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新型隐球菌动物模型的建立及PCR快速诊断
目的 建立从活检肺组织中进行隐球菌PCR诊断的小鼠模型.方法 向BALB/c小鼠气管插管内注入隐球菌菌液制成小鼠隐球菌感染模型,取肺组织匀浆提取DNA进行PCR诊断.结果 从位于新型隐球菌基因组的编码核糖体RNA(rRNA)和位于其中的内部转录区(internal transcribed spacer,ITS-1和ITS-2)基因位点的8对引物中筛选出1对引物(ITSI-CN4),其对从活检肺组织中诊断新型隐球菌具有较好的敏感性和特异性.结论 成功建立了从活检肺组织中进行隐球菌PCR诊断的小鼠模型.从8对引物中筛选出的1对引物(ITSI-CN4)对从活检肺组织中诊断新型隐球菌具有较好的敏感性和特异性.
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宿主DNA对埃立克体病PCR诊断的抑制作用研究
目的:优化埃立克体病的PCR诊断方法.方法:构建含有查菲埃立克体16S rRNA基因片段的重组载体.比较巢式PCR和普通一步法PCR的灵敏度差异.用RAW264.7细胞DNA模拟实验室诊断时的宿主细胞DNA,评估宿主细胞DNA对巢式PCR效率的影响.添加BSA作为优化剂,探讨BSA是否能降低宿主DNA的干扰.结果:巢式PCR可以扩增出特异性产物的低模板量为103拷贝,一步法PCR是105拷贝.50～100 ng的宿主细胞DNA能够降低巢式PCR的效率.BSA可以降低宿主细胞DNA对PCR的抑制作用.结论:巢式PCR的灵敏度明显高于一步法PCR;BSA可以降低宿主细胞DNA干扰,提高PCR的效率.建议埃立克体病的诊断应尽量选择巢式PCR,必要时可加入适量的BSA以提高灵敏度.
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禽白血病病毒J亚群(ALV-J)的血清学调查及PCR诊断
禽骨髓细胞性白血病(myeloid leucosis)(或称禽骨髓细胞瘤,myelcytomatomatosis)(ML)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus)J亚群(ALV-J)引起的禽的一种肿瘤性传染病[1],ALV-J是英国的Payne于1991年从肉鸡中分离出来的一个新的囊膜亚群[2,3].对ALV-J的原型株,HPRS-103的致病性和传播的研究中发现,本病毒能诱导肉鸡产生骨髓细胞瘤病(ML)、肾瘤和其它多种肿瘤,死亡率为1%～2%,偶尔可高达20%.由于本病毒为ALV和禽内源性反转录病毒囊膜(E51)的重组体[4,5],因此其可通过水平传播和垂直传播迅速地感染整个鸡群,使鸡群在短时间内遭受灭顶之灾.近十年来,在许多国家,包括美国在内的肉鸡中,ML已经是引起死亡和其它生产性问题的严重原因.
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特异性标签序列快速鉴定乙肝病毒B、C基因型的方法及应用
目的 建立一种乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)基因分型方法,并观察其临床应用效果.方法 利用HBV大S区的型间特异性位点密集序列,建立了一种直接多重PCR方法,并对重庆地区250例临床样本进行应用性观察.结果 使用该方法对重庆地区250例随机临床HBV阳性血清进行了检测,结果显示B基因型占73.6% (184/250),C基因型占16.4% (41/250),BC混合型占6.4% (16/250),总检出率为97%左右,与重庆周边地区HBV基因型的区域分布具有一致性.结论该方法能够快捷而准确地鉴定乙肝病毒B、C基因型.
