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结直肠癌患者外周血 LAP +CD4+调节性T 细胞的分离纯化及功能鉴定

阳祖庆;江志远;钟武;王时俊;曹云飞

摘要: 目的:应用免疫磁珠分选法分离纯化结直肠癌患者外周血中 LAP +CD4+调节性 T 细胞(LAP +CD4+T),并对分选获得的目的细胞进行体外功能的初步研究。方法按照免疫磁珠两步法(阴性分选和阳性分选)分离结直肠癌患者外周血单个核细胞中的 LAP +CD4+T 细胞,流式细胞术(FACS)检测分选后细胞的纯度;台盼蓝染色检测细胞存活率;CCK-8掺入法检测其对 LAP -CD4+T 细胞的增殖抑制效应;ELISA 法检测体外细胞因子 TGF-β和IL-10表达。结果经免疫磁珠法分选获得的 LAP +CD4+T 细胞纯度为(95.16±2.11)%,台盼蓝染色细胞存活率为(93.64±1.33)%。CCK-8掺入法检测结果显示 LAP +CD4+T 细胞干预后 LAP -CD4+T 细胞生长明显受到抑制(P =0.000);ELISA 结果显示 LAP +CD4+T 细胞较 LAP -CD4+T 细胞分泌更高浓度的细胞抑制因子 TGF-β和 IL-10(P =0.000)。结论免疫磁珠法分选结直肠患者外周血中 LAP +CD4+T 细胞具有高效、快捷、纯度高等优点,且不损伤细胞活性。

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