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MicroRNA-93在骨肉瘤组织中的表达及其意义
目的:分析MicroRNA-93(miR-93)在骨肉瘤组织中的表达,探讨其对骨肉瘤细胞的增殖及细胞周期的影响.方法:采用TagMan MGB探针法定量分析38例骨肉瘤组织及对应软骨组织中miR-93的表达;构建miR-93过表达载体,并合成miR-93的反义核苷酸序列,分别转染骨肉瘤细胞U2-OS和MG-63.采用MTT比色法检测骨肉瘤细胞增殖的改变情况,利用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞周期的变化情况.结果:在38例骨肉瘤标本中,65.8％(25/38)的骨肉瘤组织miR-93表达明显高于对应软骨组织(P＜0.05).miR-93过表达载体可以促进骨肉瘤细胞的生长,使细胞周期G0/G1期明显降低,而S期比例明显增加;反义miR-93转染骨肉瘤细胞U2-OS和MG-63后,miR-93的表达明显降低,U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和C2/M期细胞的比例下降.结论:miR-93在骨肉瘤组织中表达明显上调,其可以通过调节细胞周期中G1/S期的转换而影响骨肉瘤细胞生长.
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microRNA-93靶向调控Rho相关激酶2/LIMK/Cofilin通路影响骨癌痛小鼠痛行为
目的 观察microRNA-93(miR-93)及Rho相关激酶(rho associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)通路对小鼠骨癌痛(bone cancer pain,BCP)行为的影响并探讨其潜在机制.方法 将C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为对照组(Control组)、假手术组(Sham组)及BCP组、BCP+PBS组、BCP+Y-27632(ROCK抑制剂)组,每组13只.建模前1d及建模后3、5、7、10、14 d进行动物痛行为学评估,观察小鼠对机械和热刺激的反应.建模后第14天处死小鼠,取术侧L4～L6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG),SYBR Green实时荧光定量PCR法观察miR-93表达变化,双荧光素酶实验检测miR-93对ROCK2基因的靶向调控.Western blot法观察ROCK2、LIMK(LIM domain kinase,LIMK)和Cofilin蛋白在DRG神经元中表达.结果 C57BU6J小鼠股骨接种NCTC2472细胞后,患侧后肢分别在第5、7天开始出现明显的触诱发痛[Sham组(6.81±1.04)g,BCP组(5.12±0.47)g]和热痛过敏[Sham组(11.75±1.46)s,BCP组(7.61±1.07)s],并呈进行性加重(P＜0.05);BCP组小鼠miR-93表达随疼痛加重呈时间依赖性降低,而ROCK2表达呈时间依赖性增加(P＜0.05),进而激活LIMK/Cofilin通路.双荧光素酶实验证实miR-93可与ROCK2 mRNA 3'-UTR直接结合,从而发挥对ROCK2转录后翻译的抑制作用(P＜0.05).鞘内注射ROCK抑制剂能有效缓解小鼠触诱发痛[BCP+PBS组(3.43±0.89)g,BCP+Y-27632组(5.74±1.02)g]和热痛过敏[BCP+PBS组(5.48±1.03)s,BCP+Y-27632组(9.82±1.24)s],同时抑制通路主要因子ROCK2、磷酸化-LIMK (phospho-LIMK,p-LIMK)、磷酸化-Cofilin (phospho-Cofilin,p-Cofilin)的表达(P＜0.05).结论 小鼠BCP疼痛过程中miR-93表达降低,进而激活ROCK2/LIMK/Cofilin通路,鞘内注射ROCK抑制剂可抑制该通路的活化,缓解小鼠BCP症状.
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microRNA-93在胃癌中的表达及其临床意义
目的 探讨microRNA-93在胃癌中的表达情况及其与临床病例特征的相关性.方法 提取60例胃癌及其相应正常胃黏膜组织标本的总RNA,采用RT-qPCR方法检测microRNA-93的相对表达量,并分析其与临床TNM分期、淋巴结转移、分化程度以及肿瘤治疗疗效和预后等临床病理因素的关系.结果 胃癌组织与癌旁正常组织比较,microRNA-93在胃癌组织中表达上调,而且其表达与TNM分期和淋巴结转移有显著相关性(P＜0.05).以相对表达量≥2.0为高表达为界限,进一步的多因素分析发现TNM分期、淋巴结转移、microRNA-93的表达与患者的预后显著相关(P＜0.01).microRNA93的高表达降低了患者的疗效.结论 microRNA-93在胃癌组织中高表达,尤其是晚期转移性胃癌,提示microRNA-93在胃癌中是一种重要的癌基因.microRNA-93可能作为胃癌诊断和预后判断的分子标志物.
关键词： microRNA-93 胃癌 预后 TNM分期 淋巴结转移 -
MicroRNA-93在宫颈癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响
目的 探讨microRNA-93(miR-93)在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响.方法 收集2014年1月-2014年7月中南大学湘雅医院有完整病历资料的41例宫颈癌患者组织标本及对应癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织中miR-93表达水平;采用脂质体转染法将miR-93模拟片段(mimic)转染入宫颈癌Hela细胞,恢复细胞内miR-93表达;活细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞术检测miR-93对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响;Transwell小室法检测其对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测Hela细胞中上皮生长因子受体(EGFR)及其下游蛋白的表达量变化.结果 41例宫颈癌患者肿瘤组织中miR-93表达量(0.048±0.013)低于癌旁组织(0.113±0.025),差异有统计学意义(P=0.026);转染miR-93模拟片段后,宫颈癌Hela细胞中miR-93表达恢复;与对照组和空白组比较,实验组宫颈癌细胞增殖能力下降(P =0.004),早期凋亡比例增加(P =0.032),侵袭(P=0.003)和迁移能力下降(P=0.003);过表达miR-93的Hela细胞EGFR及下游的p-AKT表达下降(P=0.005),而总AKT蛋白无明显变化(P =0.372).结论 miR-93在宫颈癌组织中的表达量下降,恢复其在宫颈癌细胞中的表达能够明显抑制其细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制部分与miR-93抑制宫颈癌细胞EGFR/AKT信号通路活性有关.
关键词： 宫颈癌 microRNA-93 EGFR/AKT信号通路 生物学行为
