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hCGβ-C3d3融合蛋白在乳酸杆菌的表达及鉴定
目的 探讨融合基因人绒毛膜促性腺激素(hCG)β-C3d3在干酪乳酸杆菌有效表达,为研究携hCGβ-C3d3融合基因的乳酸杆菌直接黏膜免疫奠定基础.方法 用分子生物学技术构建质粒pIlac.hCGβ-C3d3,电穿孔转化干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)CECT 5276,挑选转化后的耐药菌落,在含红霉素的MRS培养基中培养,0.5%乳糖诱导后,在不同时间取上清,化学发光法检测hCGβ,免疫细胞化学鉴定融合蛋白.结果 经测序证实目的基因构建正确.免疫化学发光测定显示,转化成功的重组干酪乳酸杆菌在乳糖的诱导下可分泌hCGβ.免疫细胞化学鉴定显示hCGβ与C3d3融合成功.结论 实现了重组乳酸杆菌Lb.hCGβ-C3d3分泌性表达融合蛋白hCGβ-C3d3.
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表达hCGβ的重组乳酸杆菌经阴道免疫小鼠后的体液免疫应答
目的用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经阴道黏膜途径免疫不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答及机制.方法用108、109、1010个重组乳酸杆菌Lb hCGβ经阴道黏膜免疫6～8周龄雌性BALB/c和C57BL/6小鼠.3周后用相同剂量加强免疫一次.间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液中抗hCGβIgG和IgA抗体滴度.分离免疫小鼠脾、子宫、阴道黏膜的淋巴细胞,流式细胞仪分析其中B和T细胞的增殖情况,ELISPOT分析分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞的克隆数.结果对不同品系小鼠黏膜接种109、1010 Lb hCGβ可诱导相近的免疫应答;而108诱导的抗体滴度较低.在加强免疫后,109和1010Lb hCGβ诱导的抗血清中和hCGβ抗原的能力＞100ng/ml.Lb hCGβ阴道黏膜免疫后T和B细胞增殖;脾脏、子宫及阴道内均存在抗hCGβIgG及IgA抗体分泌细胞.结论重组乳酸杆菌活疫苗Lb hCGβ可经阴道黏膜免疫诱导有效的免疫应答,产生的应答与免疫剂量呈正相关.黏膜局部及全身T和B细胞克隆增殖;子宫及阴道内抗hCGβIgG和IgA分泌细胞可能是Lb hCGβ阴道黏膜免疫诱导体液免疫的主要来源.
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重组乳酸杆菌Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔免疫BALB/c小鼠的抗生育潜能
目的:探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能.方法:用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌Lb.hCGβ和Lb.hCGβ-C3d3 以两种剂量(109个和1010个)经鼻腔滴注接种6～8周龄雌性BALB/c小鼠.3周后用相同剂量加强免疫一次.于初次免疫后的第6、7、8周收集血清,分别培养MLTC-1、BeWo细胞;化学发光法检测培养上清中孕酮或hCGβ水平;免疫荧光观察抗血清处理后BeWo细胞的融合情况.结果:用1010个Lb.hCGβ-C3d3滴鼻免疫BALB/c小鼠产生的抗血清能显著抑制hCG刺激MLTC-1分泌孕酮,明显抑制BeWo细胞分泌hCGβ及细胞融合.结论:重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔接种诱导的hCGβ抗体可拮抗hCGβ生物学功能,并干扰滋养细胞功能,因此具有抗生育潜能.
