首页 > 文献资料
-
PI3K/Akt信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳上调线粒体融合蛋白中的作用
目的 评价1-磷酯酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳(CO)上调线粒体融合蛋白表达中的作用.方法 将肺泡上皮细胞用含10％胎牛血清的1％青链双抗F12K完全培养基于37℃、5％CO2的培养箱中培养,采用随机数字表法分为10组(n=5):对照组(C组);内毒素组(L组)向培养基中加入10 μg/ml脂多糖(LPS);LPS+外源性CO释放剂CORM-2组(L+CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+PI3K抑制剂LY294002组(L+ LY组)向培养基中加入25 μmol/LLY294002,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+外源性CO释放剂CORM-2+ PI3K抑制剂LY294002组(L+CO+LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002,1h后向培养基中加入CORM-2 100μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+无活性的CO释放剂iCORM-2组(L+iCO组)向培养基中加入iCORM 100 μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+二甲基亚砜(DM-SO)组(L+D组)向培养基中加入等浓度DMSO,1h后加入1μg/ml LPS;外源性CO释放剂CORM-2组(CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L;PI3K抑制剂LY294002组(LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002;外源性CO释放剂CORM-2+PI3K抑制剂LY294002组(CO+LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002,1 h后向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L.孵化24h后收集细胞,检测MDA含量和SOD活性,采用Western blot法检测血红素氧合酶-1(HO-1)、磷酸化Akt(p-Akt)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、Mfn2和视神经萎缩蛋白1(OPA1)的表达.结果 与C组比较,L组、L+CO组、L+LY组、L+CO+LY组、L+iCO组、L+D组MDA含量升高,SOD活性降低,L组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调(P＜0.05);与L组比较,L+CO组MDA含量降低,SOD活性升高,L+LY组MDA含量升高,SOD活性降低,L+CO组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调,L+LY组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达下调(P＜0.05);与L+CO组比较,L+CO+LY组MDA含量升高,SOD活性降低,HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达下调(P＜0.05).结论 内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时CO上调线粒体融合蛋白表达的机制与激活PI3K/Akt信号通路有关.
关键词： 1-磷酯酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 内毒素类 一氧化碳 肺泡 上皮细胞 线粒体蛋白质类 -
CD3单抗和淋巴细胞功能相关抗原-1对狼疮肾炎外周血单个核细胞的共刺激作用
目的:探讨CD3单抗(mAb)和淋巴细胞功能相关抗原-1单抗(LFA-1mAb)对狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)的共刺激作用. 方法:29例LN患者被分为活动期(n＝14)和非活动期(n＝15),以12例健康献血员为对照,观察CD3mAb或(和)LFA-1mAb共刺激及阻断1-磷酯酰肌醇3-激酶(PI3-K)对体外培养96 h后PBMC增生和IL-2产生的影响.PBMC提取采用Ficoll密度梯度离心法,细胞增生实验采用3H-TdR掺入法,IL-2测定采用ELISA法. 结果:PBMC培养96 h后,自然生长的LN非活动期和活动期PBMC 3H-TdR掺入量和IL-2合成与正常对照无明显差异(P值均＞0或0.05);与自然生长的PBMC相比,CD3mAb单独处理增加了LN非活动期(P值均＜0.05)和活动期(P值均＜0.05)PBMC 3H-TdR掺入量和IL-2合成.而单独CD3mAb对正常对照PBMC 3H-TdR掺入量和IL-2合成没有影响(P值均＞0.05).与CD3mAb单独处理组相比,CD3mAb和LFA-1mAb共刺激均增加了LN活动期(P值均＜0.05)和非活动期(P值均＜0.05)及正常对照(P值均＜0.05)PBMC 3H-TdR掺入量和IL-2合成;与对照组相比,CD3mAb和LFA-1mAb共刺激后活动期(P值均＜0.01)和非活动期(P值均＜0.01)PBMC 3H-TdR掺入量和IL-2合成均增加,但活动期效应明显强于非活动期(P＜0.01).PI3-K特异抑制剂Wortmannin(WT)的加入明显抑制了CD3mAb和LFA-1mAb共刺激诱导的PBMC增生和IL-2的分泌效应(P＜0.01,P＜0.01). 结论:CD3和FLA-1对狼疮肾炎PBMC具有共刺激作用,这种共刺激作用可能参与了狼疮肾炎T、B细胞的异常活化,阻断共刺激传递信号分子PI3-K则能抑制CD3和LFA-1介导的共刺激作用.
关键词： 狼疮肾炎 共刺激 淋巴细胞功能相关抗原-1 1-磷酯酰肌醇3-激酶
