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125b文献资料
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miR-125b靶向抑制Bak1表达对人髓系白血病细胞增殖的影响
目的 研究微小RNA 125b (miR-125b)在人急性髓系白血病(AML)中的作用,并探讨其对靶基因的调控机制.方法 采用CCK-8计数法检测miR-125b对人AML细胞系NB4、HL-60及人胚肾细胞系HEK-293T增殖的影响.用生物信息学方法预测miR-125b促进细胞增殖的潜在相关靶基因,构建用于鉴定miR-125b靶基因的报告基因载体,并与miR-125b小分子类似物共转染293T细胞,检测报告基因载体中荧光素酶活力.在NB4和HL-60细胞中验证miR-125b与其靶基因的关系.结果 miR-125b能显著促进人NB4和HL-60细胞恶性增殖,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);而对293T细胞没有明显影响.在线软件预测发现促凋亡基因Bcl-2拮抗因子1(Bak1)很可能是白血病细胞miR-125b潜在的1个靶基因;双荧光报告实验结果表明miR-125b能显著地抑制含3'-UTR的Bak1报告基因活性,荧光素酶活性下降53.8％(P＜ 0.01),而对含 3'--UTR突变位点的Bak1报告基因载体没有抑制作用.Western blot检测结果显示NB4和HL-60细胞过表达miR-125b,并显著抑制内源性Bak1的表达(P＜0.01).结论 Bak1是miR-125b在人AML中的一个靶基因.miR-125b很可能通过抑制Bak1表达来促进人AML细胞恶性增殖,从而在AML发病中起类似“癌基因”的作用.
