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壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:粒径对转染效率的影响
研究粒径对壳聚糖(chitosan,CS)纳米粒介导的转染效率的影响.通过调整CS溶液加入质粒基因(plasmid DNA,pDNA)溶液的速度和涡旋时间制备250,580和1 300 nm粒径pDNA/CS纳米粒,研究粒径对CS介导的细胞转染效率的影响.为深入探讨粒径对转染效率的影响,考察了3种粒径pDNA/CS纳米粒的药剂学性质,对抗核酸酶作用和细胞对纳米粒的吸附和摄取行为.结果表明:本文制备的3种粒径纳米粒的药剂学性质和凝聚pDNA的能力等特性基本无差别,均能有效保护pDNA免受核酸酶降解;在HEK293细胞中的转染效率无显著差异;与细胞共孵育4 h,流式细胞仪测定的三者细胞摄取率与摄取量相似;荧光显微图像显示3种粒径纳米粒均以小聚集体形式吸附于细胞表面,激光扫描共聚焦显微图像显示直径约为2 μm小聚集体较易被细胞内吞入胞.因此粒径在250～1 300 nm中对壳聚糖纳米粒介导的细胞转染率基本无影响.
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PFNA治疗股骨转子间骨折63例疗效分析
目的 对股骨转子间骨折患者应用股骨近端防旋髓内钉(PFNA)治疗的临床效果展开观察与分析.方法 选取我院收治的63例股骨转子间骨折患者为研究对象,随其展开PFNA内固定治疗,并对临床疗效进行观察与统计.结果 本组患者平均手术时间为(76.4±9.5)min,平均术中出血量为(175.3±77.2)mL.术后经髋关节功能评分(Harris),患者治疗优良率为85.7%.经过为期9~36个月的随访,患者平均骨性愈合时间为(16.2±0.6)周,未出现内固定切出或髋内翻等并发症.结论 通过对股骨转子间骨折患者进行PFNA内固定治疗,可有效提高其近期疗效,减少并发症发生,实现患者生存质量的提高,值得临床推广应用.
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壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:制备,特征和对DNA的保护
目的:制备载基因壳聚糖纳米粒,研究纳米粒药剂学特征以及对DNA的保护作用.方法:复凝聚法制备纳米粒,对纳米粒的形态、粒径及分布、Zeta电位、包封率、载药量和处方影响因素进行了考察,凝胶阻滞法分析壳聚糖和pDNA的聚合方式,pDNA保护性试验考察壳聚糖纳米粒抵抗核酸酶的能力.结果:制备的pDNA/壳聚糖纳米粒为结构较紧密的不规则球形,平均粒径为(240.4±13.2)nm,多分散指数为(0.173±0.05),Zeta电位为(18.4±0.6)mV,包封率为(95.2±1.9)%,载药量为(30.7±0.8)%.凝胶阻滞分析结果表明,纳米粒荷正电,pDNA与壳聚糖之间通过静电作用而完全结合.纳米粒的粒径、Zeta电位受处方中的壳聚糖相对分子质量、N/P(壳聚糖中伯胺基数目/pDNA中磷酸基数目)比、pDNA浓度、Na2SO4浓度和pH值等因素影响.pDNA保护性试验表明,壳聚糖纳米粒对pDNA有保护作用.结论:壳聚糖可以有效凝聚pDNA,采用复凝聚法可制得200～500 nm范围荷正电的纳米粒,有较高的包封率和载药量,可有效保护pDNA免受核酸酶降解.壳聚糖作为黏膜给药的非病毒基因载体具有应用价值.
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PicoGreen荧光法结合茚三酮比色法测定载pDNA壳聚糖纳米粒中pDNA的包封率和载药量
目的:建立微量DNA和壳聚糖的含量测定方法,用于测定载pDNA壳聚糖纳米粒中pDNA的包封率和载药量.方法:利用PicoGreen荧光染料与双链DNA特异结合后激发产生荧光,检测荧光强度,建立标准曲线,测定纳米粒混悬液中游离的pDNA含量;利用茚三酮和壳聚糖分子上的伯氨基发生显色反应,紫外法测定吸收度,建立标准曲线,测定纳米粒混悬液中游离的壳聚糖含量;按照游离的pDNA和壳聚糖含量分别计算纳米粒中pDNA的包封率和载药量.结果:PicoGreen荧光法的线性范围1～50 ng·mL~(-1),低、中、高3种浓度的回收率分别为103.4%,97.6%,98.7%,相应RSD分别为1.0%,0.1%,0.2%(n=3).茚三酮比色法的线性范围0.5～10μ·mL~(-1),低、中、高3种浓度的回收率分别为104.0%,98.6%,97.9%,相应RSD分别为3.3%,0.6%,1.7%(n=3).2种分析方法的甘内和日间精密度RSD均小于5%(n=5).测定纳米粒中pDNA的包封率为(99.67±0.12)%,RSD为0.12%(n=3);载药量为(50.90±1.71)%,RSD为3.4%(n=3).结论:本文建立的PicoGreen荧光法和茚三酮比色法灵敏度高,准确可靠,可以用于载pDNA壳聚糖纳米粒中pDNA的包封率和载药量的测定.
