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锌指基因ZFP580在大鼠心肌缺血损伤中的表达
[目的]观察大鼠ZFP580基因在急性心肌缺血的不同时期的表达变化,以初步探讨锌指基因ZFP580在心肌缺血损伤中的作用.[方法]腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠急性心肌缺血模型,分别于ISO注射后1 h、24 h取材,对照组腹腔注射等量生理盐水.观察心肌形态学改变,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)的含量,半定量RT-PCR及免疫组化方法分析ZFP580mRNA及蛋白水平的表达变化.[结果]ISO处理组大鼠心肌组织广泛缺血损伤,血清LDH、CK含量明显升高(P<0.05),心室肌ZFP580 mRNA表达下调(P<0.05),免疫组化染色阳性细胞百分率明显降低,以ISO注射1 h后变化更为明显.[结论]ZFP580是心肌缺血损伤的早期调控基因之一,其表达下调可能参与了心肌缺血损伤的形成.
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ZFP580基因过表达对大鼠骨髓源性内皮祖细胞分化的影响
[目的]内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)参与血管内皮修复及血管新生,EPCs分化受多种转录因子调控网络的影响,本实验旨在研究新型C2H2锌指蛋白基因ZFP580对EPCs分化作用的影响.[方法]密度梯度离心法,分离培养大鼠骨髓源性EPCs,免疫荧光染色鉴定EPCs;腺病毒转染过表达ZFP580的EPCs,QPCR及Western blotting检测ZFP580对EPCs分化的影响.[结果]细胞培养至7d时,Dil-acLDL/FITC-UEA-I双阳性细胞约占87.39％±2.98％.证实所培养细胞为EPCs.腺病毒转染技术获得过表达ZFP580的EPCs,ZFP580基因过表达促进成熟内皮表型CD31和vWF的表达.[结论]ZFP580基因过表达促进EPCs向成熟血管内皮细胞分化,提示ZFP580基因在EPCs分化过程中起重要的调控作用.
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锌指蛋白ZFP580在低剪切应力诱导的动脉粥样硬化斑块中的表达
[目的]通过观察由低血流剪切应力诱导的小鼠颈总动脉粥样硬化斑块中锌指蛋白ZFP580的表达,探讨其在动脉粥样硬化病变中的作用.[方法]建立颈总动脉局部狭窄动物模型,HE染色观察局部狭窄血管远心端的形态学改变,RT-PCR方法检测动脉组织中ZFP580mRNA的表达,免疫组织化学染色观察锌指蛋白ZFP580在病变处的表达.[结果]小鼠左颈总动脉局部狭窄2周后,远心端血管内膜增厚(P＜0.05),且随处理时间的延长内膜增厚愈加明显(P＜0.01),处理3周后,可见明显的动脉粥样硬化斑块.BT-PCR及免疫组织化学染色发现病变动脉中ZFP580的表达较未处理侧明显升高(P＜0.01),且ZFP580阳性细胞多集中在内膜层.[结论]ZFP580可能在低剪切应力诱导的动脉粥样硬化斑块的形成及发展中发挥重要的调控作用.
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锌指基因ZFP580通过eNOS/NO信号通路促进EPCs分化的作用机制
[目的]探讨C2H2型锌指基因ZFP580调控EPCs分化的作用机制.[方法]分离、培养并鉴定大鼠骨髓源性EPCs;腺病毒转染技术获得过(低)表达ZFP580的EPCs;QPCR、Western blotting及体外血管新生实验检测ZFP580对EPCs分化及血管生成能力的影响;应用NO供体SNAP及eNOS抑制剂L-NAME探讨eNOS/NO信号通路在ZFP580调控EPCs分化过程中的作用.[结果]ZFP580过表达促进eNOS表达,同时成熟内皮细胞标志物CD31、vWF表达升高,体外血管生成能力增强,NO生物利用度及胞内cGMP含量显著升高;NO供体SNAP显著提高CD31和vWF蛋白表达水平及体外血管生成能力,而NOS抑制剂L-NAME则显著抑制ZFP580诱导的CD31和vWF蛋白表达水平及体外血管生成能力,并削弱ZFP580诱导的NO及胞内cGMP的表达.[结论]ZFP580可通过激活eNOS/NO途径诱导eNOS表达,提高NO活性及胞内cGMP含量,增加体外血管生成,促进EPCs向成熟ECs分化.
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siRNA腺病毒载体沉默ZFP580基因对EPCs介导的血管生成的影响
[目的]研究siRNA腺病毒载体沉默ZFP580基因对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)介导的血管生成的影响,初步探讨锌指转录因子ZFP580基因在血管生成中的生物学效应.[方法]分离培养并鉴定大鼠骨髓源性EPCs;ZFP580-siRNA腺病毒表达载体转染EPCs;QPCR及Western blotting检测EPCs中ZFP580基因的表达;应用体外血管生成实验,检测ZFP580基因对EPCs介导的血管生成能力的影响.[结果]分离的EPCs培养至7d时,免疫荧光示CD31、VEGFR-2表达阳性,CD45表达阴性,证实所分离培养的细胞是EPCs.ZFP580基因低表达可显著抑制体外血管生成.[结论]siRNA腺病毒载体沉默ZFP580基因可抑制EPCs介导的血管生成,转录因子ZFP580对内皮祖细胞的分化及血管生成过程中起着重要的调控作用.
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基于基因表达数据库的鼠ZFP580基因功能分析
基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)是美国国立生物技术信息中心(NationalCenter for biotechnology information,NCBI)在2000年7月首次公布的基因表达相关数据的公共贮存平台.2005年,NCBI等四家科研机构联合统计表明:GEO拥有代表100多种生物体的近10亿个单独的基因表达数据信息,每周有1000多个不同的用户访问GEO,整体GEO网站的访问次数每周已超过15000次.
