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microRNA-630对胃癌细胞HGC-27增殖、凋亡能力的影响
目的 探讨miR-630对胃癌细胞HGC-27增殖、凋亡能力的影响,发现miR-630在胃癌发生发展中所发挥的作用,寻找胃癌发生背后的分子机理和机制,帮助找到新的胃癌临床诊断标志物,甚至开发新的临床治疗方法.方法 使用脂质体将miR-630 mimics和inhibitor转染HGC-27细胞,同时以mimics control、inhibitor control作为阴性对照.采用细胞增殖实验观察miR-630对胃癌细胞HGC-27增殖能力的影响.采用流式细胞术检测miR-630对胃癌细胞HGC-27凋亡情况的影响.结果 细胞增殖实验显示,miR-630 mimics可以抑制胃癌细胞HGC-27的增殖能力,而inhibitors可以促进胃癌细胞HGC-27的增殖能力;流式细胞术结果显示,miR-630 mimics可以促进胃癌细胞HGC-27的凋亡,而inhibitors则抑制胃癌细胞HGC-27的凋亡,说明miR-630不仅抑制胃癌细胞HCC-27的增殖同时促进其凋亡,实验结果差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-630能通过促进胃癌细胞HGC-27的凋亡抑制胃癌细胞增殖,可能在胃癌的发生和进展中发挥重要作用.
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藤梨根有效组分抑制胃癌BGC-823细胞增殖与迁移作用的研究
目的 研究藤梨根有效组分对胃癌BGC-823细胞的体外增殖、迁移能力的影响,并初步探讨其相关机制.方法 利用不同浓度的藤梨根粗多糖与总三萜组合(熊果酸、齐墩果酸)处理细胞,MTT法检测细胞增殖活性,确定藤梨根有效组分佳配比,划痕实验观察藤梨根有效组分对细胞运动能力的影响,Transwell小室模型研究其对细胞迁移能力的影响,基因芯片分析抑制BGC-823细胞增殖与迁移相关基因表达,qPCR检测miR-630基因的表达水平.结果 与空白对照组相比,当藤梨根粗多糖的浓度为0.5 g/L,熊果酸与齐墩果酸的浓度比为8∶1,各成分之间具有强协同作用,确定为藤梨根有效组分,其可显著抑制BGC-823细胞增殖与迁移,基因芯片分析和qPCR结果表明与其增加miR-630表达相关.结论 藤梨根有效组分能显著抑制胃癌BGC-823细胞的体外增殖和迁移能力,其机制可能与miR-630的表达水平增加有关.
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miR-630在OSF及伴OSF的OSCC组织中的表达研究
目的:研究微小RNA-630 (miR-630)在口腔黏膜下纤维性变(OSF)和伴OSF口腔鳞癌组织中的表达,初步探讨miR-630在口腔鳞癌及OSF癌变发生发展过程中的作用.方法:采用实时荧光定量PCR (real-time q-PCR)检测13例正常黏膜组织(A1组)、12例OSF组织(A2组)、22例伴OSF口腔癌癌旁组织(A3组)及相对应伴OSF口腔癌组织(A4组)中miR-630表达,用SPSS 19.0分析比较miR-630的表达含量.结果:伴OSF口腔癌组织与正常口腔黏膜组织相比,miR-630的表达升高(P＜0.05);伴OSF口腔癌癌旁组织与正常口腔黏膜组织相比,miR-630的表达升高(P＜0.05);伴OSF口腔癌组织与OSF黏膜组织相比,miR-630的表达升高(P＜0.05);伴OSF口腔癌癌旁组织与OSF黏膜组织相比,miR-630的表达有升高(P＜0.05):伴OSF口腔癌组织与伴OSF口腔癌癌旁组织相比,miR-630的表达有升高的趋势,但未见显著统计学差异(P＞ 0.05);OSF黏膜组织与正常口腔黏膜组织相比,miR-630的表达无统计学差异(P＞0.05).结论:miR-630在伴OSF口腔鳞癌组织中表达较正常黏膜组织及OSF组织均显著增加,其异常高表达可能与口腔癌及OSF癌变的发生、发展相关.
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miR-630调控BCL2抑制肺癌细胞的生长
目的 为了揭示小分子RNA miR-630抑制肺癌细胞生长的作用,阐明其通过靶向抑制BCL2来发挥作用的分子机制.方法 以CCK8检测细胞活力来评估细胞增殖的状况;以BD FACSCalibur流式细胞仪检测并分析细胞周期各个时期的变化;以mirPath和RNAhybrid两个生物信息学工具预测miR-630的下游靶点.通过一系列如PCR、琼脂糖胶回收、限制性克隆位点酶切链接以及质粒小提和大提等克隆工具,将miR-630基因构建到miRNA表达质粒pmR-mcherry载体,使用Lipofectamine 2000转染miR-630表达质粒至细胞内以在体外表达miR-630;以Western blot检测BCL2蛋白的表达.结果 成功构建表达miR-630的表达质粒,与对照组相比较,pmR-premiR630表达质粒转染48 h和72 h后miR-630的表达水平增高了(4.49±0.59)和(9.16±1.50)倍(P均＜0.05).与对照空质粒转染48 h和72 h后细胞活力为1.26±0.09和1.84±0.03相比较,miR-630表达质粒转染48 h和72 h后细胞活力降低到0.89±0.09和1.34±0.23(P均＜0.05).细胞转染miR-630表达质粒转染48 h后细胞周期中S期降低.生物信息学预测到BCL2是miR-630的一个靶点.与对照组相比较,pmR-premiR630表达质粒转染48 h和72 h后BCL2蛋白的表达分别下降了(0.6±0.03)和(0.4±0.01)倍(P均＜0.05).细胞转染miR-630表达质粒后BCL2蛋白表达降低.结论 miR-630通过抑制BCL2表达来抑制肺癌细胞的生长.
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MicroRNA-630的表达与胃癌患者预后相关性
目的 在众多microRNAs中,MiR-630在人类恶性肿瘤的多种生物学功能中具有复杂的调控作用,本研究主要探讨胃癌患者组织中miR-630的表达与胃癌患者预后的关系.方法 收集236例未接受术前新辅助化疗的胃癌患者肿瘤组织及癌旁组织.用qPCR检测miR-630的表达,统计学分析其与患者术后预后的关系.结果 与癌旁组织相比,miR-630的表达水平在癌组织中高表达,并与胃癌侵袭、淋巴结转移、远处转移和TNM分期相关.生存分析显示miR-630高表达与总体生存差相关.多因素分析显示,miR-630是预测胃癌术后生存的独立预后因素.结论 miR-630在胃癌组织中高表达,与肿瘤进展相关,是预测胃癌患者术后生存的独立预后因素.
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miR-630通过靶向BMI1抑制乳腺癌细胞增殖的作用机制研究
目的 探讨miR-630通过靶向BMI1对乳腺癌细胞的生物学行为影响及其作用机制.方法 倒置显微镜下观察检测MiR-630诱导乳腺癌细胞凋亡并抑制增殖的情况;流式细胞术和集落形成实验检测miR-630对细胞周期和集落形成的影响;双荧光素酶实验检测miR-630和BMI1在乳腺癌细胞中的相互作用;流式细胞术和集落形成实验检测BMI1对miR-630在细胞周期和集落形成过程中的逆转作用.结果 miR-630可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡进程;miR-630的异位表达可以诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,抑制乳腺癌细胞的克隆增殖行为;BMI1是miR-630的直接靶基因,miR-630可以直接调控BMI1的表达活性;BMI1异位恢复时,miR-630的增殖和集落形成的抑制能力也得到了部分恢复.结论 miR-630在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可以和BMI1相互影响调控乳腺癌细胞的生物学行为.
