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Twist1基因对食管鳞癌迁移和侵袭的影响
目的 研究Twist1基因在食管鳞癌中的表达、临床病理意义及对食管鳞癌迁移和侵袭的影响.方法 选取30例行手术切除的食管鳞癌患者的食管鳞癌组织和癌旁正常组织标本,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot方法检测Twist1 mRNA和蛋白表达水平.以癌旁正常组织Twist1 mRNA表达水平为对照,检测三株食管鳞癌细胞株K70、K140、EC109的Twist1 mRNA相对表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系.选取食管鳞癌细胞株EC109分别采用细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验,分别转染Twist1小干扰RNA及对照双链无义RNA,比较两者之间的变化情况.结果 食管鳞癌组织中Twist1 mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(1.91 ± 0.93比0.54 ± 0.26),差异有统计学意义(P<0.01);三种食管鳞癌细胞株K70、K140、EC109中Twist1 mRNA相对表达水平明显高于癌旁正常组织(2.30 ± 0.34、1.78 ± 0.28和4.37 ± 0.25比1.00 ± 0.48),差异有统计学意义(P<0.05).食管鳞癌组织中Twist1蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织(1.35 ± 0.66比0.25 ± 0.05),差异有统计学意义(P<0.05).食管鳞癌组织Twist1 mRNA相对表达水平与淋巴结转移、浸润程度有相关性(P<0.05).分别转染Twist1小干扰RNA及对照双链无义RNA后食管鳞癌细胞株EC109中Twist1 mRNA表达水平分别为0.45 ± 0.16和1.00 ± 0.20,Twist1蛋白表达水平分别为0.24 ± 0.09和0.58 ± 0.10,两者比较差异均有统计学意义(P<0.05).细胞划痕实验结果表明,运用RAN干扰技术下调Twist1表达后,食管鳞癌细胞株EC109的36和72 h 迁移率明显低于对照双链无义 RNA[(32.6 ± 4.7)%比(16.2 ± 6.0)%和(71.9 ± 4.7)%比(53.2 ± 6.6)%],差异有统计学意义(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,转染Twist1小干扰RNA的EC109穿入小室膜底部的细胞总数较转染对照双链无义RNA明显减少(92.5 ± 8.1比32.7 ± 7.5),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Twist1基因可能在食管鳞癌中普遍异常高表达,其与癌组织浸润、淋巴结转移存在一定相关性,对食管鳞癌细胞迁移和侵袭可能有一定影响.
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膀胱肿瘤组织及尿液标本中TWIST1基因的甲基化水平研究
背景与目的：众多遗传学及表观遗传性的改变引发癌基因的激活剂抑癌基因的失活是膀胱肿瘤发生、发展的重要原因，本研究旨在揭示膀胱肿瘤患者肿瘤组织及尿液标本TWIST1基因的甲基化模式。方法：78例经病理确诊的膀胱肿瘤标本、癌旁正常组织及配对75例尿液标本组成实验组，75例年龄及性别比例匹配的非肿瘤个体组成对照组。从肿瘤、癌旁及尿液标本提取DNA，甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction，MSP)检测肿瘤组织、癌旁组织及尿液标本中TWIST1基因的甲基化水平，检测结果与尿细胞学检测结果进行对比，比较两种检测方法的灵敏度及特异度。结果：甲基化检测结果显示，88.5%的肿瘤标本及84.0%的尿液标本出现TWIST1基因的甲基化，11.5%的癌旁正常组织及5.3%的对照尿液标本出现甲基化。尿细胞学检测结果显示，49.3%的肿瘤患者尿液标本检测出瘤细胞，17.3%的对照者被诊断为肿瘤或疑似肿瘤。尿液标本甲基化检测灵敏度及特异度显著高于尿细胞学检测方法。针对低级别肿瘤， TWIST1基因甲基化检测灵敏度为66.7%，高于尿细胞学检测(33.3%)。结论：TWIST1基因甲基化水平检测可作为一种简单、非侵入、敏感及特异的方法应用于早期膀胱肿瘤诊断筛查。
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Twist1基因对膀胱癌上皮间质转化的影响
目的：探讨Twist1基因对膀胱癌上皮间质转化（EMT）过程的影响。方法：上调Twist1基因的表达，实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测膀胱癌细胞中EMT相关基因表达情况。结果：Twist1基因成功转染进膀胱癌T24细胞，转染Twist1的细胞中Twist1 mRNA表达量是转染空载细胞中的11920倍。转染Twist1组表达量为空载组snail11.2倍，snail21.2倍，E-cadherin 0.8倍，Fibronectin 3.2倍，N-caderin 1.5倍和Vimentin mRNA 1.2倍。结论：Twist1在膀胱癌细胞EMT过程中起到一个正性调控作用，能够促进膀胱癌细胞EMT过程。
关键词： 膀胱癌 Twist1基因 上皮间质转化 实时定量聚合酶链反应 -
肿瘤相关成纤维细胞高表达Twist1增强卵巢癌侵袭能力
目的:检测肿瘤相关成纤维细胞Twist1基因表达,探讨肿瘤相关成纤维细胞高表达Twist1对卵巢癌侵袭能力的影响.方法:CSIOVDB数据库检索Twist1基因在卵巢各种组织类型中的表达水平.分离原代正常成纤维细胞(NOF),以及卵巢癌患者的原代肿瘤相关成纤维细胞(CAF),免疫荧光实验验证Twist1基因在NOF和卵巢癌CAF细胞中的表达差异.TCGA数据库489例卵巢癌中从mRNA水平验证Twist1与CAF经典活化指标FAP的相关性,以及炎症因子IL-6的相关性.GSEA(Gene Set Enrichment Anal-ysis)软件探究CAF高表达Twist1与IL-6通路富集的关系.Western blot法验证下调Twist1基因对IL-6表达的影响.Transwell实验探究卵巢癌CAF-肿瘤细胞共培养体系中IL-6对卵巢癌细胞系SKOV3侵袭能力的影响.结果:Twist1基因在卵巢癌CAF中的表达水平明显高于肿瘤细胞和正常成纤维细胞.TCGA数据库中Twist1基因和FAP及IL-6基因呈显著正相关(P<0.0001).GSEA软件分析结果示,卵巢癌患者中CAF高表达Twist1的同时,肿瘤上皮表现为IL-6通路明显富集(P<0.05,FDR<25％).Western blot法结果表明,Twist1基因下调后,IL-6基因表达量明显降低.在共培养体系中加IL-6中和抗体,卵巢癌细胞侵袭力明显下降.结论:肿瘤相关成纤维细胞高表达Twist1,可能通过提高IL-6水平增强卵巢癌侵袭能力.
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实时荧光定量PCR检测膀胱癌TWIST1基因启动子的甲基化状态
目的 建立针对TWIST1基因启动子甲基化状态的荧光定量检测方法,进而评估其在膀胱癌临床研究的应用前景.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测南通地区50例确诊膀胱癌患者和25例非膀胱癌的健康对照者的尿液标本中TWIST1基因启动子的甲基化和非甲基化含量,对其甲基化率进行对比.结果 正常人的TWIST1启动子的甲基化率为8.1%～17.3%,平均值为12.3%,膀胱癌患者的甲基化率为25.2%～48.3%,平均值为38.2%.膀胱癌患者的TWIST1基因启动子甲基化率有明显的增高(P<0.05).结论 TWIST1基因启动子区在膀胱癌中异常甲基化,能够作为有效检测膀胱癌的基因.
