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微小RNA-146a调控肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1和肿瘤坏死因子受体相关因子6的表达
目的 观察转染微小RNR-146a(miR-146a)对肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)表达的影响,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控机制奠定基础.方法 将体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为miR-146a模拟物(mimic)组和阴性对照组,分别加入50 nmol/L Pre-miR miR-146a前体和Cy3标记的Pre-miR阴性对照进行转染,转染24 h后收集细胞,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-146a、IRAK-1 mRNA、TRAF-6mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达.结果 miR-146amimic组miR-146a表达较阴性对照组上调了(24.55±6.14)倍(t=-6.643,P=0.003).细胞中IRAK-1和TRAF-6的mRNA表达分别为阴性对照组的(1.16±0.10)倍(t=2.701,P=0.054)和(1.19±0.16)倍(t=2.032,P=0.112).而IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达分别为阴性对照组的73.0％(t=-9.353,P=0.001)和64.1％(t=-6.839,P=0.002).结论 miR-146a mimic能成功转染肺泡巨噬细胞NR8383; miR-146a过表达后,能有效下调肺泡巨噬细胞中IRAK-1和TRAF-6的表达,其机制可能是在蛋白翻译水平的抑制.
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巴马小型猪冠状动脉微栓塞后白细胞介素-1受体相关激酶1、肿瘤坏死因子受体相关因子6及AU碱基富集区RNA结合因子1mRNA的表达及意义
目的 探讨巴马小型猪冠状动脉微栓塞(CME)后心肌组织白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6)及AU碱基富集区RNA结合因子1(AUF1)的动态表达情况及其意义.方法 将30只巴马小型猪分为假手术组(n=5)和CME组(n=25).CME组经微导管于左前降支中远端注入微栓塞球混悬液;假手术组注射等量生理盐水.将CME组均分为5组于建模后3h、6h、9h、12h、24 h进行观察;假手术组小型猪于6h后进行观察.光镜下观察各组心肌组织改变,并检测心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA表达.结果 建模后6h,CME组血管内均可见微栓塞球,周围出现微梗死灶.建模后6h,与假手术组比较,CME组心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA的表达水平均显著增加(P＜0.05).CME组心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA的表达水平都在建模后3h和6h升高,9h达高峰,12 h和24 h下降;与3h和24 h比较,CME组9h心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA的表达水平均显著增加(P＜0.05).结论 IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA高表达于CME后心肌组织,并呈现出明显的时间变化规律.
