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5-氨基酮戊酸光动力疗法对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞生长和增殖影响的初步研究
目的:探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对体外培养的增生性瘢痕组织的成纤维细胞生长和增殖的影响,观察细胞的形态学及超微结构的变化,并探讨可能的机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测ALA,激光照射对体外培养的成纤维细胞增殖的影响;1mmol/L的ALA接受在不同的时间激光照射对成纤维细胞增殖的影响;在光镜和电镜下观察ALA-PDT对细胞形态和超微结构的影响;用分光光度法检测ALA-PDT对细胞氧自由基含量、超氧化物歧化酶活性的影响.结果:单一的激光照射对成纤维细胞的生长没有影响;1、10、102和103mmol/L的ALA对细胞生长有一定的抑制作用(P＜0.05;1mmol/L的ALA接受20min、40min和60min激光照射后细胞的增殖明显下降(P＜0.05),呈时间依赖关系;ALA-PDT作用于细胞后,细胞体积变大,正常的细胞连接消失,细胞内的线粒体减少、体积增大,内质网呈空泡化;ALA-PDT作用于细胞后,细胞ROS含量升高,SOD活性降低(P＜0.05).结论:ALA-PDT对体外成纤维细胞具有明显的损伤作用,对细胞的增殖和生长有一定的抑制作用;其作用机制可能与ALA-PDT对细胞的氧化损伤有关.
关键词： 5-氨基酮戊酸光动力疗法 成纤维细胞 增生性瘢痕 -
电针抑制兔耳增生性瘢痕形成的作用研究
目的:探究电针刺激在抑制兔耳增生性瘢痕形成过程中的影响.方法:以成年新西兰雄性兔(24只)为实验对象,随机分为电针组、手针组、模型组、空白组,除空白组外其余各组在兔耳腹侧面造成创面以形成瘢痕组织,然后根据组别分别在血海与翳风穴给予不同的刺激,比较各组兔耳增生性瘢痕形成情况,测定增生性瘢痕的瘢痕增生指数、各样品组织中羟脯氨酸的含量及胶原纤维的排列.结果:电针治疗组的瘢痕增生指数与其他各组存在明显差异(P＜0.05),HE染色在光镜下可见胶原纤维组织排列整齐度的增加及胶原纤维组织含量的降低.结论:电针可以抑制兔耳增生性瘢痕形成.
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高压氧对兔耳增生性瘢痕形成的影响
目的:探讨高压氧(Hyperbaric oxygenation,HBO)对兔耳增生性瘢痕形成及对血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF β1)表达的影响.方法:选取20只新西兰大白兔建立兔耳瘢痕模型,每耳6个创面,随机分成实验组和对照组2组,每组1 0只,共120个创面,实验组术后立即给予HBO处理,对照组处于常压环境中.术后第29天切取瘢痕组织,测量瘢痕增生指数(hypertrophic index,HI),并用HE染色观察瘢痕形态学变化,免疫组织化学方法检测TGF β1及VEGF的表达.结果:实验组HI值明显低于对照组(P＜0.01);HE染色结果示实验组成纤维细胞数目较对照组明显减少(P＜0.01);免疫组织化学检测结果示实验组VEGF、TGF β1的表达量较对照组显著降低(P＜0.01).结论:HBO可降低VEGF、TGF β1的表达,对兔耳增生性瘢痕有明显抑制作用.
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水蛭素对瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶作用的实验研究
目的:探讨水蛭素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表达水平的影响.方法:取10例烧伤愈合后6个月内瘢痕挛缩需手术治疗的患者的瘢痕组织,采用组织块法分离培养增生性瘢痕成纤维细胞.取第4～7代细胞实验,加入0、1、10、50U/ml的水蛭素干预.观察加药后24h、48h成纤维细胞形态学变化,利用MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法及酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测水蛭素对增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblast,HSFB)及基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的作用.结果:①1、10、50U/ml组水蛭素对HSFB均有抑制作用(P＜0.05),以50U/ml作用明显(24h、48h抑制率分别为14.75％、15.42％)；②水蛭素作用成纤维细胞24h后MMP-2、MMP-9表达含量均增加,分别以1U/ml、50U/ml作用明显,差异有统计学意义(P＜0.05)；48h后MMP-2表达降低,MMP-9表达有增加但无意义.结论:水蛭素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,能促进增生性瘢痕成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)有利于细胞外基质降解减少沉积.
关键词： 水蛭素 增生性瘢痕 基质金属蛋白酶(MMPs) -
丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞超微结构和自由基代谢平衡影响的实验研究
目的:探究丹参酮Ⅱ A磺酸钠(STS)对人增生性瘢痕(HS)的成纤维细胞(Fb)超微结构及自由基代谢平衡的影响,从抗氧化途径寻找一种新的治疗HS的有效方法.方法:收集术中7例HS组织进行Fb体外培养,取第3～6代传代细胞进行实验观察,设置实验组和对照组,实验组设置不同浓度组STS(0.05,0.075,0.10,0.125,0.15,0.20mg/ml)干预培养,对照组加入等量不含STS的DMEM培养液.①干预培养48h后应用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态及超微结构改变；②分别于培养12h,24h,48h后,应用化学比色法检测细胞内丙二醛(MDA)含量、黄嘌呤氧化酶(XOD)活力、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力变化.结果:①透射电镜见实验组细胞内线粒体肿胀及空泡样变性,粗面内质网扩张、囊泡变及脱颗粒,胶原纤维束减少,细胞坏死等现象；②与对照组比较,实验组MDA含量及XOD活力明显降低(P＜0.05或P＜0.01),且存在浓度-时间效应.与对照组比较,实验组T-SOD和GSH-Px活力水平有不同程度升高,其升高程度受药物浓度和作用时间影响.与对照组比较,药物作用12h时,高浓度组(0.15mg/ml和0.20mg/ml)T-SOD活力水平升高明显(P＜0.05)；24h时,0.125 ～0.20mg/ml组显著升高(P＜0.05或P＜0.01)；48h时,0.05mg/ml ～0.10mg/ml组显著升高(P＜0.05或P＜0.01),0.15mg/ml和0.20mg/ml组显著降低(P＜0.01).与对照组比较,药物作用12h时,0.075 ～0.15mg/ml组GSH-Px活力水平明显升高(P＜0.05或P＜0.01),24h和48h时0.05mg/ml和0.075mg/ml组明显升高(P＜0.01),48h时0.20mg/ml组GSH-Px活力水平明显降低(P＜0.01).结论:STS可通过降低自由基产生及增强抗氧化酶活性调节瘢痕成纤维细胞自由基代谢平衡和生物学功能.
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点阵CO2激光治疗兔耳增生性瘢痕后成纤维细胞凋亡及VEGF变化规律的研究
目的:①通过点阵CO2激光对兔耳增生性瘢痕治疗的实验研究,验证其有效性；②观察点阵CO2激光治疗兔耳增生性瘢痕后治疗组与对照组成纤维细胞凋亡及VEGF表达情况的变化.方法:新西兰大白兔20只双侧耳制作兔耳增生性瘢痕的动物模型并分组,造模后三周治疗组行点阵CO2激光治疗,对照组无干预.两组切取治疗后1h、治疗后3天、7天、14天、28天瘢痕组织,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡率变化,免疫组化检测VEGF的表达变化.结果:点阵CO2激光治疗组瘢痕软化、变平所需时间较对照组缩短,治疗后瘢痕组织中成纤维细胞凋亡增多、VEGF表达减少.结论:点阵CO2激光治疗可以促进兔耳增生性瘢痕软化、变平,瘢痕组织中成纤维细胞凋亡增加、VEGF的表达降低,其治疗增生性瘢痕的机理之一可能在于其启动了增生性瘢痕中过度增殖的成纤维细胞的凋亡程序,加速凋亡,进而影响VEGF的表达,促进瘢痕的萎缩.
关键词： 增生性瘢痕 点阵CO2激光 细胞凋亡 血管内皮细胞生长因子 -
SFRP2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的:成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体.方法:从pGBKT-SFRP2质粒中扩增SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV.用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPAR γ 2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率.原代培养增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞.通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平.结果:RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp,SFRP2 mRNA表达水平明显增高；用抗SFRP2多克隆抗体进行Western blot检测为阳性,感染的重组腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达.结论:成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2;它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平.
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IL-32在病理性瘢痕中的表达及其生物学作用研究
目的:探讨IL-32在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的形成过程中所起的生物学作用.方法:收集2009年10月至2011年6月广东医学院附属医院整形外科手术切除的瘢痕疙瘩组织12例,增生性瘢痕组织12例,正常皮肤24例,分别应用免疫组织化学技术、RT-PCR和Western Blot检测IL-32在它们中的表达情况.结果:IL-32在正常皮肤增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中均有表达,在正常皮肤中表达较强,在增生性瘢痕及瘢痕疙瘩组织中表达较弱；IL-32mRNA和IL-32蛋白在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的表达较正常皮肤明显降低(P均＜0.05),而增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:IL-32在病理性瘢痕组织的形成过程中起着一定的重要作用,有进一步研究的价值.
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氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的:探讨氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法:以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将氨甲喋呤(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)加入细胞培养液中进行干预并与空白对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响.结果:10-6mol/L、10-5mol/L的氨甲喋呤对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),10-9mol/L ～ 10-5mol/L的氨甲喋呤对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P＜0.01).结论:氨甲喋呤在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用.
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放射治疗兔耳增生性瘢痕的实验研究
目的:研究经过医用高能电子线照射兔耳增生性瘢痕实验模型后,观察伤口愈合的情况、瘢痕 愈合后的病理改变及肌动蛋白(ACTIN)和血管生长因子(VEGF)表达变化情况.方法:选用日本大耳白兔18只,在每只兔耳腹侧面制作直 径6mm的圆形全层皮肤缺损创面10个.将总计360个缺损创面模型随机分为6组,第1组为空白对照组(3只),其余5组为照射组 (各3只).将照射组每只兔耳随机用200cGy、400cGy、600cGy、800cGy、1000cGy的6Mev电子线照射兔耳缺损创面,照射 野周围用铅板防护,观察兔耳缺损创面的愈合情况变化及创面愈合后瘢痕组织进展情况.并于致伤一个月后对实验模型取材,进 行光镜、电镜及组织学观察.结果:兔耳腹侧面圆形创面缺损,能产生与人类增生性瘢痕类似的增生块.各照射组,缺损创面愈 合延迟.总照射剂量相近的情况下,单次不同照射剂量对增生性瘢痕形成的影响有显著性差异.结论:日本大耳白兔可以形成类 似人的增生性瘢痕病理改变,可以用作增生性瘢痕研究的实验动物模型.动物实验证明,医用6Mev高能电子线照射治疗是一种 有效的治疗增生性瘫痕的方法,总照射剂量相近的情况下,分5次照射、单次剂量400cGy,为佳照射剂量.
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脉冲染料激光不同治疗周期对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖与凋亡的影响
目的:探讨不同治疗周期脉冲染料激光照射对增生性瘢痕动物模型伤口愈合过程中成纤维细胞增殖与凋亡的影响.方法:大耳白兔10只,建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,对比研究在瘢痕形成过程中不同治疗周期(1周治疗组与2周治疗组)脉冲染料激光照射对兔耳瘢痕成纤维细胞的影响,采用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达和细胞凋亡的原位检测.结果:兔耳增生性瘢痕经不同治疗周期(1周治疗组与2周治疗组)脉冲染料激光照射后,按不同时间段取材进行免疫组化染色比较,两组无明显差异. 结论:不同治疗周期脉冲染料激光照射均可抑制兔耳增生性瘢痕成纤维细胞的增殖过程,诱导细胞凋亡.但从减轻医生工作强度及减轻病患治疗费用角度考虑,利用脉冲染料激光治疗增生性瘢痕2周一次较为合适.
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ALA光动力治疗兔耳增生性瘢痕模型的实验研究
目的:观察ALA光动力学疗法对兔耳增生性瘢痕的影响.方法:建立兔耳增生性瘢痕模型后,将增生性瘢痕块随机分为ALA-光动力学治疗组和对照组.观察ALA对增生性瘢痕微血管、成纤维细胞、胶原纤维的影响.结果:ALA-光动力学治疗后瘢痕厚度显著变薄;微血管及成纤维细胞明显减少;胶原纤维明显稀疏,排列较规则有序.结论:ALA-光动力学治疗能够显著抑制兔耳增生性瘢痕的增生.
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结缔组织生长因子诱导瘢痕成纤维细胞增殖的信号转导机制研究
目的:探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)诱导增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)成纤维细胞增殖的信号转导通路.方法:采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法观察不同浓度CTGF促Hs成纤维细胞增殖的效应,以Western Blot法检测CTGF刺激HS成纤维细胞0、5,10、15、30、60min后磷酸化及总细胞外信号调节激酶(extraceIlular-signal regulated kinase,ERK 1/2)的表达,以二者的比值AI衡量信号通路活化程度;应用特异性阻断剂PD98059阻断ERK通路,MTT法检测CTGF诱导细胞增殖的变化.结果:CTGF在一定浓度范围内呈浓度依赖性促HS成纤维细胞增殖,ERK 1/2在无CTGF刺激时AI为0.01 31±0.00361,CTGF刺激Hs成纤维细胞5、10、15、30、60 min后的AI值分别为0.0221±0.00329,0.131±0.0361,0.209±0.0201,0.171±0.0379,0.0413±0.00361,在15min达高峰;采用PD98059选择性阻断ERK 1/2通路后(OD值=0.42±0.046)与CTGF刺激组比较(OD=0.66±0.035),细胞增殖显著受抑(P<0.01).结论:ERK1/2是CTGF诱导HS成纤维细胞增殖的主要信号通路.
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TNF-α抑制兔耳瘢痕增生的实验研究
目的:通过建立兔耳增生性瘢痕模型,研究肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α.)在减轻增生性瘢痕形成中的作用.方法:建立兔耳增生性瘢痕模型,实验动物随机分为A、B、c、D、E五组,并设C组为对照组,A、B、D、E组瘢痕内分别注射不同浓度TNF-α溶液0.1ml(100ng/ml,500ng/ml,1000ng/ml,5000ng/ml),C组瘢痕内注射等量生理盐水.观察增生性瘢痕组织块的组织结构、成纤维细胞的密度以及caspase-3蛋白的表达情况.分析不同浓度TNF-α对增生性瘢痕形成的影响·结果:瘢痕增生块减轻程度随TNF-α浓度增加而增加,即TNF-α浓度越高,增生性瘢痕体积越小,成纤维细胞密度越低,caspase-3表达强度越强.结论:肿瘤坏死因子-α可明显抑制兔耳增生性瘢痕的形成及瘢痕组织增生.
关键词： 肿瘤坏死因子-α 增生性瘢痕 caspasc-3蛋白 动物模型 -
米诺地尔对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及超氧化物歧化酶的影响
目的:探讨米诺地尔对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及超氧化物歧化酶的影响.方法:体外原代培养增生性瘢痕成纤维细胞,将0.25mol/L～2.0mmol/L的米诺地尔分别作用于增生性瘢痕成纤维细胞24h、48h后,采用MTT、超氧化物歧化酶测定等方法检测细胞的增殖活性及其超氧化物歧化酶的变化.结果:0.25mmol/L～2.0mmol/L的米诺地尔对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖有抑制作用,细胞内超氧化物歧化酶降低.结论:米诺地尔对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖有抑制作用,通过超氧化物歧化酶降低其自由基发挥作用.
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Vp532nm激光治疗兔耳增生性瘢痕的实验研究
目的:探讨可调脉宽(Vp)532nm激光对兔耳增生性瘢痕微血管、成纤维细胞、胶原纤维的影响.方法:利用兔耳腹侧面建立增生性瘢痕模型,按不同时间取材,对比研究Vp5 32nm激光对兔耳增生性瘢痕微血管、成纤维细胞、胶原纤维的影响.结果:激光治疗后微血管、成纤维细胞、胶原纤维较对照组明显减少.结论:Vp532nm激光可明显抑制兔耳增生性瘢痕.
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HGF/c-met蛋白在人增生性瘢痕组织中定位与表达的研究
目的:以肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)及其受体c-met蛋白为研究对象,研究其在人增生性瘢痕中的定位和表达.方法:采集住院患者的增生性瘢痕标本,以免疫组织化学染色的方法检测HGF/c-met在增生性瘢痕组织中的定位和表达,使用计算机辅助图像分析技术比较真皮层HGF/c-met表达水平的变化.结果:在表皮层,增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中的HGF/c-met均呈强阳性表达;相对于正常皮肤组织,人增生性瘢痕组织真皮层中HGF/c-met的表达明显增加,特别是在真皮层的成纤维细胞中,差异显著.结论:HGF/c-met在真皮层表达水平的改变可能是影响人增生性瘢痕形成的重要因素.
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二氢青蒿素抑制兔耳瘢痕增生的实验研究
目的:观察二氢青蒿素对兔耳增生性瘢痕增生的影响.方法:选取成年新西兰大耳白兔16只,建立兔耳增生性瘢痕动物模型,待上皮化后,对实验组、对照组分别给予二氢青蒿素(180mg/kg)和生理盐水(乙醇终浓度为0.1%)各10ml灌胃,术后28天和56天时观察药物对瘢痕增生指数(HI)的影响及光镜下瘢痕变化情况.结果:二氢青蒿素组与生理盐水组之间HI差异均有显著性意义(P＜0.01);光镜下见二氢青蒿素组成纤维细胞凋亡增加及胶原纤维的含量降低.结论:二氢青蒿素可明显抑制兔耳增生性瘢痕的形成及瘢痕组织增生.
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PI3K/AKT信号通路在CTGF促人增生性瘢痕成纤维细胞转分化中的作用
目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路是否介导结缔组织生长因子促人增生性瘢痕成纤维细胞转分化.方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,实验分3组:①空白对照组;②结缔组织生长因子(10ng/ml)刺激组;③磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002(10μmol/L)预处理后结缔组织生长因子刺激组.应用免疫印迹技术检测48h后a-平滑肌肌动蛋白的表达,应用流式细胞术检测a-平滑肌肌动蛋白阳性细胞百分率.结果:和空白对照组相比,结缔组织生长因子刺激组细胞a-平滑肌肌动蛋白表达和阳性细胞百分率升高;经磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002预处理后,再以结缔组织生长因子刺激,细胞a-平滑肌肌动蛋白表达和阳性细胞百分率升高水平下降,经统计学分析,差别具有显著性(P＜0.05).结论:结缔组织生长因子能够促进人增生性瘢痕成纤维细胞转分化,磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路介导该效应,磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002可抑制此效应.
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P27kipl和ki-67蛋白在病理性瘢痕组织中的表达和意义
目的:研究病理性瘢痕组织中P27kipl和ki-67蛋白的表达情况及其相互关系,探讨他们在瘢痕形成中的作用及机制.方法:应用免疫组化SP法检测正常皮肤、成熟瘢痕,增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中P27<'tipl>、ki-67蛋白的表达并进行统计学分析.结果:病理性瘢痕组织中P27kipl蛋白表达显著低于正常皮肤、成熟瘢痕(P=0.036);ki-67蛋白在病理性瘢痕组织中的表达显著高于正常皮肤、成熟瘢痕(P<0.000);病理性瘢痕组织中P27kipl的表达与ki-67蛋白表达呈负相关(P<0.000).结论:P27<'kipl>蛋白表达的下降及ki-67的表达升高可能与病理性瘢痕的形成有关.
