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载体表达小干扰RNA逆转卵巢癌的多药耐药
目的:探讨载体表达的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)逆转卵巢癌细胞多药耐药的可行性.方法:浓度梯度诱导法建立人卵巢癌阿霉素耐药细胞株OVCAR/AR;脂质体介导将MDR1特异性siRNA的表达载体(pSN/mdr1a和pSN/mdr1b)转染OVCAR/AR细胞;实时定量RT-PCR检测MDRl mRNA的表达;流式细胞术检测P-gp的表达,罗丹明试验检测P-gp的药物转运功能;MTT法检测OVCAR/AR细胞对化疗药的抵抗性.结果:转染pSN/mdr1a和pSN/mdr1b后,OVCAR/AR细胞的MDR1 mRNA和P-gp的表达均显著下降,P-gp的转运功能减少,OVCAR/AR细胞对阿霉素、泰素的耐药性逆转.结论:载体表达的siRNA可持久有效地抑制卵巢癌耐药细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达,并逆转其多药耐药.
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小干扰RNA抑制多药耐药基因表达并逆转耐药
目的探讨小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株MDRl基因的表达并逆转其多药耐药的功能.方法 2004年10月至2005年6月于山东省立医院中心实验室采用浓度梯度诱导法建立人卵巢癌阿霉素耐药细胞株OVCAR/AR.根据MDR1基因的编码区域设计了2个含19个碱基的MDR1基因特异性siRNA,脂质体介导下转染OVCAR/AR细胞.RT-PCR分析MDRl mRNA的表达;流式细胞术(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)的表达;MTT法检测OVCAR/AR细胞的多药耐药性.结果 MDR1特异性siRNA转染后,OVCAR/AR细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达减少,分别以转染后48h和72h下降著;转染mdr1a和mdr1b siRNA可不同程度地逆转OVCAR/AR细胞对阿霉素、泰素的耐药性,但对非P-gp介导耐药的顺铂无影响.结论阿霉素所致的卵巢癌细胞多药耐药与MDR1基因过度表达有关,体外实验中应用MDR1特异性siRNA能部分逆转OVCAR/AR细胞的多药耐药.
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靶向mdr1基因转录小发夹RNA重组质粒的构建和序列分析
目的构建针对多药耐药基因(mdrl)编码区的发夹状RNA重组质粒载体pshRNA-mdrl,并行序列分析,为下一步逆转肿瘤的多药耐药性打下基础.方法设计含19-21bp mdr1编码基因片段及中间以4个bp间隔的反向重复序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体pTZU6+1上,转化JM109菌株,提取重组质粒酶切鉴定并序列分析.结果将合成的DNA片段成功克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列.结论靶向mdrl基因发夹状RNA干扰重组质粒的成功构建,可进一步研究其对mdr1 mRNA转录的抑制,达到逆转肿瘤的多药耐药性的目的.
