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海马内注射淀粉样蛋白对大鼠海马细胞内钙稳态的影响
目的 研究海马内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)对大鼠海马细胞内钙稳态的影响.方法 将30只成年清洁级SD雄性大鼠按体重随机分为6组,每组5只.采用海马内注射方式染毒Aβ25～35,剂量分别为10、5、lμg/只,设立生理盐水组、假手术组和正常对照组.于术后14d,检测大鼠海马Ca2+-ATPase的活力及海马细胞内游离钙离子的浓度和海马内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平.结果 与生理盐水组相比,各Aβ25～35染毒组大鼠海马Ca2+-ATPase活力均降低,5、10μg Aβ25～35染毒组大鼠海马细胞内游离钙离子浓度和各Aβ25～35染毒组大鼠海马细胞内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)；且随着Aβ25～35染毒量的升高,大鼠海马Ca2+-ATPase活力呈下降趋势,海马细胞内游离钙离子的浓度和海马内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平均呈上升趋势.而假手术组、生理盐水组与正常对照组大鼠海马以上4个指标间比较,差异均无统计学意义.结论 Aβ25～35可以通过破坏大鼠海马细胞内钙稳态而发挥神经毒性作用.
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β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞Sorcin、RyR2mRNA基因表达的影响
目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ)对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的影响.方法 新生1-3天的Wistar大鼠,取其海马组织,原代培养8d后,用已老化过的Aβ25-35对海马神经细胞进行1μmol/L,10μmol/L和20 μmol/L剂量的染毒,培养24和48 h后分别观察海马神经细胞形态、和海马神经细胞内钙调节相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的基因表达水平.结果 随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,可发现随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,海马细胞出现细胞凋亡的比例增加,其中Aβ25-35 20 μmol/L染毒48 h培养海马细胞中出现了大量早期凋亡细胞和少量中期凋亡细胞.实时定量PCR结果显示,10 μmol/L Aβ5-35在对原代细胞染毒24和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量为(1.42±0.03)和(1.63±0.02),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20μmol/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24h和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量(2.11±0.05)和(2.23±0.05),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20 μmo]/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24和48h后RyR2mRNA的相对表达量为(1.64±0.03)和(1.95±0.03),表达显著高于对照组相(P＜0.05).结论 Aβ具有神经毒性,可抑制海马神经细胞的生长,可通过作用于钙调节相关蛋白的表达,诱发阿尔茨海默氏病(AD)的发生.
关键词： Aβ 原代培养海马神经细胞 Sorcin基因 RyR2基因 -
Sorcin过表达--白血病多药耐药的一种新机制
目的研究sorcin 基因与白血病多药耐药的相关性.方法用Northern Blot和Western Blot方法,检测人白血病耐药细胞株K562/A02及其野生型细胞株K562中sorcin基因和蛋白表达水平的差异.设计针对sorcin基因的反义寡核苷酸,通过脂质体将其导入K562/A02细胞,通过Western Blot方法检测转染前后细胞内sorcin蛋白表达的变化,运用MTT方法检测转染反义寡核苷酸后细胞对阿霉素敏感性的变化.结果 Northern Blot和Western Blot结果表明,K562/A02细胞中sorcin表达水平明显高于K562敏感细胞.将sorcin基因反义寡核苷酸转入K562/A02细胞后,细胞内sorcin蛋白表达明显下降,对阿霉素的敏感性提高.结论作为一种耐药相关基因,sorcin 参与了白血病多药耐药细胞耐药表型的形成,有望成为今后白血病耐药诊断和治疗的新靶点.
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复发/难治AML患者sorcin基因表达及意义
目的 研究复发/难治急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)基因表达及意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测65例AML患者(观察组),27例非白血病患者和健康人(对照组)sorcin基因表达水平.结果 观察组sorcin基因表达水平高于对照组(P＜0.001),其中复发/难治者高于初诊者和完全缓解(CR)者;AML各亚型sorcin基因过度表达存在差异,以M5阳性表达率高;观察组临床耐药者sorcin基因表达显著高于非临床耐药者(P＜0.001),且CR率显著低于非临床耐药者(P＜0.001).结论 sorcin基因过度表达与AML患者临床耐药密切相关,是影响预后的重要因素;sorcin可作为检测AML临床耐药和判断预后的指标之一.
