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miRNA-135b靶向作用于APC对三阴型乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响
目的 探讨miRNA-135b在多种乳腺癌细胞系中表达及靶向APC基因对三阴型乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法 通过实时荧光定量(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测miRNA-135b在正常乳腺细胞系Hs578Bst及乳腺癌细胞系Hs578T、MCF7、HCC1937、MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT-549和MDA-MB-468中的表达,选取其中两种高表达miRNA-135b的MDA-MB-231、MDA-MB-468为对象,根据处理方法,实验分3组:空白组(自然生长细胞)、阴性对照组(转染阴性对照试剂)、实验组(转染miRNA-135b抑制剂).采用RT-PCR及Western印迹检测APC基因的表达;Cell Counting Kit-8 (CCK-8)实验、Transwell体外侵袭实验检测乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力.结果 miRNA-135b在三阴型乳腺癌细胞系中的表达量均高,其中在MDA-MB-231细胞中阴性对照组和实验组分别0.97 ±0.13、0.42 ±0.03;MDA-MB-468细胞转染miRNA-135b抑制剂后,1.02±0.03、0.47±0.04;实验组中miRNA-135b的表达受到显著抑制,差异有统计学意义.实验组APC基因mRNA及其蛋白的表达显著上调,MDA-MB-231中阴性对照组和实验组分别为1.01±0.11、1.75±0.13(P=0.013,P=0.021),MDA-MB-468中(P=0.017,P=0.014);实验组细胞增殖活性明显受到抑制MDA-MB-231中(P=0.00),MDA-MB-468中(P=0.01);侵袭及迁移能力明显降低MDA-MB-231中(P=0.002,P=0.00),MDA-MB-468中(P=0.01,P=0.00).结论 miRNA-135b在多种三阴型乳腺癌细胞中呈高表达,可靶向抑制APC基因,促进三阴型乳腺癌细胞系MDA-MB-231及MDA-MB-468的增殖、侵袭及迁移.
关键词： 乳腺肿瘤 miRNA-135b APC CCK-8试验 Transwell试验 -
IL-18基因修饰人脐带间充质干细胞对乳腺癌细胞系增殖的影响
目的：建立携带白细胞介素18（IL-18）基因人脐带间充质干细胞（HUMSCs）株并探讨其对乳腺癌细胞增殖的影响。方法分离培养HUMSCs，慢病毒介导IL-18基因转染HUMSCs建立携带 IL-18基因人脐带间充质干细胞（ IL-18-HUMSCs ）株，半定量 RT-PCR 及 Western 印迹检测IL-18mRNA及蛋白表达情况。 Transwell体系共培养后第1、3、5天用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒检测MCF-7细胞增殖活力，绘制细胞生长曲线。结果 IL-18-HUMSCs能稳定高效表达IL-18基因，并有效抑制乳腺癌细胞增殖。其 IL-18 mRNA 相对表达量为：实验组（ IL-18-HUMSCs ）1.40±0.21，阴性对照组（NV-HUMSCs）0.59±0.09，空白对照组（HUMSCs）0.71±0.05；与各对照组比较，差异有统计学意义（F＝31.81，P＝0.001）。 IL-18蛋白相对表达量为：实验组（IL-18-HUMSCs）1.54±0.27，阴性对照组（NV-HUMSCs）0.57±0.04，空白对照组（HUMSCs）0.59±0.23；与各对照组比较，差异有统计学意义（ F＝22.32， P＝0.002）。共培养后第5天，乳腺癌细胞增殖受到明显抑制。结论HUMSCs是IL-18基因高效稳定表达载体，IL-18-HUMSCs可有效抑制乳腺癌细胞增殖。
