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结直肠癌组织中PCDH10、RASSF1A基因启动子甲基化状态
目的 检测结直肠癌(CRC)组织中原钙黏素蛋白10 (PCDH10)基因和Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区的甲基化状态,探讨其与CRC发生发展的关系.方法 选取2007至2010年在贵州医科大学附属医院行手术治疗的75例CRC患者的肿瘤组织,应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测CRC组织及相应癌旁正常组织中PCDH10和RASSF1A基因启动子区的甲基化情况.采用x2检验分析PCDH10和RASSF1A甲基化的表达率及其与临床病理特征的关系.结果 PCDH10基因在CRC组织中的甲基化率为58.7％ (44/75),明显高于癌旁组织的22.7％(17/75)(P＜0.01);PCDH10甲基化与CRC患者的年龄、性别、病灶部位、Dukes分期、有无淋巴结转移等均无相关性(均P＞0.05).RASSF1A基因在CRC组织中的甲基化率为64.6％ (42/65),明显高于癌旁组织的15.4％ (10/65) (P ＜0.01),RASSF1A甲基化与CRC患者的年龄、性别、病灶部位均无相关性(均P ＞0.05),CRC Dukes高分期和淋巴结转移患者RASSF1A甲基化率高[92.9％ (26/28)比43.2％(16/37),92.9％ (26/28)比43.2％ (16/37),均P＜0.05].结论 CRC组织中PCDH10、RASSF1A基因呈高甲基化状态,可能是CRC发生机制之一.高分期的CRC具有更高的RASSF1A基因甲基化率,提示RASSF1A基因甲基化还可能与CRC的发展有关.
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PCDH10基因在结直肠癌组织中的表达
目的:检测结直肠癌组织及对应的癌旁正常组织中PCDH10基因表达mRNA水平及其启动子区域甲基化状态,探究该基因在结直肠癌发生发展中的作用.方法:选取2016-01~2017-02于佳木斯大学附属第一医院普外科直接行手术切除治疗的60例结直肠癌患者的肿瘤组织及对应的癌旁正常组织,采用甲基化PCR (MSP)和RT-PCR实验技术,检测两者组织中PCDH 10基因启动子甲基化状态和mRNA水平情况,并根据临床资料进行分析.结果:PCDH10基因在结直肠癌组织中见启动子明显异常甲基化,比例为53.3%(32/60),远高于癌旁组织8.3%(5/60),二者差异具有显著统计学意义(P<0.01);在结直肠癌组织中其mRNA表达只有8.3%(5/60),大多数表达沉默,而在癌旁组织中高表达90%(54/60),二者差异具有统计学意义(P<0.05);PCDH10基因异常甲基化与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小未见相关(P>0.05),与Dukes分期、分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05).结论:PCDH10基因在结直肠癌组织中表达大多数沉默,但其启动子异常甲基化显著,说明该基因可能在结直肠癌的发生、发展中具有抑制作用.
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PCDH10基因对子宫内膜腺样癌细胞抑制作用的研究
目的:研究PCDH10基因诱导子宫内膜腺样癌细胞凋亡的作用及相关机制.方法:将pcDNA3.1(+)PCDH10及pcDNA3.1(+)空质粒分别瞬时转染入子宫内膜腺样癌细胞系,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测PCDH10的表达;以MTT和细胞计数测定转染后细胞的增殖能力和生长数量;应用流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期.结果:子宫内膜癌细胞转染PCDH10后,细胞的PCDH10表达升高;细胞计数和MTT试验显示转染PCDH10后的子宫内膜癌细胞的生长数量明显减少,细胞增殖受抑制(P＜0.05);流式细胞凋亡率实验结果显示转染PCDH10后的子宫内膜癌细胞早期凋亡率增加;流式周期分析显示转染后的细胞G1期阻滞.结论:PCDH10基因在子宫内膜腺样癌的发生发展中起抑制作用;PCDH10基因促进对子宫内膜腺样癌细胞早期凋亡,使细胞在G1期受阻滞.
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PCDH10基因促进多发性骨髓瘤细胞凋亡及机制研究
目的 探讨PCDH10(protocadherin 10)基因诱导多发性骨髓瘤KM3细胞凋亡的作用及相关机制.方法 采用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1(+)PCDH10以及pcDNA3.1(+)空质粒稳定转染入人骨髓瘤KM3细胞,以未转染组和转染pcDNA3.1(+)空质粒组作为对照,通过RT-PCR和Westem blot检测PCDH10基因和蛋白的表达,应用MTT法检测PCDH10转染后细胞增殖能力;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;应用透射电镜观察细胞凋亡超微结构;应用Westernblot检测凋亡相关蛋白表达水平.结果 PCDH10转染KM3细胞后,PCDH10基因和蛋白表达水平均明显升高.MTT结果显示PCDH10转染后细胞增殖明显受到抑制(P＜0.05);流式细胞仪结果显示转染PCDH10基因的KM3细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);透射电镜下观察,PCDH10转染组细胞可以看到胞质空泡样变,核固缩以及明显的凋亡小体,对照组未见明显异常;Western blot结果显示PCDH10能降低Bcl-2的表达,促进P53、Fas的表达(P＜0.05).结论 PCDH10基因有促进多发性骨髓瘤细胞KM3凋亡作用.
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PCDH10基因在多发性骨髓瘤细胞中的作用
目的探讨PCDH10(protocadherin 10)基因对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制.方法采用脂质体将pcDNA3.1(+)PCDH10及pcDNA3.1(+)质粒稳定转染入骨髓瘤RPMI-8226细胞,分别为PCDH10转染组、空质粒转染组,未转染组作为对照.采用RT-PCR及Western blot检测转染前后PCDH10基因和蛋白的表达,应用MTT法检测转染前后细胞的增殖能力;应用Transwell小室实验检测转染前后细胞的迁移及侵袭能力;应用Western blot检测增殖、迁移和侵袭相关蛋白表达水平.结果PCDH10基因转染RPMI-8226细胞后,PCDH10在基因和蛋白水平均呈现高表达.MTT结果显示,PCDH10转染组增殖能力较对照组减弱;Transwell实验结果显示PCDH10能抑制瘤细胞的迁移、侵袭能力,PCDH10转染组迁移、侵袭的细胞数分别为(51.00 ±2.65)、(51.00±8.00)个,与对照组比较显著减少(P＜0.05);Western blot检测结果显示PCDH10基因可下调AKT、p-AKT、cyclinD1和MMP-9的表达(P＜0.05).结论PCDH10基因可能通过下调PI3K/AKT通路活性而抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226的增殖、迁移和侵袭.
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甲基化修饰致PCDH10基因在多发性骨髓瘤中沉默
目的 研究PCDH10基因在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者及细胞系KM3、RPMI-8226中的甲基化状态,分析甲基化对其沉默的影响.方法 常规骨髓穿刺术获取MM患者骨髓样本,培养骨髓瘤细胞系KM3、RPMI-8226,以增生性骨髓象骨髓样本作为对照.RT-PCR检测其中PCDH10基因表达水平,甲基化特异性PCR( methylation-sensitive PCR,MSP)法检测PCDH10基因甲基化状态,通过5-氮杂-2'-脱氧胞苷和组蛋白去乙酰化酶抑制剂[5-aza-2'-deoxycytidiue (Aza) and trichostatin A (TSA),A+T]处理MM细胞系,检测药物处理前后PCDH10甲基化状态及表达水平.结果 PCDH10基因在正常人群中表达,但在MM患者骨髓及细胞系中广泛低表达,且77.27％ (34/44)的MM患者PCDH10呈甲基化状态.PCDH10基因可经A+T试验逆转甲基化状态并恢复表达.结论 DNA甲基化可能在多发性骨髓瘤的PCDH10基因沉默中发挥作用,从而参与骨髓瘤的发生.
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原钙黏蛋白10(PCDH10)抑制BXPC-3胰腺癌细胞的增殖以及侵袭和迁移
目的 探讨原钙黏蛋白10(PCDH10)在胰腺癌细胞株中的表达情况以及生物学功能.方法 利用反转录PCR检测PCDH10在CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1、BXPC-3胰腺癌细胞以及HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞的表达情况.将质粒pcDNA3.1-PCDH10与质粒pcDNA3.1-vector通过脂质体转染至BXPC-3人胰腺癌细胞,转染后通过反转录PCR检测BXPC-3细胞中PCDH10 mRNA的水平、Western blot法检测其蛋白水平;CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖情况,膜联蛋白V-碘化丙啶双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,TranswellTM侵袭和迁移实验、划痕实验检测BXPC-3细胞的侵袭和迁移.结果 与正常胰腺导管上皮细胞相比较,PCDH10在CAPAN-1、PANC-1、BXPC-3胰腺癌细胞中表达明显下调.反转录PCR及Western blot法检测结果表明,转染pcDNA3.1-PCDH10的BXPC-3实验组细胞PCDH10表达明显高于转染pcDNA3.1-vector的对照组细胞.与对照组相比,过表达PCDH10后,BXPC-3细胞的增殖速度明显降低、克隆形成数明显减少;细胞凋亡率明显增加,细胞的侵袭、迁移能力明显降低.结论 PCDH10在胰腺癌细胞中表达下调,过表达PCDH10能够明显抑制BXPC-3胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并且诱导BXPC-3细胞凋亡.
