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流式细胞仪和基因芯片分析比较基因敲入和转基因小鼠前列腺癌模型
目的:利用流式细胞仪和基因芯片技术分析比较基因敲入(KIMAP)和转基因(TGMAP)小鼠前列腺癌模型.方法:对于来自KIMAP和TGMAP的肿瘤标本进行流式细胞仪分析和基因芯片分析.结果:来源于TGMAP(n=8)和KIMAP(n=9)的小鼠前列腺癌标本流式细胞仪分析显示,多数KIMAP肿瘤为双倍体,与临床相近,而所有TGMAP肿瘤均为非整倍体.基因芯片分析证明,在KIMAP中免疫应答基因高表达,而TGMAP晚期肿瘤(26～32周)中与神经内分泌肿瘤分化相关的基因占主体.结论:由于KIMAP模型成功地模仿了人类前列腺癌特征,在前列腺癌临床前期研究中具有潜在的应用价值.
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绿色荧光蛋白转基因胚胎大鼠神经干细胞生物学特性研究
目的:体外分离、培养、鉴定绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因胚胎大鼠神经干细胞,研究其体外活性与生物学性状,为在体分化示踪研究奠定基础.方法:采用机械分离,无血清传代培养法从GFP胚胎大鼠海马获得神经干细胞,免疫荧光和免疫细胞化学法染色进行体外神经干细胞性质和分化活性鉴定,并利用流式细胞计数法行纯度检测.结果:成功从GFP胎鼠海马获得神经干细胞,体外生长情况与活性良好,能分化成神经元和胶质细胞;体外连续传代3次后绝大部分细胞Nestin表达阳性,且分化后细胞的GFP表达不受影响.结论:GFP胚胎大鼠来源神经干细胞具有普通胎鼠神经干细胞相同的自我更新和多向分化潜能,且能稳定表达GFP,因此它可以成为示踪神经干细胞研究的有效工具细胞.
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人类肿瘤转基因动物模型研究进展
动物模型是进行肿瘤实验研究的重要材料和手段.本文综述了应用于人类肿瘤研究领域的转基因动物技术,理想的动物品系,已建立的动物模型及其应用、进展,目前存在的问题及应用前景.
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应用PCR测定Cx43转基因小鼠的基因型
目的:应用聚合酶链反应(PCR)技术,检测Cx43(connexin 43)转基因小鼠的基因型.方法:采用CMV43转基因小鼠和Cx43剔除小鼠分别与野生型小鼠杂交繁殖,切取子代小鼠尾巴制备DNA,应用PCR技术扩增DNA,观察目的基因的阳性率.结果:CMV43转基因小鼠子代66个,dhfrPCR检测阳性率为31.8%.Cx43基因剔除小鼠子代21个,分别与Cx43野生型引物和Cx43剔除引物进行PCR,两者均阳性(+/+)12个,百分率为57.1%,前者阳性而后者阴性(杂合子+/-)7个,百分率为33.3%,两者均阴性(纯合子-/-)2个,百分率为9.6%.野生型小鼠经Cx43野生型引物PCR检测结果均为阳性.结论:PCR技术用于Cx43转基因小鼠基因型的检测敏感度高,特异性强,易操作,可用作Cx43转基因小鼠心血管畸形模型研究的初选方法.
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IGF-I在肝星形细胞过度表达的作用
目的:为探讨星形细胞中过度表达的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对肝细胞损害的保护作用.方法:分别选取肝星形细胞(HSC)中转基因IGF-I过度表达的转基因小鼠(TG),并以转基因IGF-I在HSC中无表达的同窝野生型小鼠(WT)对照组,用四氯化碳诱导小鼠急性肝损害模型,以玉米油灌胃作安慰剂对照;并检测以下指标:血浆ALT、AST水平测定,四氯化碳灌胃前后测定体重,肝脏病理组织学检查.结果:在四氯化碳诱导小鼠急性肝损害模型中,WT组血浆AST水平明显高于WT正常对照组(P＜0.0001),而TG组无显著差异(P=0.25);TG和WT组的血浆ALT均增高,但TG组升高程度较少;而且TG组的体重明显高于WT组(P＜0.01);进一步观察病理片,TG组仅有小面积的肝细胞坏死,炎症局限于肝小叶的中央区,肝小叶仍保持完整,损害较WT组轻.结论:小鼠的肝星形细胞中IGF-I过度表达对四化碳诱导小鼠急性肝损害有保护作用.
关键词： 胰岛素样生长因子-I 肝星形细胞 转基因 -
转基因植物非预期效应及其评价
非预期效应,尤其是潜在的、非预见性非预期效应是影响转基因植物及其产品食用安全的重要因素.本文简要概述了转基因植物非预期效应评价原则、评价策略及筛查技术等方面的现况,认为需要建立针对性的转基因植物非期望效应筛查与评价体系,制定科学的评价程序,应用先进的技术在遗传育种、市场释放前和市场释放后各阶段,对转基因植物非期望效应进行动态的检验与评价.
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阿尔茨海默症转基因小鼠模型的建立及其脑新皮质区β淀粉样蛋白的分布
目的:比较两种方法建立阿尔茨海默病转基因小鼠模型对小鼠脑新皮质区Aβ分布的影响.方法:选取16月龄雄性小鼠20只,分别建立APP/PSl双转基因(2×Tg-AD组)模型与APP/PSl/tau三转基因(3×Tg-AD组)模型.取两组小鼠新皮质区脑组织行6E10单克隆抗体免疫组化染色等方法显示Aβ阳性神经元及斑块,观察其分布与形态差异,并利用图像分析系统定量比较.结果:在新皮质区2×Tg-AD组Aβ阳性产物主要位于细胞外即细胞外Aβ(eAβ),形成大量的老年斑,细胞内阳性产物少;而3×Tg-AD组Aβ阳性产物主要位于神经元细胞内即细胞内Aβ(iAβ),但老年斑少见.结论:2×Tg-AD组与3×Tg-AD组Aβ阳性产物在新皮质区分布的差异可能反映了两种AD小鼠模型神经病理等改变的不同.
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转基因水牛人FSHβ基因突变的研究
目的:检测转基因水牛人FSHβ cDNA序列基因.方法:分离提取转基因水牛外周血DNA,PCR扩增,T-A克隆测序,DNA club软件分析.结果:水牛基因组整合人FSHβ cDNA序列并发生一位点缺失C44(无意义链)或G347(有意义链),突变位于人FSHβ-Seat belt结构域.结论:转基因水牛整合人FSHβ cDNA序列发生点缺失,导致阅读框架发生移码,其功能有待进一步研究.
关键词： 水牛 转基因 人FSHβ cDNA -
磷脂酶A_2研究中基因敲除和转基因技术的应用
磷脂酶A_2(PLA_2)是一种广泛存在于动物细胞和体液中重要酶类.它不仅参与炎症反应、宿主防御反应和脂质代谢,还与许多疾病的发生有关.随着分子生物学技术突飞猛进的发展,基因敲除和转基因技术已在PLA_2研究方面广泛应用,尤其在动物体内功能的研究,使我们对PLA_2有了更全面、深入的了解.
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蛋白激酶Cε的结构特点和生理、病理作用
蛋白激酶C(PKCε)归为新型PKC亚家族,其特点为非钙依赖而对佛波酯或二脂酰甘油(DAG)敏感的Ser/Thr蛋白激酶.PKCε在细胞内的区域化定位取决于第二信使和一些信号蛋白因子,这类蛋白因子能对G-蛋白偶连受体、酪氨酸激酶受体和酪氨酸激酶偶连受体作出应答.PKCε调节各种生理功能包括神经、内分泌、外分泌、炎症和免疫系统活化.PKCε控制性活化在心肌缺血和Alzheimer's病中起到积极作用,而非控制、长时间活性可导致严重疾病,如恶性肿瘤和糖尿病的发生.本文就PKCε亚细胞定位及生理、病理方面的近期研究作一综述.
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转基因工程植物抗体的研究与进展
植物抗体即通过基因工程技术在植物中表达或生产的抗体,是抗体基因工程的一个新领域.利用转基因植物生产抗体就是将编码全抗体或抗体片段的基因导入植物,从而在植物中产生全抗体或抗体片段,获得的抗体能功能性地识别并结合抗原.这种技术为大规模生产抗体以用于人类疾病诊断、治疗等方面提供了新思路.
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膀胱肿瘤动物模型研究进展
膀胱癌是我国泌尿系统常见的恶性肿瘤.建立成熟稳定的动物模型在膀胱癌病变机理前瞻性研究及进行抗癌药的药理研究中占据十分重要的地位.现对膀胱肿瘤动物模型的建立方法、模型特点及其应用方面进行综述.
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自杀基因抑制K562细胞成瘤的动物实验研究
目的 探讨自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)和胸苷激酶(TK)在小鼠体内对K562细胞的抑制作用.方法 将在慢病毒介导下已转染CDgly TK的K562细胞种植于裸鼠皮下,观察其成瘤情况和对前体药物[环氧鸟苷(GCV)、5-氟胞嘧啶(5-FC)]的敏感性.结果 种植K562细胞和K562/CDg1y TK细胞的裸鼠分别在(7.0±1.2)和(7.1±0.9)d后长出肉眼可见的瘤块.两组裸鼠生存期分别是(52.2±5.3)和(54.2±3.7)d,差异无统计学意义(P>0.05);接种K562/CDgly TK细胞的小鼠经GCV和5-FC处理后,其裸鼠分别在(26.9±1.7)、(25.7±1.9)d后肉眼可见肿瘤生长,对照组接种K562细胞后(6.9±1.7)d生长出肉眼可见肿瘤,两者差异有统计学意义(P<0.01).结论 自杀基因在体内对K562细胞有明显的抑制作用,能增强前体药物GCV和5-FC对肿瘤细胞的药物作用.
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乙型肝炎病毒L02细胞转染模型的建立与鉴定
我们以L02细胞为基础,利用基因重组技术构建含1.3倍加长乙型肝炎病毒(HBV)全基因组的表达质粒pcDNA-HBV,进行基因转染,获得了类似HepG2 2.2.15(简称2.2.15细胞)(HepG2转染HBV DNA后所得)具有复制和分泌HBV能力的HBV转染细胞模型.
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乙醇对乙型肝炎病毒转基因小鼠病毒复制和基因表达的影响
乙型肝炎病毒(HBV)在体内的持续感染、复制和基因表达是急、慢性乙型肝炎发病机制的重要环节.嗜酒明显影响乙型肝炎的预后,使其易于重型化、慢性化,且肝癌发生率升高.嗜酒与HBV感染对肝脏损伤有协同作用.本研究旨在通过对HBV转基因小鼠的乙醇干预,探讨它对HBV复制和基因表达的影响及其机制,以利于对乙型肝炎及酒精相关性肝病的防治.
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已免疫CD4+记忆性T淋巴细胞介导HBV转基因小鼠抗HBsAg免疫应答的研究
目的 研究已免疫CD4+记忆性T淋巴细胞介导HBV转基因小鼠(Tg小鼠)抗HBsAg免疫应答的作用机制. 方法 通过免疫磁珠分选分离、收集乙型肝炎疫苗成功免疫的C57BL/6小鼠外周血CD4+Tm淋巴细胞,再通过尾静脉注射过继免疫Tg小鼠,分别于过继免疫后4、8周采小鼠外周血,通过酶联免疫吸附法检测HBsAg、抗-HBs、干扰素γ(IFN γ)、白细胞介素2 (IL-2),同时通过免疫组织化学法检测小鼠肝脏的HBsAg.计量资料用t检验,计数资料用x2检验. 结果 与对照组相比,试验组Tg小鼠HBsAg滴度均明显降低[(243.5±12.4)ng/ml对比0 ng/m],t=3.939,P=0.011,差异有统计学意义;抗-HBs水平[(0ng/ml对比(530.7±17.5)ng/ml]、IFNγ[(12.25±2.9) pg/ml对比(38.8±6.8) pg/ml]和IL-2水平[(11.3±3.5)pg/ml对比(82.3±9.2) pg/ml],均明显升高,t值分别为4.414、2.785、2.993,P值分别为0.0069、0.0496、0.0402,差异均有统计学意义. 结论 已免疫CD4+记忆性T淋巴细胞介导HBV转基因小鼠,可通过提高IFN γ和IL-2细胞因子水平,增强体液和细胞免疫,从而介导Tg小鼠体内HBsAg的清除.
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乙型肝炎病毒S/C基因位点反义锁核酸在小鼠体内抗病毒疗效研究
目的 探讨针对HBV S/C双基因位点反义锁核酸对乙型肝炎转基因小鼠HBV复制和表达的影响.方法 将30只HBV转基因小鼠随机分为5组,每组6只.分别为5%葡萄糖液对照组、空脂质体对照组、单靶区S组,单靶区C组、双靶区SC组.反义锁核酸片段经尾静脉注入小鼠体内,采用时间分辨免疫荧光技术定量检测血清HBsAg;实时荧光聚合酶链反应定量检测血清HBV DNA含量;逆转录聚合酶链反应检测肝组织HBV C-mRNA的表达;免疫组织化学法检测肝细胞HBsAg、HBcAg的表达,自动牛物化学分析仪检测血清白蛋白、ALT、尿素氮、肌酐;小鼠肝,肾脏做常规病理切片,观察反义锁核酸对小鼠脏器的影响.应用SPSS12.0统计学软件分析.各组问比较采用重复测量方差分析的SNK检验和Kruskal Wallis H检验. 结果注射锁核酸后,对HBsAg的表达均显示有较强的抑制作用,单靶区S组,单靶区C组和双靶区SC组的平均抑制率分别为36.6%、31.5%和54.9%;对HBV DNA的复制也有抑制作用,平均抑制率分别为24.0%,21.1%和35.8%.注射后1、3、5 d,HBsAg的平均抑制率分别为14.4%、25.6%和31.3%;HBVDNA的平均抑制率分别为11.0%、19.2%和24.1%;血清中白蛋白、ALT、尿素氮、肌酐等指标,各组结果与对照组比较,差异均无统计学意义;小鼠肝细胞的HBsAg、HBcAg阳性细胞数均较对照组明显减少.小鼠肝,肾脏组织学表现未见异常. 结论 HBV S/C基因位点反义锁核酸对乙型肝炎病毒转基冈鼠HBV复制和表达有显著抑制作用,且双基因靶位优于单基因靶位.
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热休克蛋白70-HBcAg(18～27)蛋白复合物对乙型肝炎病毒转基因小鼠的免疫研究
目的 研究结核杆菌热休克蛋白(HSP)70-HBcAg(18～27)蛋白复合物对HBV转基因小鼠免疫应答的影响.方法 体外构建HSP70-HBcAg(18～27)蛋白复合物,以HBV转基因小鼠为实验对象,进行体内免疫学功能研究.结果 HSP70-HBcAg(18～27)蛋白复合物使HBV转基因小鼠外周血及脾中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞大量增殖,诱导较强的抗原特异性CTL应答,并活化自然杀伤细胞、树突状细胞参与应答反应.结论 HSP70-HBcAg(18～27)蛋白复合物具有免疫原性,能够增强转基因鼠细胞免疫应答能力,有望作为蛋白疫苗用于慢性乙型肝炎的免疫治疗.
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丙型肝炎病毒结构基因转基因小鼠模型的建立
目的建立丙型肝炎病毒(HCV)转基因小鼠模型,探讨丙型肝炎发病机制,研究HCV结构蛋白编码基因的功能与致病作用.方法采用长片段聚合酶链反应技术扩增HCV结构基因,构建稳定表达与诱导表达两种真核细胞表达重组体,经体外细胞转染后,将具有表达功能的线性化表达元件采用显微注射法,直接导入1736枚小鼠受精卵,先后移入69只假孕母鼠输卵管.结果妊娠受体25只,产仔105只,成活57只.注射卵成仔率仅3.28%.经聚合酶链反应扩增、测序、酶切及Southern杂交鉴定,获阳性首建鼠26只,注射卵首建鼠成功率仅1.50%.其中稳定表达型10只,诱导表达型1 6只.经与正常鼠交配,获F1阳性杂合鼠分别38只、20只.一个纯合子品系.结论研究建立了稳定表达与诱导表达两类HCV结构基因转基因小鼠,为进一步研究HCV致病机制,H C V基因功能奠定了基础.
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靶向反义硫代寡脱氧核苷酸抗病毒疗效的实验研究
目的探讨靶向反义硫代寡脱氧核苷酸(asODN)在乙型肝炎(HBV)病毒转基因小鼠体内抗病毒疗效. 方法设计合成针对HBV pre-C/C基因的反义硫代寡脱氧核苷酸:5′-CATGCCCCAAAGCCAC-3′,并以半乳糖-多聚赖氨酸(Gal15-PLL)作肝靶向载体.将12只血清HBsAg, HBV DNA阳性的转基因小鼠等分为Gal15-PLL-asODN治疗组及生理盐水对照组.靶向反义硫代寡脱氧核苷酸以每天每克体重15μg剂量,尾静脉注射给药,共12d;对照组用同样体积生理盐水同样方法给药. 结果注射Gal15-PLL-asODN 6d后,血清HBsAg已有下降(P＜0.05);12d时显著下降(P＜0.01), 且血清HBV DNA转阴率为66.7%(4/6), 肝组织免疫组织化学HBsAg、HBcAg 阳性肝细胞数较对照组明显下降(P＜0.05);而生理盐水对照组无明显变化. 结论靶向反义硫代寡脱氧核苷酸在转基因小鼠体内能抑制HBV复制与抗原表达.
