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瘦素对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源盒基因-1表达的调节作用
目的:研究不同浓度瘦素对大鼠胰岛细胞PDX-1基因表达的影响,在基因转录调节因子水平探讨其在肥胖2型糖尿病发病中的作用.方法:不同刺激浓度瘦素(0 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、 25 ng·mL-1、 50 ng·mL-1、 102 ng·mL-1、 103ng·mL-1)与葡萄糖浓度分别为 2.2 mmol·L-1、 5.5 mmol·L-1、 11.1 mmol·L-1的RPMI1640营养液共培养 24 h 后,提取细胞总RNA.运用RT-PCR技术检测PDX-1基因表达的变化.结果:葡萄糖浓度为 2.2 mmol·L-1、 5.5 mmol·L-1、 11.1 mmol·L-1 时,各种浓度的瘦素对PDX-1基因的表达均无明显影响.结论:瘦素对PDX-1表达无明显调节作用.
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RNA干扰同源盒A10基因表达可逆转白血病K562细胞多药耐药性
目的:本研究通过建立高效干扰同源盒A10(homeobox A10,HOXA10)基因表达的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,探讨RNA干扰技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法:构建靶向HOXA10基因的真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体将其转染入K562细胞,G418筛选4周.RT-PCR鉴定重组载体稳定转染的细胞株.MTT法检测细胞在转染前后对长春新碱(leurocristine,VCR)、足叶乙苷(etoposide,VP-16)的敏感性变化.FCM法检测各组细胞的凋亡率.结果:经G418筛选后,反转录PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)证实成功建立了pGPHI/GFP/Neo-HOXA10 稳定转染的细胞克隆.MTT结果显示,基因干扰组细胞的半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)值明显低于对照组(P＜0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强.FCM检测结果表明,基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).而转染阴性对照组的IC50值及细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:以HOXA10基因为靶标构建的shRNA表达载体能明显增强VCR和VP-16对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性.提示HOXA10基因表达被RNA干扰可以在一定程度上逆转白血病细胞的多药耐药性.
