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OT强阳性新兵血清抗38KDa抗体检测的意义
目的:调查新兵亚临床结核感染与OT试验强阳性的相关性,探讨军队结核病预防新措施.方法:采用ELISA和免疫层析法分别检测了10 399名新兵中OT强阳性者血清抗38KD.抗体和抗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗体;对抗体阳性者作为期3个月随访和1年信访.结果:OT强阳性新兵血清抗LAM抗体均为阴性;无卡痕和有卡痕OT强阳性组血清抗38KD.抗体阳性分别有5例和1例,阳性比率分别为3.96%和0.56%,差异显著(P＜0.05).抗体阳性者3个月随访发现:无卡痕OT强阳性组有3例新兵出现结核体质特征或症状,其中2例1年内诊断为胸膜炎结核,1例因身体不适调离原工作岗位.结论:血清抗38KDa抗体水平与新兵结核菌亚临床感染有关.OT强阳性且38KDa抗体阳性新兵,应给于3个月预防性抗痨治疗.
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猪链球菌2型溶血素基因与38KDa蛋白基因克隆及联合表达
目的:研究有效的猪链球菌病疫苗.方法:以四川株猪链球菌2型基因组DNA为模板分别扩增溶血素基因和38KDa基因主要功能区基因;并经连接、克隆及酶切鉴定.分别构建原核表达栽体pET32a-Sly、pET32a-38KDa,提取阳性克隆质粒分别进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片断,将目的片断定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达.结果:重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量约为60Ku的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western-blotting)证实该重组蛋白可以与SS2阳性血清发生特异性反应.结论:本研究为重组蛋白的免疫保护应用奠定基础.
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重组结核分枝杆菌38kDa蛋白的表达、纯化和复性及免疫特性的研究
目的 构建结核分枝杆菌38kDa的重组质粒,在大肠杆菌中表达、纯化和复性重组蛋白,并评价其在结核病血清学诊断方面的价值.方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出psts1基因片段,连接到表达载体PET30a中,在大肠杆菌中表达;应用组氨酸标签(His-Tag)纯化重组蛋白;在PBS中通过半透膜恢复重组蛋白的天然结构.结果 构建了含38kDa重组质粒的大肠杆菌工程菌,并以包涵体形式表达重组蛋白38kDa,其占细胞总蛋白的55%;重组蛋白变性后经镍柱纯化,其纯度达90%以上;通过半透膜完全恢复重组蛋白的天然结构,经蛋白印迹证实重组蛋白能与结核杆菌多克隆抗体结合.结论 具有天然结构和高纯度的重组融合蛋白有可能成为有效的结核病血清学诊断的候选抗原.
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检测脑脊液结核抗体对结核性脑膜炎的诊断价值
目的 观察脑脊液中结核分枝杆菌特异性抗体检测对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值. 方法 按照TBM的临床诊断标准和排除标准,选择临床确诊TBM病例30例为研究对象,并选择35例非结核性中枢神经系统疾病作为对照组.收集每个病人在首次腰穿的脑脊液和当天的静脉血标本,用胶体金标记方法进行检测.结果实验组脑脊液检测的阳性率显著高于对照组(P<0.01),实验组血清的检测阳性率也显著高于对照组(P<0.01).脑脊液的敏感度为83.33%,特异度为88.57%;血清的敏感度为70%,特异度为77.14%.脑脊液与血清的检测的阳性率比较无显著差异(P>0.05). 结论 此种混合抗原是一种简便、快捷的诊断TBM的辅助方法.
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重组结核分枝杆菌38KDa蛋白用于军人结核分枝杆菌感染筛查
目的 评价重组结核分枝杆菌蛋白38KDa皮试注射液(rTPA38)用于军人结核分枝杆菌感染筛查的价值.方法 以结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)为对照,采用同体双臂Mantoux法(皮内注射)为1 150人同时做PPD和rTPA38皮试；皮试后24 h,48 h双盲测量皮试反应(包括红晕或硬结).PPD和rTPA38皮试阴性者接种卡介苗,3个月后同前进行皮试试验.结果 局部皮肤红晕(或硬结)横、纵平均直径≥5 mm为阳性.24.6％受试者rTPA38皮试反应阳性,阳性反应直径集中于5 mm～10 mm;53.0％受试者PPD皮试反应阳性,阳性反应直径集中于5 mm～15 mm.rTPA38皮试反应阳性率随年龄增长基本呈现上升趋势,同一年龄段,rTPA38皮试反应阳性率明显低于PPD( P＜0.01).有卡痕与无卡痕受试者rTPA38皮试反应阳性率比较、统计学分析差异有极显著性意义(x2=27.06,P＜0.01).PPD皮试阳转率与rT-PA38皮试阳转率分别为62.0％和27.2％,两者比较差异有极显著性意义(x2=52.90,P＜0.01).结论 rTPA38可作为结核分枝杆菌感染筛查的诊断试剂.
