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黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2信号通路对PC12细胞OGD/R损伤的保护机制研究
目的:探究黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)对大鼠嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma 12,PC12)细胞缺氧缺糖复供(oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R)损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)及B细胞淋巴瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)PI3K/Akt/Bcl-2信号通路的机制研究.方法:体外培养PC12细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组(OGD/R),尼莫地平阳性对照组(5μmol·L-1)和黄芪甲苷组(1.00、0.10、0.01μmol·L-1),除空白组外其余各组均建立体外PC12细胞OGD/R模型.CCK-8试剂盒法检测PC12细胞存活率;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的蛋白表达情况.结果:黄芪甲苷提高PC12细胞OGD/R损伤的细胞存活率,降低LDH漏出量和细胞凋亡.黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达.PI3K/Akt通路的抑制剂LY2940002能抑制黄芪甲苷对OGD/R损伤的PC12细胞中凋亡相关蛋白的影响.结论:黄芪甲苷对OGD/R损伤的PC12细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2信号通路有关.
关键词： 黄芪甲苷 PC12 OGD/R PI3K/Akt/Bcl-2信号通路 神经保护 -
丹灯通脑胶囊含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用
目的 研究丹灯通脑胶囊含药脑脊液对缺糖缺氧再复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用.方法 SD大鼠每日灌胃给予丹灯通脑胶囊(490 mg/kg)2次,连续4d,以制备含药脑脊液,原代培养大鼠BMECs,并对其进行Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定.然后,利用倒置显微镜观察BMECs形态,CCK-8法观察细胞活力,通过测定跨内皮细胞电阻(TEER)来评价BMECs通透性变化,取细胞上清检测BMECs总一氧化氮(N0)和内皮素1 (ET-1)水平,以及BMECs组织型纤溶酶原激物(tPA)、纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)水平.结果 含药脑脊液可显著对抗OGD/R所造成的损伤,明显改善BMECs形态.与模型组比较,含药脑脊液组细胞活力显著升高,TEER值显著增加,细胞通透性降低,细胞培养上清液中总NO、tPA水平明显增加,ET-1、PAI-1是水平显著降低.结论 丹灯通脑胶囊含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用.
