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补肺益肾方对单核细胞条件培养基刺激下肺泡上皮细胞炎症反应的影响
目的 观察补肺益肾方对单核细胞条件培养基刺激肺泡上皮细胞炎症反应的影响,探讨补肺益肾方治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的抗炎机制.方法 复制人髓系白血病单核细胞(THP-1)细胞株条件培养基刺激A549细胞炎症模型,分为空白对照组(20％空白兔血清)、模型组(20％空白兔血清+25.0％ THP-1细胞条件培养基)、核转录因子激活蛋白酶-1(AP-1)通路抑制剂T-5224组(20％空白兔血清+25.0％ THP-1细胞条件培养基+ 100 μmol/L T-5224)、补肺益肾组(20％含补肺益肾方兔血清+25.0％ THP-1细胞条件培养基).用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL-6、IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等细胞因子的含量,用硫代巴比妥酸(TBA)法检测上清液中丙二醛(MDA)含量,用羟胺法检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,用凝胶迁移率实验(EMSA)检测AP-1通路的活性.结果 与空白对照组比较,25.0％条件培养基作用24h、48 h A549细胞增殖活性均明显增加[吸光度(A)值:24 h为0.41±0.02比0.37±0.04,48 h为1.30±0.09比1.15±0.19];模型组IL-6、IL-8、TNF-α、MMP-9、MDA含量及AP-1表达均增多[IL-6(ng/L):35.00±3.63比23.15±1.72,IL-8 (ng/L):273.09±164.36比231.45±33.90,TNF-α (ng/L):51.61±9.51比28.87±3.34,MMP-9 (ng/L):442.85±78.86比235.60±14.62,MDA (μmol/L):6.90±0.11比6.01±0.12,AP-1表达(A值):2.260±0.062比1.000±0.000].MDA/T-SOD比值增大(4.43±0.05比3.96±0.06).与模型组比较,T-5224组IL-8 (ng/L:100.29±17.03)、TNF-α (ng/L:25.13±0.46)、AP-1表达(A值:1.38±0.02)、MDA/T-SOD比值(4.23±0.23)和补肺益肾组MMP-9 (ng/L:195.44±9.80)、MDA(μmol/L:5.86±0.30)、MDA/T-SOD (3.56±0.41)、AP-1表达(A值:0.76±0.01)均明显降低(均P＜0.05).结论 补肺益肾方可通过调控肺泡上皮细胞AP-1信号通路,以抑制炎症反应.
