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糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白与炎症反应关系的研究进展
糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（GILZ）广泛地表达于各种细胞及组织中，有助于发挥糖皮质激素的抗炎效应和免疫抑制作用。 GILZ可抑制核因子κB、转录激活因子1及丝裂原活化蛋白激酶的激酶／细胞外信号调节激酶等炎症相关信号通路的活性，对巨噬细胞、树突细胞、内皮细胞、T淋巴细胞等炎性细胞的活性具有抑制作用。在慢性炎症反应中，GILZ的上调可抑制细胞因子和趋化因子的表达、白细胞的聚集和活化，并与类风湿关节炎等自身免疫性疾病密切相关。近年来对GILZ的研究众多，该文对GILZ与炎症反应相关的信号通路、细胞及相关疾病进行综述。
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糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白、Y-盒结合蛋白1和P-糖蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与化疗耐药的关系
目的 探讨上皮性卵巢癌中糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(GILZ)、Y-盒结合蛋白1(YB-1)和P-糖蛋白(P-gp)的蛋白表达,分析其与卵巢癌化疗耐药的关系.方法 2005年3月至2012年2月在大连医科大学第一、第二附属医院采用免疫组织化学SP法检测85例上皮性卵巢癌,30例卵巢良性肿瘤和12例正常卵巢组织中GILZ、YB-1和PGP的蛋白表达情况,并结合临床病理资料进行综合分析.结果 GILZ、YB-1和P-gp在上皮性卵巢癌中表达阳性率分别为51.8％、48.2％和47.1％,在卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中均未见表达,差异有统计学意义(P＜0.01).YB-1和P-gp在Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌中的表达高于Ⅰ～Ⅱ上皮性卵巢癌中的表达(P＜0.05).GILZ、YB-1和P-gp三者相关,GILZ与YB-1,r =0.344;P-gp与GILZ,r =0.437;P-gp与YB-1,r=0.570(P均＜0.01).44例GILZ蛋白阳性表达者中18例为化疗耐药,41例GILZ蛋白阴性表达者中6例为化疗耐药,差异有统计学意义(P＜0.05).41例YB-1蛋白阳性表达者中17例为化疗耐药,44例YB-1蛋白阴性表达者中7例为化疗耐药,差异有统计学意义(P＜0.05).40例P-gp蛋白阳性表达者中17例为化疗耐药,45例P-gp蛋白阴性表达者中7例为化疗耐药,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GILZ、YB-1和P-gp可能参与了卵巢癌的发生、发展过程.3种蛋白在卵巢癌化疗耐药中发挥一定作用,独立或联合检测可能预测化疗的敏感性.
关键词： 卵巢肿瘤 糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白 Y-盒结合蛋白1 P-糖蛋白 化疗耐药 -
靶向大鼠糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白siRNA腺病毒载体的构建及对L6细胞的感染
目的：构建靶向大鼠糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（ GILZ）的siRNA腺病毒载体，并感染体外培养的大鼠L6成肌细胞，为进一步研究GILZ对脓毒症骨骼肌代谢的调控作用提供实验基础。方法（1）设计3条靶向大鼠GILZ mRNA的特异性siRNA序列和1条阴性对照序列，合成各序列的Oligo DNA，退火形成双链后，插入AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切的载体GV119，构建腺病毒穿梭质粒，经测序证实构建成功后，与腺病毒骨架质粒pBHG lox△E1，3 Cre共转染HEK293细胞，获得重组腺病毒，分别命名为Ad－siRNA－1－GILZ、Ad－siRNA－2－GILZ和Ad－siRNA－3－GILZ，扩增纯化后测定病毒滴度。（2）0.1、1.0、10.0μL重组腺病毒在不同类型培养液（完全培养液、Enhanced Infection Solution、含5μg／mL Polybrene的完全培养液、含5μg／mL Polybrene的Enhanced Infection Solution）中感染L6细胞，显微镜下观察L6细胞形态改变和绿色荧光蛋白表达情况，确定佳感染条件。（3）分别以阴性对照病毒（阴性对照组）、Ad－siRNA－1－GILZ（Ⅰ组）、Ad－siRNA－2－GILZ（Ⅱ组）和Ad－siR-NA－3－GILZ（Ⅲ组）感染L6细胞，Real time－PCR检测各组GILZ mRNA的表达量。结果（1）经测序分析和PCR验证，成功构建重组腺病毒载体，经测定滴度为2.0×1010 PFU／mL。（2）10μL重组腺病毒在Enhanced Infec-tion Solution的感染效果佳，感染效率达80％。（3）重组腺病毒感染L6细胞后，细胞无明显坏死，荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达。（4） Real time－PCR结果显示，Ⅱ、Ⅲ组GILZ mRNA表达量与阴性对照组比较差异无统计学意义（ P＞0.05），Ⅰ组GILZ mRNA表达量较阴性对照组明显降低（ P＜0.01），其沉默效率为59.8％。结论成功构建靶向大鼠GILZ的siRNA腺病毒载体，并可在体外细胞水平明显下调GILZ的表达，为后续研究GILZ对脓毒症骨骼肌蛋白代谢的调控作用提供实验基础。
关键词： 脓毒症 糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白 siRNA RNA干扰 腺病毒载体
