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肝癌组织hSulf-1基因表达与其甲基化状态的关系
目的 研究肝细胞肝癌组织中人硫酸酯酶-1(hSulf-1)基因甲基化的状态,其mRNA以及蛋白表达情况及与甲基化状态的相关性,探讨hSulf-1基因甲基化在肝癌发生发展中的作用.方法 应用RT-PCR、甲基化特异性PCR及免疫印迹法,测定42例肝癌组织及其癌旁正常组织hSulf-1的mRNA、甲基化及蛋白表达水平,并分析hsulf-1基因表达水平及甲基化与肝癌临床特征的关系.结果 在肝癌组织中,hSulf-1 mRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁正常组织,而正常肝组织几乎检测不到.肝癌组织hSulf-1甲基化率为66.7％ (28/42),而在癌旁正常组织中hSulf-1甲基化率为7.1％ (3/42),二者之间差异有统计学意义(P＜0.05),在hSulf-1 mRNA表达缺失或下调的31例肝癌组织中,其中有25例发生甲基化(x2=8.45,P＜0.05).在肝癌组织中,甲基化组hSulf-1 mRNA及蛋白表达明显低于非甲基化组(分别为0.687±0.092 vs 2.324±0.123,P＜0.01;0.825±0.119 vs 2.212±0.178,P＜0.01).hSulf-1基因甲基化与患者肝硬化密切相关.结论 肝细胞肝癌hSulf-1基因mRNA及蛋白表达明显下降、其甲基化程度明显增高,且hSulf-1基因的甲基化状态与mRNA及蛋白的表达情况具有某种联系,提示hSulf-1基因的甲基化状态可能与肝癌的发生、发展有关.
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Hsulf-1在肝癌细胞系中的作用及STAT3信号通路研究
目的 基于肝癌细胞中人硫酸酯酶-1(human sulfatase-1,Hsulf-1)基因对STAT3信号通路的影响,探讨Hsulf-1基因在肝癌发生发展中的作用.方法 应用RT-PCR方法测定Hsulf-1在肝癌细胞中的表达;通过Western blot方法测定Huslf-1在HGF加入前后对STAT3磷酸化(p-STAT3)水平及下游蛋白的影响.结果 5-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC和曲古抑菌素Actrichostain A,TSA)处理HepG2细胞中Hsulf-1表达增加,且2者具有协同作用;与正常细胞相比,Hsulf-1在肝癌细胞系中(HepG2,Hep3B,Huh-7,SMMC-7221)表达水平下降,在转染pcDNA3.1(+)/Hsulf-1以及pcDNA3.1(+)/STAT3siRNA-Hsulf-1中的HepG2细胞,Hsulf-1的蛋白表达量增加,p-STAT3和c-met的表达水平下降,在未转染组以及转染阴性siRNA的HepG2细胞中,结论则相反.结论 Hsulf-1在肝癌细胞中表达下降;Hsulf-1在肝癌细胞中可抑制由HGF刺激的p-STAT3及下游蛋白的表达水平.
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缺氧环境下HSulf-1,HIF-1α在HaCaT细胞中的表达及HSulf-1过表达载体的构建
目的 探讨HSulf-1,HIF-lα在缺氧时人角质形成细胞株HaCaT细胞中的表达并构建HSulf-1基因过表达载体.方法 Western blot法检测不同缺氧浓度下HaCaT细胞中HSulf-1,HIF-1α蛋白的表达;构建重组质粒pCDH-HSulf-1;Western blot法筛选HSulf-1过表达稳转HaCaT细胞株.结果 HSulf-1在缺氧条件下低表达,与HIF-1α表达呈负相关;成功筛选过表达HaCaT稳定细胞株.结论 HSulf-1低表达,与肿瘤细胞或肿瘤组织中表达一致,过表达可抑制肿瘤细胞增殖.推测过表达HSulf-1可能抑制角质形成细胞的增殖,构建HSulf-1基因过表达载体,便于进一步体内外研究与角质形成细胞增殖的影响.
