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饮用水中的9种农药残留及微囊藻毒素的在线固相萃取-液相色谱-质谱法测定
目的 建立饮用水中9种农药残留和微囊藻毒素LR的在线固相萃-取液相色谱-串联质谱(online SPE LC-MS/MS)的检测方法.方法 采用在线固相萃取技术,水样经HRP SPE柱富集,HSS T3高效液相色谱柱分离,乙腈和甲酸水梯度洗脱,分别用三重四极杆串联质谱和飞行时间质谱检测,ESI正离子模式下采集数据,外标法定量.结果 10种目标化合物的定量限远低于我国生活饮用水卫生标准的限量要求,其中飞行时间质谱法的LOQ为0.08 ～ 0.40 μg/L,三重四级杆质谱法的LOQ为0.01 ～0.19 μg/L.3个加标水平下(0.1、0.2、1倍的标准限量),10种目标物的加标回收率为66.5％～ 130.3％,相对标准偏差为0.8％ ～14.5％.结论 该方法快速、简单、灵敏度高,适用于饮用水中有关农药残留和藻毒素的同时检测.
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液相色谱-质谱联用法测定血清中槲皮素浓度
目的 建立液相色谱-质谱联用(LC-MS)法测定人血清中槲皮素浓度.方法 人血清样品经丙酮-甲醇提取,β-葡萄糖醛酸酶水解;采用色谱柱AgilentPoroshell 120 EC C18(50 mm ×4.6 mm,2.7 μm),以乙腈(B)和1％甲酸水溶液(A)为流动相,梯度洗脱;流速1.0 mL/min,柱温40℃;电喷雾离子源,单四级杆质谱检测器,选择性负离子监测模式检测(ESI-),检测离子质荷比为301.0(槲皮素),285.1(漆黄素);测定人血清中槲皮素浓度.结果 槲皮素在1 ～ 200 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9998;检出限为0.025 ng/mL;日内RSD为4.98％～ 8.35％,日间RSD为7.62％～9.73％;回收率为97.4％～ 112.8％ (n =8).结论 LC-MS法灵敏度较高、重复性良好,操作简单、快速,可用于人血清中槲皮素浓度的分析测定.
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高分子印记固相萃取-液相色谱质谱法测定水产品中孔雀石绿、结晶紫、亮绿及其代谢产物
目的 建立一种高分子印记固相萃取-液相色谱质谱联用( MISPE-HPLC/MS2)测定水产品中孔雀石绿、结晶紫、亮绿及其代谢产物的检测方法.方法 样品经乙腈提取后,经中性氧化铝柱和高分子印记固相萃取柱净化,Waters Atlantis T3色谱柱(2.1 mm x 150 mm,3 μm)分离,乙腈和0.1％甲酸水等度洗脱,采用选择反应监测(SRM)模式进行正离子扫描,内标法定量.结果 待测化合物在0.2～10 μg/L范围内有很好的相关性,相关系数大于0.99,加标水平为1、2、4μg/kg,孔雀石绿、结晶紫和亮绿的平均回收率分别为93.2％ ～ 105.9％、92.7％ ～ 107.5％和60.6％ ～ 94.4％,相对标准偏差均小于12.5％,孔雀石绿、结晶紫和亮绿的捡出限分别为0.02、0.03、0.03 μg/kg,定量限分别为0.07、0.10、0.10μg/kg.结论 本方法前处理净化效果更好、灵敏度更高,同时采用稳定性同位素稀释技术及基质匹配标准曲线,将基质抑制效应降低到低,适用于大批量鱼类产品中孔雀石绿、结晶紫和亮绿的检测.
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黑果枸杞中季铵型生物碱含量测定及含氮类化合物成分定性分析
目的 建立黑果枸杞中季铵型生物碱含量检测的紫外-可见分光光度测定法,利用液相色谱-质谱联用技术对黑果枸杞中含氮化合物进行成分定性分析.方法 采用紫外-分光光度仪,于524 nm波长处,以雷氏铵盐沉淀法测定总季铵型生物碱含量;色谱柱为BOS Hypersil C18(2.1 mm×150 mm,2.4μm),流动相A为0.1％甲酸水溶液,B为乙腈,梯度洗脱,流速0.3 ml/min,柱温:35℃,电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)源正离子检测条件下对黑果枸杞中含氮化合物进行成分分析.结果 甜菜碱作为对照品,取样量在981～4906μg之间,吸光度与甜菜碱取样量之间线性关系良好,Y=0.0001X-0.0055,r=0.9993.平均回收率为98.53％,RSD为1.19％(n=6);采用液相色谱-质谱联用技术分析出12种含氮化合物,其中,N(1)-二氢咖啡酰-N(12)-咖啡酰精胺和对羟基肉桂酰-二氢咖啡酰亚精胺属于首次于黑果枸杞中发现成分.结论 本文建立的季铵型生物碱含量测定方法简单、易操作、重复性良好,可用于黑果枸杞中季铵型生物碱含量测定;对黑果枸杞中含氮化合物的定性分析可为其质量控制提供参考.
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液相色谱-质谱法测定金银花中噻菌灵的残留量
目的 建立液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS/MS)测定金银花中噻菌灵残留量的方法.方法 样品采用乙酸乙酯提取,使用LC-MS/MS法测定金银花中噻菌灵含量,在正离子模式下,采用选择离子监测方式,其监测离子对为m/z 202→175.结果 在0.1×10-5~2×10-5mg范围内噻菌灵获得良好线性关系(r=0.9995),检测限为10.0 ng/ml,平均回收率为93.70%,RSD为2.53%.结论 所建立的LC-MS/MS法快速灵敏,适用于金银花中噻菌灵残留量的检测.
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应用高效液相色谱-质谱法监测蛇胆陈皮片原料药的投料分析研究
目的 应用高效液相色谱-质谱法(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS/MS)全面监测蛇胆陈皮片中原料药蛇胆汁和陈皮的投料情况,并可同时检测其中牛磺胆酸钠和橙皮苷的含量.方法 采用ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温40℃,流动相以乙腈-10mmol/L乙酸钠溶液,使用梯度洗脱程序,以HPLC分离有效成分、采用电喷雾离子源负离子模式检测,选择多反应离子监测方式进行原料药投料情况的定性监测及有效成分的定量分析.结果 牛磺胆酸钠和橙皮苷分别在0.242×10-2~1.45×10-2μg(r=0.9960),0.688×10-2~10.30×10-2μg(r=0.9992)范围内线性关系良好;精密度试验RSD分别为0.78%、1.56%;回收率分别为100.07%~108.7%,92.78%~99.32%;结论 高效液相色谱-质谱法快速简便、准确可靠、灵敏度高,适用于全面监测蛇胆陈皮片中蛇胆汁和陈皮的投料情况及质量.
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生脉注射液中人参皂苷Rb1在心绞痛患者体内的PK-PD结合模型研究
目的:建立生脉注射液中人参皂苷Rb1在心绞痛患者体内的PK-PD结合模型.方法:10名稳定性心绞痛受试者静脉滴注生脉注射液,连续给药14天,于给药后不同时间点采集血浆样品,采用质谱法检测人参皂苷Rb1的血药浓度,绘制药-时曲线,进行非房室模型拟合并计算PK参数;以受试者的收缩压和舒张压作为药效指标,进行PK-PD模型的拟合,计算PK-PD结合模型参数.结果:10名受试者静脉滴注生脉注射液后,人参皂苷Rb1在心绞痛受试者体内的药动学过程符合一室模型,生脉注射液中人参皂苷Rb1的降压效应滞后于血药浓度,效应与效应室浓度呈良好的相关性,符合Inhibitory Effect Imax模型.结论:该研究成功建立了生脉注射液中人参皂苷Rb1在心绞痛患者体内的PK-PD结合模型,可有效地用于评价生脉注射液的药效物质基础.
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葛花人参配伍的解酒护肝机制
目的:初步阐释中药葛花和人参在化学和药效学层面的配伍机制,为临床应用提供理论参考依据.方法:利用高分离度快速液相色谱与四极杆-飞行时间质谱联用(RRLC-Q-TOF-MS)分析葛花人参配伍前后的化学成分,流动相0.1％甲酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0 ～ 12 min,15％B;12～20 min,15％ ～50％ B),流速0.4 mL· min-,样品进样量5μL.主成分分析法(principal component analysis,PCA)统计配伍前后化学成分的差异,并对2味中药配伍进行药效学实验.结果:鉴定了葛花和人参配伍前后的化学成分,质谱负离子模式时,配伍合煎液中尼泊尔鸢尾素,6"-O-木糖黄豆黄苷,人参皂苷Rg1,人参皂苷Rf等含量明显增高.通过PCA分析,可以明显区分配伍前后的2个组分.酶活性实验葛花对酶反应有促进作用,体内实验中3个考察指标有显著变化.结论:葛花和人参配伍在体内外实验中的解酒护肝作用明显,并且检测出了化学成分的含量及变化,为临床应用和产品开发提供了理论参考.
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连作对穿心莲基因组DNA甲基化的影响
目的:探究连作条件下穿心莲基因组DNA的甲基化水平及模式变化情况.方法:结合甲基化敏感扩增多态性(methylation-sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术和液相色谱-质谱(LC-MS/MS)法对3个连作年限(0,1,2年)穿心莲基因组DNA的甲基化水平及模式进行分析.结果:LC-MS/MS测定的连作0～2年穿心莲基因组DNA甲基化水平为13.91％,12.72％,10.26％,MSAP测定的结果则为10.16％,9.64％,8.98％,两者均表明穿心莲基因组DNA的甲基化水平与连作年限呈现负相关,即DNA甲基化水平随着连作时间的延长而逐渐下降.MSAP技术对DNA甲基化模式分析也显示,穿心莲基因组DNA的CCGG位点在连作过程中主要发生了去甲基化.结论:连作条件下,穿心莲基因组DNA的甲基化水平和模式发生改变并以此来响应连作胁迫.
关键词： 穿心莲 DNA甲基化 连作 甲基化敏感扩增多态性 液相色谱-质谱法 -
细胞膜色谱法与液相色谱-质谱联用筛选佛手的活性成分
目的从佛手中筛选对主动脉血管有舒张作用的有效成分。方法采用大鼠血管平滑肌细胞膜色谱模型(VSM/CMC)筛选，液相色谱-质谱(LC/MS)离线分析，并结合离体药理实验确定佛手舒张血管的有效成分。结果佛手柑内酯是佛手中作用于血管的活性成分，药理实验结果表明其具有舒张血管作用，化合物在VSM/CMC的保留特性和其药理作用有显著相关性。结论 VSM/CMC 模型可以反映化合物与细胞膜及膜蛋白(包括受体)的相互作用；VSM/CMC 和LC/MS技术联用，为从天然产物中快速寻找新的活性成分提供了途径。
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HPLC-MS分析薏苡仁油中的甘油三酯成分
目的:对薏苡仁油中的甘油三酯成分进行定性分析研究.方法:采用高效液相色谱-大气压化学电离-质谱法(HPLC-APCI-MS).实验条件:正离子检测模式,喷雾电压3 000 V,毛细管温度250℃,APCI源温度400℃,corona电流4μA.鞘气(高纯液氮)压力35 KPa.质谱扫描范围为300～900 amu,扫描时间1 s,Q1宽度为0.7.液相色谱的固定相为Zorbax Extend C18柱(4.6 mm×250mm,5μm).流动相为二氯甲烷-乙腈(35:65),流速1 mL·min-1.柱温25℃.结果:共鉴定出12种甘油三酯.结论:此测定结果可作为薏苡仁注射液指纹图谱中组分的定性依据.
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伊伐布雷定及去甲伊伐布雷定的血药浓度测定及初步药动学研究
目的：建立高效液相色谱-质谱（HPLC-MS/MS）法测定人血浆中伊伐布雷定及去甲伊伐布雷定浓度并用于人体药动学研究。方法血浆样品处理均采用乙腈沉淀蛋白法，以地西泮为内标。质谱条件均采用电喷雾离子源（ESI）、正离子和多反应离子监测（MRM）模式进行检测。结果本方法伊伐布雷定线性范围为0.0967～145.0500 ng/ml，r＝0.9971，低定量浓度为0.0967 ng/ml，去甲伊伐布雷定线性范围为0.0505～30.2700 ng/ml，低定量浓度为0.0505 ng/ml， r＝0.9975。两者日内、日间RSD均＜15%。提取回收率为＞78.5%。结论该方法简单、灵敏、可靠，适用于伊伐布雷定及去甲伊伐布雷定人体药动学研究。
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急性胰腺炎患者尿液代谢组学分析
目的 检测病情严重程度不同的急性胰腺炎(AP)患者尿液小分子代谢物谱,筛选对AP及其严重程度具有潜在诊断价值的差异代谢物.方法 收集苏州大学附属第一医院65例AP患者,其中中、重症AP(MSAP+ SAP) 29例,轻症AP(MAP) 36例,以25名健康志愿者作为对照组.采用液相色谱与质谱(LC-MS)结合方法检测AP患者及健康对照者尿液中小分子代谢物.采用多元统计分析,构建主成分分析(PCA)及偏小二乘-判别分析(PLS-DA)模型并验证,筛选差异代谢物.结果 PCA模型具有很好的可解释度(R2X＞0.5),各组尿液样本具有较好的区分聚类趋势,获得了较好的分类模型.各组间PLS-DA模型的对比使差异进一步凸显,各组样本呈明显的区分聚类,具有较高的可预测性(Q2＞0.7),PLS-DA置换检验图提示评估模型可靠有效.AP组与对照组对比,从尿液中筛选出17个差异代谢物,其中壬二酸、琥珀酸半醛、D-β-羟基丁酸、乙酰肉碱、当归酸、癸二酸、马尿酸7个差异代谢物整合对AP的诊断敏感性为100％,特异性为94％.对照组、MAP组、MSAP+SAP组两两对比,尿液琥珀酸半醛、D-β-羟基丁酸、乙酰肉碱、苹果酸、当归酸5个差异代谢物整合对SAP的诊断敏感性、特异性均为90％.结论 LC-MS代谢组学技术可以有效地识别不同严重程度AP患者尿液代谢物的变化,筛选出的差异代谢物对AP的诊断及分级具有潜在的临床应用价值.
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LC-MS分析乙酰吉他霉素组分及水解产物
目的应用LC-MS鉴定乙酰吉他霉素中组分及其水解产物.方法以0.1 mol·L-1乙酸铵溶液-乙腈(35:65)为流动相,采用Diamonsil C18柱,单四极杆质谱检测器,电喷雾正离子扫描,调节锥孔电压,对各色谱峰进行质谱分析.结果乙酰吉他霉素各组分可基本分离;根据所得到的有关相对分子质量以及碎片峰的信息,对乙酰吉他霉素各组分及其水解产物的结构进行了鉴别.发现国产乙酰吉他霉素的主要组分为乙酰吉他霉素A4,A5;A1,A3和A6,A7,与日本药局方中报道的主要组分相同,但国产乙酰吉他霉素还含有较多的乙酰吉他霉素A13.乙酰吉他霉素效价测定中的水解产物并非吉他霉素.结论LC-MS方法快速、灵敏,专属性强,适合用于多组分抗生素的组分分析.
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异硫氰酸基雷公藤内酯醇活性代谢物雷公藤甲素在大鼠体内的药代动力学
目的 观察大鼠单剂量静脉注射异硫氰酸基雷公藤内酯醇后雷公藤甲素的药代动力学.方法 将大鼠分为2组(每组5只),分别单次尾静脉注射异硫氰酸基雷公藤内酯醇低、高剂量(4.25,8.50 mg·kg-1).用LC - MS/MS法,检测大鼠血浆中雷公藤甲素的浓度,用BAPP 3.2软件计算药代动力学参数.结果 低、高剂量的主要药代动力学参数如下:Cmax分别为(12.36±1.09),(55.74±21.20) ng·mL-1,Tmax均为(2.0±0.0) min,t1/2口分别为(12.82±2.41),(13.73±2.84)h,AUC0-1分别为(245.93±42.50),(1034.45±471.76)ng·min·mL-1.结论在4.25 -8.50 mg·kg-1,雷公藤甲素的药代动力学表现出非线性消除特征.
关键词： 雷公藤甲素 液相色谱-质谱法 异硫氰酸基雷公藤内酯醇 药代动力学 -
复方盐酸二甲双胍片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度
目的研究复方盐酸二甲双胍片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度.方法用交叉给药方法,22名健康受试者单次口服盐酸二甲双胍片1000 mg加格列本脲片5 mg(参比制剂)或复方盐酸二甲双胍片(试验制剂:盐酸二甲双胍1000 mg,格列本脲5 mg).用HPLC法测定血清中盐酸二甲双胍浓度,用LC-MS方法测定血清中格列本脲浓度.用3P97程序以房室模型计算药代动力学参数.结果主要药代动力学参数,试验与参比制剂中盐酸二甲双胍的达峰时间tmax分别为(2.36±0.69),(2.41±0.70)h;Cmax分别为(1.42±0.28),(1.36±0.28)mg·L-1;t1/2分别为(5.18±1.62),(6.25±1.42)h;AUC0-24分别为(10.22±1.53),(10.07±1.81)mg·h·L-1.试验制剂的相对生物利用度为(99.3±13.2)%.参比与试验制剂中格列本脲的达峰时间tmax分别为(2.70±0.60),(2.60±0.50)h;Cmax分别为(181.1±58.3),(214.3±8.01)ng·mL-1;t1/2分别为(6.79±1.96),(6.67±1.92)h;AUC0-24分别为(0.99±0.28),(1.14±0.42)mg·h·L-1.试验制剂的相对生物利用度为(113.2±23.9)%.结论参比与试验制剂具有生物等效性.
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液相色谱-质谱联用法测定人血浆中氯吡格雷的浓度
目的 建立液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)测定人血浆中氯吡格雷的血药浓度.方法 以硫酸氢氯吡格雷-d4作为内标,色谱柱为Xterra(R)RP18(4.6 mm× 100 mm,3.5 μm),流动相为乙腈:水相(0.1％甲酸水溶液)=66:34,流速为1.0 mL·min-1.三重四极杆质谱仪进行多反应监测模式,电喷雾离子源正离子检测.生物样品预处理用乙腈直接沉淀蛋白.考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、稳定性、溶血实验及试验样品再分析实验.结果 线性范围为5.00 ～5000.00 ng·L-1,低定量下限为5.00ng·L-1;批内、批间精密度均在1.28％～9.86％,相对偏差(RE)在-6.19％～ 14.27％;低、中、高3种浓度氯吡格雷质控样本内标归一化的基质效应分别为(113.69±10.62)％,(104.96±5.23)％,(105.12±4.01)％;提取回收率分别为(103.07±5.75)％,(102.87±14.34)％,(97.76±2.04)％.采血时溶血不影响测定准确度;试验样品再分析实验准确度符合要求.结论 本方法是一种特异、快速、灵敏、稳定的HPLC-MS/MS,适用于人血浆中氯吡格雷的检测和药代动力学研究.
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液-质联用法测定乳腺癌患者体内他莫昔芬及其活性代谢物4-羟基三苯氧胺的含量
目的建立测定他莫昔芬及其主要代谢产物4-羟基三苯氧胺血药浓度的液相色谱-质谱方(LC-MS)法,并测定其在乳腺癌患者的血药浓度.方法18例乳腺癌患者服用他莫昔芬后,其血浆样品经异丙醇-正己烷萃取后,用LC-MS法测定血浆中他莫昔芬及其活性代谢物4-羟基三苯氧胺浓度.结果他莫昔芬、4-羟基三苯氧胺血药浓度分别在10～500,1～20ng·mL-1内,线性关系良好;血清浓度分别为(211.62±81.46),(4.78±1.52)ng·mL-1.结论此方法适于乳腺癌患者体内他莫昔芬浓度的监测.
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氨氯地平对贝那普利及其代谢物药动学的影响
目的:比较受试者口服复方贝那普利(含盐酸贝那普利10 mg和苯磺酸氨氯地平5 mg)和贝那普利(10 mg)后体内的药动学特征,研究贝那普利和氨氯地平之间的相互作用.方法:采用两制剂、两周期交叉实验设计,12例健康受试者自身对照,口服复方贝那普利或贝那普利.应用LC/MS/MS方法测定贝那普利的血药浓度,并采用WinNonLin软件计算药动学参数.结果:①复方和单方制剂中贝那普利原型的平均药动学参数如下:Cmax(150.3±68.4)和(154.1±79.9)μg·L-1,Tmax(0.53±0.18)和(0.46±0.16)h,AUC0-10 h(138.9±61.9)和(132.5±59.4)μg·h·L-1,t1/2(1.2±0.7)和(1.5±1.1)h.②复方和单方制剂中代谢物贝那普利拉的平均药动学参数如下:Cmax(146.7±79.8)和(119.3±50.9)μg·L-1,Tmax(2.0±0.9)和(1.6±0.5)h,AUC0-10 h(546.7±218.5)和(515.1±230.9)μg·h·L-1,各参数在两制剂间均不存在显著性差异.结论:氨氯地平对贝那普利在人体内的药动学过程没有显著影响.
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抗辐射药物E0703和代谢物E0703-酮在猕猴体内的药代动力学
目的 建立高效液相-质谱联用( HPLC-MS/MS)测定猕猴血浆中E0703和代谢物E0703-酮的方法,并探讨E0703和代谢物E0703-酮在猕猴体内的药代动力学.方法 猕猴单次po给予E0703 10 mg·kg-1后,于不同时间点采集血浆样品.血浆样品用乙腈沉淀蛋白,经HPLC分离,质谱采用ESI离子源正离子电离和多反应检测模式(MRM)测定E0703和E0703-酮的血药浓度,并计算相关药代动力学参数.结果 E0703和E0703-酮的检测线性范围均为0.625 ～ 500 μg·L -1,日内、日间精密度均小于7％,准确度在±10％以内.E0703和E0703-酮的峰浓度(Cmax)分别为14.7和96.9μg·L-1；曲线下面积(AUC)分别为173.0和1339.7 h·μg·L-1；消除半衰期(t1/2)分别为6.6和11.8 h.结论 该液质联用定量分析方法灵敏、快速、准确.E0703和E0703-酮的血药浓度-时间曲线相似,E0703在猕猴体内迅速转化为E0703-酮,但E0703-酮的cmax与AUC远高于E0703.
