福尔马林与中性福尔马林的比较
传统上我们都采用10%福尔马林固定组织.福尔马林系甲醛液的俗称,是由甲醛(Formaldeny de HCHO )气体饱和于水而成.一般市售的福尔马林含甲醛37%~40%.配法:取40%甲醛液10ml与蒸馏水90ml混合,即得4%甲醛,亦即10%福尔马林.由于福尔马林久存则氧化产生甲酸,呈酸性,固定标本不适宜,特别是需长期固定的组织更不适合,故我们主张采用中性福尔马林固定组织标本.其配法如下:40%甲醛100ml酸性磷酸钠(或无水磷酸二氢钾)4.0g磷酸氢二钠6.5g蒸馏水900ml因中性福尔马林中加入了磷酸缓冲液,不易被氧化,能长期保持pH7.0,故对组织标本的固定(特别是长期固定)、染色效果非常有利.为了证实两种固定液对组织标本的固定效果,我们将皮肤组织分成两组,每组五块皮肤组织标本.其固定方法如下:第一组由10%福尔马林固定组织3m.第二组由中性福尔马林固定组织3m结果显示:(1)从肉眼观察:第一组固定后组织标本的收缩程度及变硬度明显大于第二组.(2)镜下观察:第二组的正常组织细胞形态、层次分明、色彩鲜艳,正常组织细胞基本上无萎缩、变形.而第一组的正常组织形态有明显萎缩,较第二组层次模糊、色彩暗淡.综上所述,我们建议日常活体组织检查应采用中性的福尔马林固定.
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微波修复在冰冻切片免疫组化中的应用
微波修复法多用于石蜡切片,我们在长期的研究生免疫组化教学过程中,实行改良,将微波抗原修复法用于冰冻切片,取得了满意的效果,方法如:1.常规固定取脑组织冰冻切片.2.漂洗后3%H2 O2封闭10分钟,蒸馏水洗2分钟3次.3.微波抗原修复:入柠檬酸盐缓冲液(PH6. 0),用微波或电炉加热,循环3次后入1%BSA孵育15分钟.4.入一抗30分钟,转入二抗 20分钟,三抗20分钟,显色.结果讨论:1.与对照切片成比,阳性细胞染色增强,背景变浅,阳性检出率提高.由于常规的冰冻切片免疫组化方法所用的固定剂多含甲醛,醛基与蛋白质中的氨基交联,使抗原决定簇被掩盖,影响了免疫组化染色结果,使背景染色较深,阳性检出率较低.且这种作用随固定时间的增长而加重,用微波修复抗原的方法,可以使抗原决定簇暴露,有利于抗体结合.此外,部分因固定而被损伤的抗原决定簇也得到修复,因此能提高抗原的阳性检出率,增加染色强度,降低背景的非特异性染色.2.染色时间大大缩短.以往为保证染色效果,常规一抗孵育时间较长(12-24小时),而用微波修复后仅需 30分钟.因为微波修复法可使抗原暴露,利于抗原抗体结合,提高了反应速度,节省了时间 .综上所述,在冰冻切片中使用微波抗原修复的方法值得推广.
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阴道脱落细胞苏木紫-伊红染色法步骤的改进
阴道脱落细胞检查是早期发现子宫颈癌的一种重要诊断方法,在防癌普查中有很大作用,苏木紫-伊红染色法是常用的染色方法,根据自己多年来组织参加防癌普查大批量标本实际情况对该方法染色步骤及染色时间进行改进,加快了检验速度,染色效果不影响检验质量,现报告如下:
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介绍一种脑脊液细胞染色法
脑脊液(CSF)细胞的分类是检验科的常规检测项目,细胞分类正确与否关键步骤是涂片的染色效果。笔者在长期工作中摸索出一种快速细胞染色法,现介绍给同道。 快速染色液的配制按《全国临床检验操作规程》第二版第5页的30 s快速单一染色方法进行。染色方法:①将已计数细胞的CSF离心1 500 r/min,10 min;弃上清,加10 μl AB血清,取沉淀常规推片,快速风干;②将涂片置显微镜下,观察每高倍视野大约细胞数量;③染色,每高倍视野细胞数在10个之内,将玻片浸入快速染色液中染色1 s,水洗待检。同法细胞数11~29个染3 s,30~50个染5 s,51~100个染10 s,101~200个染20 s,200个以上按常规方法进行;④涂片水洗后自然干燥镜检。 CSF内一般细胞数量较少,常规涂片染色容易引起染色过深,影响细胞分类,尤其是初学者,由于染色效果不好,常使细胞分类结果出现误差,而影响临床病例的诊治。在细胞沉淀中加入少量AB血清有利于细胞对玻片的黏附;按不同的细胞数量用不同的染色时间所染的细胞胞体不变形,核、浆和颗粒分辨清晰。这一方法也适用于浆膜腔等其他体液细胞的染色。
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液基细胞学薄层制片新技术介绍及体会
随着细胞病理学的发展,Auto Cyte Prep液基薄层制片技术改革了标本的采集和处理方法,以其良好的性能和理想的染色效果已开始逐步取代人工染色.自2002年8月我院引进液基薄层细胞学制片技术以来,已制片10 000余张.现将该技术的要点和使用体会介绍如下.
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微波在肾穿活组织银染色中的作用
肾穿活组织病理检查在肾小球病变的诊断,临床病理分型,治疗和预后判断中有着十分重要的作用。但肾穿组织切片的银染需耗费较长的时间,我们在银染过程中采用微波处理不仅明显缩短了染色时间,染色效果也显著提高,现介绍如下。 1 材料与方法 1.1 材料微波炉是National 530-91,Japan。根据输出功率多少分高、中高、中、中低、低、解冻,肾组织银染色步骤参照《实用病理技术手册》。……
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介绍一种嗜酸性粒细胞计数稀释液和方法
许多实验室工作者在进行嗜酸性粒细胞直接计数时经常遇到的一个问题是,嗜酸性粒细胞染色效果不好,无法区分嗜酸性粒细胞和其他白细胞,因此无法进行准确的嗜酸性粒细胞直接计数.笔者在北京协和医院工作多年,一直使用一种嗜酸性粒细胞直接计数稀释液,而且是许多检验专业书上从未介绍过的配制方法,现介绍如下.