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多重免疫缺陷NOD/SCID小鼠CD3+DX5+细胞亚群与妊娠结局的关系
NOD/SCID小鼠具有T、B和自然杀伤(NK)细胞功能多重免疫缺陷.尽管如此,已证实在NOD/SCID小鼠体内仍残存一定量的NK细胞,具有一定的自然杀伤功能及残存的T细胞功能[1].NKT细胞是一类同时具有T和NK细胞特征和功能的细胞.虽然数量很少,但因其兼有双重功能,而具特殊意义.CD3和DX5分别是成熟T细胞和NK细胞表面广泛表达特异性标志物[2].本实验对NOD/SCID小鼠脾脏、腋下淋巴结(LN)和胎盘中NKT细胞(CD3+DX5+)的构成比和功能等进行初步研究,并与无免疫缺陷的BALB/c小鼠进行比较,研究NKT细胞亚群在妊娠免疫耐受等生理过程中的潜在意义.
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TLR3参与poly(I-C)所致流产的作用
目的研究Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)在poly(I-C)诱发小鼠流产中的潜在作用.方法多聚次黄苷酸-胞苷酸[polyinosinic-polycytidylic acid,poly(I-C)]是一种双链RNA,腹腔注射时能够诱发小鼠流产.在预先用单抗阻断或不阻断TLR3情况下,注射poly(I-C)建立小鼠诱发性流产模型,应用流式细胞术分别检测CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率.结果不用抗TLR3抗体预处理,单用poly(I-C)刺激同种异基因交配模型BALB/c×C57BL/6,可使CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率均显著升高.但是,应用抗TLR3抗体预处理的雌鼠,用poly(I-C)刺激时上述百分率不改变.与此相应,poly(I-C)刺激可显著增高胚胎吸收率,而抗TLR3抗体预处理可消除这种作用.结论poly(I-C)与TLR3结合可能对母-胎界面NK细胞活化至关重要,并可促进小鼠胚胎吸收.
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NOD/SCID孕鼠脾脏和胎盘CD45+细胞内细胞因子的表达
目的:研究NOD/SCID孕鼠胚胎吸收率(Resorption rate,RR)与母-胎界面局部免疫状况的关系.方法:计算并比较孕13.5天同基因妊娠NOD/SCID×NOD/SCID小鼠和非免疫缺陷的BALB/c×BALB/c小鼠的RR,并采用4色流式细胞术检测NOD/SCID小鼠非孕期和孕13.5天脾脏和胎盘细胞内细胞因子的表达状况,以明确其与妊娠耐受相关的淋巴细胞功能亚群.结果:NOD/SCID小鼠的RR与对照组BALB/c小鼠相比无显著差异.与此相应,虽然能够证实NOD/SCID小鼠具有多重免疫缺陷,但是孕期母-胎界面多种功能性细胞亚群的百分率发生自发性改变.结论:NOD/SCID小鼠脾脏和胎盘某些细胞百分率的自发性改变可能对妊娠结局有利.
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NOD/SCID小鼠胎盘DX5+CD25+细胞水平
为了研究胎盘DX5+CD25+细胞在维持母-胎耐受状态中的潜在作用.采用流式细胞术检测免疫功能正常的BALB/c和免疫缺陷的NOD/SCID小鼠外周血和胎盘DX5+CD25+细胞,评价这些细胞与小鼠妊娠预后的关系.结果:虽然NOD/SCID小鼠存在严重的免疫缺陷,但是其胚胎吸收率和平均每窝产仔数等生育力指标均基本正常,并且其孕13 d胎盘DX5+CD25+/DX5+细胞百分率与免疫功能正常小鼠相比无显著性差异,并均呈高百分率分布特征(约占DX5+细胞总数的90%).NOD/SCID小鼠胎盘中高百分率的DX5+CD25+细胞可能是正常生育力预后的免疫学基础.
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胎盘组织匀浆上清对BALB/c小鼠脾脏DC生物学特征的影响
目的 通过观察胎盘组织匀浆上清(PTHS)对小鼠脾脏树突状细胞(DC)生物学特征的影响,探讨妊娠免疫耐受的机制.方法 分离妊娠及正常BALB/C小鼠脾脏单个核细胞,诱导分化为树突状细胞,经PTHS作用后,流式细胞仪检测树突状细胞的表面标志和抗原摄取能力,MTT法检测其同种异基因淋巴细胞刺激能力,ELISA方法检测其产生的细胞因子水平.结果 妊娠小鼠脾脏树突状细胞的生物学特征与正常对照小鼠比较差异无统计学意义,而经PTHS作用后的妊娠小鼠及正常对照小鼠的脾脏CD11b+树突状细胞明显降低,而CD8α+树突状细胞明显增高(P＜0.01)；树突状细胞的抗原摄取能力及刺激同种异基因的淋巴细胞反应的能力也明显低于正常小鼠(P＜0.01)；PTHS作用后的树突状细胞产生较高水平的IL-10和较低水平的IL-12,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PTHS可向下调节BALB/c小鼠脾脏树突状细胞的生物学特征,可能与妊娠免疫抑制有关.
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脂多糖诱发的同基因妊娠BALB/c和NOD/SCID小鼠早产模型
目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制.方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激, 并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率.由于预实验显示预期的早产均发生于孕16 d, 因此, 实验中在早产发生之前处死小鼠, 收集每只孕鼠的胎盘.采用流式细胞术检测胎盘CD45+细胞表面TLR4、 CD80和细胞内TNF-α的表达率.结果:采用LPS可诱发BALB/c小鼠早产, 而NOD/SCID小鼠则对LPS的诱导有抵抗.经LPS刺激后, TLR4的表达在BALB/c和NOD/SCID小鼠均无显著改变, 但是两组小鼠CD45+CD80+细胞的百分率均升高.相反, LPS刺激后仅BALB/c小鼠CD45+TNF-α+细胞的百分率升高, 而NOD/SCID小鼠则否.通过预先阻断TLR4的表达可消除LPS对BALB/c小鼠CD80和TNF-α表达的影响, 并显著降低LPS诱发的早产率.结论:虽然LPS未能改变TLR4的表达, 但是二者相互作用, 可激发CD45+CD80+细胞的动员, 导致炎性细胞因子产生增多, 并终导致早产.BALB/c和NOD/SCID小鼠对LPS刺激的敏感性存在差异, 提示NOD/SCID小鼠缺乏功能正常的T细胞和NK细胞, 可能是这种小鼠对LPS诱发的早产有抵抗的原因之一.
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Toll样受体3参与双链RNA对小鼠妊娠结局的影响
目的:探讨Toll样受体3(TLR3)与双链RNA(dsRNA)相互作用对BALB/c和NOD/SCID小鼠妊娠结局的影响.方法:比较经过和未经预先TLR3阻断条件下同基因妊娠的BALB/c和NOD/SCID小鼠在dsRNA刺激后的胚胎吸收率(RR),并采用流式细胞术检测CD45+TLR3+细胞和CD45+CD80+细胞在CD45+细胞群中、以及CD8α+CD80+细胞在CD8α+细胞群中的百分率.结果:在dsRNA刺激下BALB/c小鼠RR显著升高,而对NOD/SCID小鼠无显著影响.BALB/c小鼠胎盘CD45+细胞群中TLR3表达率升高,并伴有CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞百分率的升高.另可检测到CD45+细胞内IL-2表达率增高,而IL-10表达率下降;而在NOD/SCID模型中未观察到这种趋势.阻断TLR3能消除dsRNA对BALB/c小鼠胚胎排斥的诱导作用,并同时降低CD45+细胞群中CD80的表达率.结论:dsRNA与TLR3的相互作用可能参与CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞的动员,随后母-胎界面IL-2表达增强,而IL-10表达减弱,终导致胚胎被排斥.dsRNA引起的胚胎排斥过程可能需要具有正常功能的T细胞和NK细胞参与.
