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诱骗RNA靶向阻断RNA结合蛋白E2诱导K562细胞向粒系分化
目的 应用诱骗RNA(decoy RNA)靶向阻断RNA结合蛋白E2(hnRNP E2)调节CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)基因异常翻译的作用,诱导白血病细胞株K562细胞向粒系分化,并初步探讨其分子机制.方法 将已构建的hnRNP E2 decoy RNA表达质粒经阳离子脂质体的介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达细胞株,用RT-PCR和Western blot方法检测该细胞株C/EBPα和粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)的表达,通过瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态,免疫细胞化学法分析细胞粒系分化抗原CD13、CD15的表达.结果 筛选到稳定表达细胞株pG细胞,与未转染的K562细胞相比,其C/EBPα mRNA水平无改变,但相对分子质量42×103的C/EBPα蛋白(42kD-C/EBPα)水平升高了(49.7±5.5)%(P＜0.05);G-CSFR mRNA水平升高了(42.1±3.6)%(P＜0.05),其蛋白水半也.升高了(37.4±6.2)%(P＜0.05);细胞形态学方面观察到pG细胞出现中、晚幼粒细胞甚至成熟粒细胞的特征,且免疫细胞化学法检测显示粒系分化抗原CD13、CD15表达增高[阳性细胞百分比分别为(18.7±2.5)%和(15.2±2.6)%].结论 hnRNP E2 decoy RNA能够诱导K562细胞向粒系分化,G-CSF对其分化过程有促进作用,其作用机制可能与decoy RNA靶向阻断hnRNP E2,调节C/EBPαmRNA翻译,恢复42kD-C/EBPα表达,上调42kD-C/EBPα下游分化基因G-CSFR的表达有关.
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探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对32D-BCR/ABL细胞增殖的影响
目的:在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)由慢性期向急性期的过渡阶段伴随有多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的异常表达.本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA(decoy RNA)对32D-BCR/ABL细胞增殖的影响及其可能的分子机制.方法:用电转染方法将hnRNP E2诱骗RNA野生序列和突变序列的表达载体(pGD和pGM)转入32D-BCR/ABL细胞,用G418筛选出稳定表达诱骗RNA的细胞.锥虫蓝染色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力.FCM分析细胞周期,RT-PCR和Western印迹法检测下游CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein α,C/EBPα)和c-Myc的表达.结果:筛选出稳定表达野生型和突变型诱骗RNA 的32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞.野生型32DP210-pGD细胞与未转染32D-BCR/ABL细胞相比,其细胞增殖抑制率为(69.48±5.21)%,克隆形成能力明显减弱,细胞周期由G0/G1期向S期进展受阻;C/EBPα mRNA水平无改变,但在蛋白水平上42 ku-C/EBPα的表达增加(43.83±4.91)%;c-Myc mRNA水平下降(35.67±6.64)%,蛋白水平降低(30.91±3.84)%.突变型32DP210-pGM细胞与未转染32D-BCR/ABL的细胞相比,其上述各指标无明显差异.结论:hnRNP E2诱骗RNA能够抑制32D-BCR/ABL细胞的增殖,其机制可能是诱骗RNA阻断hnRNP E2和C/EBPα mRNA的结合,引起42 ku-C/EBPα表达增加,进而引起其下游靶基因c-Myc下调.
关键词： 白血病 髓样 慢性 多聚嘧啶区结合蛋白质 CCAAT增强子结合蛋白α 细胞增殖 诱骗RNA -
HnRNP E2诱骗RNA对白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制
背景与目的:BCR/ABL诱导多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的异常表达在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)急变中起着重要作用.本研究探讨hnRNP E2诱骗RNA(decoy RNA)对人白血病细胞K562增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法:构建能转录出hnRNP E2诱骗RNA的质粒载体,将其经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达的细胞,台盼蓝法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,并用RT-PCR和Western blot方法检测下游CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein α,C/EBP α)和c-myc的表达.结果:稳定表达诱骗RNA的K562细胞增殖受抑,增殖抑制率为(62.73±12.92)%;细胞周期阻滞于S期[稳定表达诱骗RNA细胞组(55.59±4.67)%,对照组(44.70±4.21)%,P＜0.05];C/EBPα mRNA无改变,但在蛋白水平42 ku-C/EBP α表达升高了(49.72±5.58)%;c-myc mRNA下降了(58.27±7.23)%,蛋白水平降低了(57.26±6.52)%.结论:hnRNP E2诱骗RNA能抑制K562细胞的增殖,其机制可能与诱骗RNA阻断hnRNP E2和C/EBPα mRNA的结合后,引起42 ku-C/EBPα表达升高有关.
关键词： 白血病 诱骗RNA K562细胞 多聚胞嘧啶结合蛋白E2
