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艾滋病毒重组抗原及第三代艾滋病毒抗体EIA诊断试剂盒的研制
近年来中国的艾滋病毒(HIV)感染人数以每年30%的速度增长,HIV感染者总数已超过60万人,感染者已从吸毒人员、献血员等高危人群扩展到社会各个阶层,我国已处于艾滋病泛滥前的关键时期.HIV诊断试剂盒是HIV防制工作中重要的技术工具.用于人群筛检的HIV诊断试剂盒已历经三代,第一代试剂盒主要使用来自细胞培养的HIV病毒的裂解产物作为抗原;第二代产品使用基因工程重组抗原和/或人工合成肽作为抗原,使包被抗原中免疫优势区的比例明显增强,从而提高了试剂的灵敏度,而且标准化生产的相对更纯的抗原的使用使试剂的特异性和重复性均大为提高.前两代试剂均采用间接法原理,即先以抗原包被聚丙乙烯板,再加入待检血清,后加入酶标记的抗人IgG抗体,因此均只能检测IgG抗体.1992年问世于美国的第三代试剂则采用双抗原夹心法,即先以抗原包被,再加入待检血清、酶标记的抗原,从而可同时检测所有类型的抗体,明显提高了试剂的灵敏度,同时由于采取了双抗原识别机制,特异性也得到了明显提高,因此在国外已取代间接法而成为主流试剂.
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甲状腺过氧化物酶B细胞抗原决定簇研究进展
甲状腺过氧化物酶(TPO)作为一种重要的甲状腺自身抗原,在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)的发病机制中占有重要地位.大多数TPO-B细胞抗原决定簇是高度构象性的,并集中于一个有限的区域--免疫优势区(IDR)中,而TPO表位"指纹"也具有一定的指导意义.IDR定位仍不清楚,可能主要由TPO中MPO样区与CCP样区相接的区域高度折叠而构成.TPO中也存在少量的非IDR B细胞抗原决定簇和线性决定簇.TPO-B细胞抗原决定簇及IDR构成、分布、定位等问题的解决很可能有助于阐明AITDs的发病机制,并为开辟特异性分子治疗途径提供理论基础.
关键词： 甲状腺过氧化物酶 自身免疫性甲状腺疾病 B细胞抗原决定簇 免疫优势区 -
重组HIV抗原和多表位抗原的研究
目的研究重组HIV病毒系列抗原,以满足HIV各种抗体检测试剂研究的需要.方法从HIV-1/2不同抗原中精选出优势抗原片段,分别用PCR方法从编码全长HIV-1基因的pBH1OR2/HIV质粒中扩增出HIV-1/gp120、HIV-1/GP41及HIV-1/"M"优势抗原表位,用基因合成法,合成HIV-1/"0"和HIV-2/gp36基因,将获得的各基因片段插入到pBVIL1载体,使其在HB101中表达.利用载体pBVIL1具有使小分子肽基因间可方便连接的特点,选择优势抗原表位进行连接和嵌合表达.结果与结论所克隆的单片段及嵌合抗原均在大肠杆菌中获得了高效的表达,纯化的单片段及多表位嵌合抗原经用间接EIA法对HIV阴性和阳性血清测定,表明抗原已满足抗体检测试剂盒的要求.得到的单片段抗原可用于LIA测定,而多表位嵌合抗原,可用于EIA筛检试剂.
